动物检疫学-第二章动物检疫程序与方法课件

第二章

动物检疫程序与方法1第一节动物检疫方式与程序

一、动物检疫方式（一）现场检疫

1、现场检疫的概念是指动物在交易、待宰、待运或运输前后以及到达口岸时，在现场集中进行的检疫方式。现场检疫方式适用于内检和外检的各种动物检疫，是一种常用而且必要的检疫方式。22、现场检疫的内容（1）验证查物

验证：有无检疫证明、是否合法有效查物：核对被检动物的种类、品种、数量等。33、某些情况下的现场临诊检疫内容（1）疫情调查（2）病理剖检

（3）实验室检查

（4）消毒和病死动物处理

5（二）隔离检疫

1、隔离检疫的概念

隔离检疫是指将动物放在一定条件的隔离场或隔离圈（列车箱、船舱）进行的检疫方式。主要用于出入境检疫，准备出境动物的产地检疫，动物在运输前、后及过程中发现有或可疑有传染病时的运输检疫，种畜禽调运前后的检疫，建立健康畜群时的净化检疫。62、隔离检疫的条件（1）相对偏僻

（2）有隔离设施

（3）有消毒和尸体处理设施

（4）其他条件

7（三）净化检疫

1、概念亦称疫区检疫，是指在国内某地发生规定的检疫对象流行时进行的检疫。2、意义

3、净化检疫的要求迅速确诊、追查疫源、摸清分布、尽快控制。

9二、动物检疫程序

（一）国内动物及动物产品检疫的主要程序1、申报和出检动物和动物产品在出售或调出离开产地前，货主须向所在地动物检疫监督机构提前报检。动物产品、供屠宰或育肥的动物提前3天报检；种用、乳用或役用动物提前15天报检。因生产特殊需要出售、调运和携带动物或动物产品的随报随检。102、现场检疫动物卫生监管机构接到检疫申报后，应当及时指派官方兽医对动物、动物产品实施现场检疫。“现场”包括动物养殖场、集中地、屠宰场、动物产品加工基地等。3、合格者出具检疫证明，不合格者进行销毁或无害化处理。11第二节动物检疫的基本方法

常用的检疫方法有流行病学调查、临诊检查、病理学检查、病原学检查和免疫学检查法等方法。这些方法并非在检查每一种疫病时、每次诊断都要用上，而是根据不同的情况，应用其中几种方法。13

一、流行病学调查

1、流行病学的概念流行病学是研究动物群体某种疫病的发生、发展以及消灭规律的科学，即研究动物疫病流行过程的规律。142、流行病学调查分析的目的流行病学调查是要查明动物疫病发生的原因、传播条件、流行规律，并拟出有效的防制措施。流行病学分析是应用流行病学调查材料，进行加工整理，综合分析，得出流行过程的客观规律，并对预防扑灭措施做出正确的评价。流行病学分析从调查材料中找出规律，用以指导防疫实践。15流行病学调查的步骤与内容（1）拟订流行病学调查表（2）实施调查（3）整理分析（4）得出结果（5）结论报告175流行病学调查分析中常用的频率指标（1）发病率是表示在动物中一定时期内某病的新病例发生的频率。发病率能较完全的反映出疫病的流行情况，但还不能说明整个流行过程，因为常有许多动物成隐性感染，而同时又是传染源。

18(2）患病率（流行率、病例率、现患率）是指在某一指定时间内动物中存在某病病例数的比率。

19（4）死亡率

是指某病死亡数占某种动物总头数的百分比。它表示该病在动物群中造成死亡的频率，而不能说明病情发展特性，仅在发生死亡数很多的急性传染病中，才能反映出流行的动态。

21（5）致死率（病死率）是指某病死亡的动物头数占该病患病动物总头数的百分比。它能表示某病临床上的严重程度，比死亡率更为精确地反映出疫病的流行过程。

22二、临诊检疫技术

临诊检查是诊断动物疫病的最基本的方法，是利用人的感官或借助一些简单的器械，如体温计、听诊器等直接对动物外貌、体态、排泄物、体温、脉搏、呼吸等进行检查。动物临诊检查应用于产地、运输、屠宰等流通环节的动物检疫中，是动物检疫中最常用的方法。231群体检查群体划分：同一来源、同一批次、或同一圈舍的动物化为一群。禽、兔、犬还可以按笼、舍划分。运输检验时,可以按车、船、仓等批次进行。

25群体检查方法检查方法静态检查动态检查饮食状态检查26群体检查方法（3）饮食状态检查：检查进食、吞咽和反刍时的反应状态。注意有无少食、少饮、贪饮、异常采食、吞咽困难、呕吐等情况。

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2、个体检疫个体检疫是指对群体检疫中检出的可疑病态动物进行系统的个体临诊检查。其目的在于初步鉴定动物是否患病、是否为检疫对象，然后根据需要进行必要的实验室检疫。一般对在群体检疫中无病的动物也要按5%-20%抽样做个体检疫。若个体检疫发现患病动物，应再抽检10%；必要时，应全部进行个体复检。30个体检查方法方法分类看听摸检31个体检查方法1.看：观测外部表现，精神、行为、姿态、被毛；皮肤、口蹄、趾间有无肿胀、水疱、脓泡及溃疡等；可视粘膜是否苍白、潮红、黄染，有无分泌物或炎性分泌物等。2.听：直接听动物的叫、咳；听诊器听心、肺、和胃肠蠕动声音。323.摸：脉搏，耳、皮温度，淋巴结大小、形状、硬度和有无肿胀，皮肤有无结节和出血点。4.检：检查“三数”，即体温、脉搏、呼吸数。“三数”是动物生命活动的重要生理指数，其变化可提示许多疫病。要在充分休息和静态下检查。

33几种常见动物指标表畜禽

体温（℃）呼吸（次/分）

脉搏（次/分）猪38.0-40.012-2060-80牛37.5-39.510-3040-80羊38.0-40.012-2070-80鸡40.0-42.015-30120-140鸭41.0-43.016-28140-200鹅40.0-41.012-20120-16034（一）视诊利用视觉或利用简单器械对患病动物的状态和病变进行观察的方法。1、肉眼视诊视诊时一般先不要靠近动物，也不宜进行保定，应尽量使动物取自然的姿态。检查者应先站在离动物适当距离处，首先观察其全貌，然后由前往后、从左到右、边走边看，观察动物的头、颈、胸、腹、脊柱、四肢；当至正后方时，应注意尾、肛门及会阴部，并对照观察两侧胸、腹部是否有异常；最后再接近动物，进行细部检查。352、器械视诊借助器械观察动物自然孔腔内的病理变化，如使用手电筒、鼻镜、直肠镜等各种照明、反射和内腔视诊器械。36检查内容A、精神状态的检查健康动物两眼有神，反应敏捷，动作灵活，行为正常；若有过度兴奋或抑制，则表现中枢神经机能紊乱。精神兴奋的动物，表现惊恐不安，狂躁不驯，甚至攻击人畜，多见于侵害中枢神经系统的疫病（如狂犬病、李氏杆菌病等）。37精神抑制的动物，轻则沉郁，呆立不动，反应迟钝；重则昏睡，只对强烈刺激才产生反应；严重时昏迷，倒地躺卧，意识丧失，对强烈刺激也无反应。见于各种热性病或侵害神经系统的疾病等。38B、营养状况的检查营养良好的动物，肌肉丰满，皮下脂肪丰富，轮廓丰圆，骨骼棱角不显露，被毛有光泽，皮肤富有弹性；营养不良的动物，则表现为消瘦，骨骼棱角显露，被毛粗乱无光泽，皮肤缺乏弹性；多见于慢性消耗性疫病（如结核病、肝片吸虫病等）。39C、姿态与步样的检查健康动物姿势自然，动作协调而灵活，步态稳健。病态状态下，有的动物站立异常，如破伤风患畜形似“木马状”；神经型马立克氏病病鸡两腿呈“劈叉”式姿势；有的动物强迫性躺卧，不能站立，如猪传染性脑脊髓炎；40有的动物站立不稳，如鸡新城疫病鸡头颈扭转，站立不稳甚至伏地旋转；有的动物盲目转圈，如李氏杆菌病；有的则步态异常，左摇右摆，多是脑部受损所致；跛行，则由神经系统受损或四肢病痛所致。4142D、被毛和皮肤的检查健康动物的被毛（羽毛）柔顺而有光泽、不易脱落，皮肤颜色正常，无肿胀、溃烂、出血等。患病动物的被毛和皮肤常发生不同的变化而提示某些疫病，在慢性消耗性疫病（如结核病）或内寄生虫时，动物往往被毛粗乱无光泽，脆而易断、易脱毛；43患疥螨和湿疹的动物，患部脱毛，伴有皮肤增厚、变硬、擦伤和啃咬伤；猪瘟病猪在四肢、腹部及全身各部皮肤有指压不褪色的小点状出血，而猪丹毒病猪则呈现指压褪色的菱形或多角形红斑。正常鸡的冠、髯红润；若发白，则为贫血的表现；呈蓝紫色，则为缺氧的表现（如鸡新城疫病鸡冠髯黑紫）。44E、反刍和呼吸的检查主要检查呼吸运动（包括呼吸频率、类型、节律及呼吸强度），看有无呼吸数增多或减少、有无胸式呼吸或腹式呼吸、有无病理性呼吸节律及呼吸困难等。同时，检查反刍动物的反刍情况。

45F、可视黏膜的检查包括眼结膜、口腔黏膜、鼻黏膜和阴道黏膜，黏膜具有丰富的微血管，根据其颜色的变化，可推断血液循环状态和血液成分的变化。临诊时主要检查眼结膜。正常情况下，马的黏膜颜色呈淡红色；牛的黏膜颜色呈淡粉红色（水牛的较深）；猪、羊的黏膜颜色呈粉红色；犬的黏膜为淡红色。46黏膜苍白见于各型贫血和慢性消耗性疫病，如马传染性贫血；黏膜潮红，表示毛细血管充血，除局部炎症外，多为全身性血液循环障碍的表现；弥漫性潮红见于各种热性疫病和广泛性炎症；树枝状充血见于心机能不全的疫病等；黏膜发绀见于呼吸系统和循环系统障碍；黄染是血液中胆红素含量增高所致，见于肝病、胆道阻塞及溶血性疾病；黏膜出血，见于有出血性素质的疫病，如马传染性贫血、梨形虫病等。47在检查眼结膜的同时，检查天然孔及分泌物等，眼角有大量分泌物是眼结膜分泌亢进的表现，见于结膜炎、感冒、钩端螺旋体病、牛恶性卡他热等。口腔黏膜有水疱或烂斑，可提示口蹄疫或猪传染性水疱病；猪鼻盘干燥或干裂，应注意有无热性疫病；马鼻黏膜的冰花样瘢痕，则是马鼻疽的特征病变。48G、排泄动作及排泄物的检查排泄情况能提示消化系统和泌尿系统的情况。排泄动作异常包括排粪、排尿带痛，努责，里急后重，失禁等。排泄物性状异常包括粪便干硬（便秘）、腹泻、颜色气味异常等。49腹泻见于侵害胃肠道的疫病（如仔猪副伤寒），便秘见于各种热性疫病（如猪瘟）、慢性胃肠卡他等，里急后重是直肠炎的特征。粪尿的颜色性状也能提示某些疫病，如仔猪白痢排白色糊状稀粪，仔猪红痢排红色黏性稀便。50（二）触诊利用手触及动物的被检组织和器官，借以发现其异常变化的方法。触诊按检查的部位可分为：1、体表触诊通过触诊，检查患病动物体表状态。如体表的温、湿度，皮肤与皮下组织的厚度、弹性、硬度；浅在淋巴结或局部病变的位置、大小、形状及硬度和疼痛反应；骨骼、肌肉、关节的异常变化；表在动脉的频率、性状及节律；心搏动的强度、频率及节律。512、深部触诊通过触诊，检查动物深部某些组织，感知其病理变化。本法主要用于检查内部器官。52（三）叩诊叩诊是对动物体表的某一部位进行叩击，借其产生振动音响的特征，间接地判定内部器官病变的检查方法。叩诊主要用于检查含气器官的含气量及病变的物理状态，以及对心脏、肝脏、脾脏等实质器官进行叩诊。由于器官的含气量、硬度、弹性及叩击力量的强弱等不同，其音响亦异。53（四）听诊利用耳或听诊器听取内脏器官活动所发出的音响，以此判断内脏疾病的方法。用耳紧贴于动物体表相应部位的直接听诊法，现已很少应用。常采用的方法是利用听诊器来听取心音、肺呼吸音、肠蠕动音等间接听诊法，检查心血管系统、呼吸系统、消化系统的异常或疾病。54（五）嗅诊是利用嗅觉器官嗅闻排泄物、分泌物、呼出气体及口腔的气味，从而判断疾病性质的一种检查方法。如犬瘟热病兽发生浆液性和化脓性结膜炎、鼻炎，均具有特殊的恶臭味；水貂肺坏疽呼出气体可嗅到一种臭味。奶牛酮病：烂苹果味有机磷农药中毒：呼出大蒜样气味55（六）体温检查体温异常是确定疫病的性质、程度和判断预后的重要根据，是临诊检疫必不可少的一项内容。哺乳动物测温部位主要是直肠，鸟类也可测翼下温度。由于大失血或在濒死期，体温常会降低。某些传染病和急性炎症的初期，症状未显现之前，常有体温升高的趋势，测温是早期检查，发现传染病的重要手段。56临床上根据发热的程度，可分为：体温升高1℃，称为微热，见于鼻卡他、口腔炎、胃卡他等局限性炎症和轻微的病程时。体温升高2℃，称为中热，常见于消化道及呼吸道一般性炎症和某些亚急性、慢性传染病，如胃肠炎、支气管炎、咽喉炎、慢性马鼻疽、牛结核、布氏杆菌病等。57体温升高3℃，称为高热。在猪瘟、牛瘟、猪肺疫、牛肺疫、流行性感冒、马腺疫、大叶性肺炎、胸膜炎、腹膜炎等急性传染病和广泛性炎症时可见。体温升高3℃以上，称为最高热。提示某些严重的急性传染病，如急性马传染性贫血、传染性胸膜肺炎、猪丹毒、炭疽、脓毒败血症以及日射病与热射病等。58在发病的过程中，根据其热型特点，可分为：暂时热：温度比正常升高1∽1.5℃，并保持12h或1∽2d。稽留热：体温迅速或逐渐升高1∽2℃或更高，然后保持此温度数日至7d或更长，以后急速地或缓慢地下降。本热型1d内温差不超过1℃，可见于急性马传染性贫血、传染性胸膜肺炎、牛肺疫、胸膜肺炎、流行性感冒、大叶性肺炎、猪瘟、猪丹毒等。59间歇热：有热期或无热期规则的交替出现。典型的间歇热，可见于马传染性贫血、血孢子虫病。弛张热：每天早晚温差1∽2℃，持续期从数天至数十天，可见于许多化脓性疾病及败血症、小叶性肺炎以及非典型经过的某些传染病（如腺疫等）。60（七）脉搏测定脉搏的测定方法：测定每一分钟脉搏的次数，以次/分钟表示。马属动物，可检颌外动脉。牛，通常检查尾动脉。猪、羊、犬和猫，可在后肢股内侧的股动脉处检查。

61（八）呼吸数测定宜在安静状态下测定。呼吸数测定的方法：测定动物每分钟的呼吸次数，以次/分钟表示。一般可根据胸腹部的起伏动作而测定，检查者立于动物的侧方，注意观察其腹肋部的起伏，一起一伏为一次呼吸。鸡的呼吸数可观察肛门下部的羽毛起伏动作来测定。623、各种动物检疫的临诊检查要点猪的临诊检查要点

牛的临诊检查要点

羊的临诊检查要点

禽的临诊检查要点

其他动物的临诊检查要点

63（1）猪的临床检疫要点（1）

主要是“三观一检”即：静态观察、动态观察、饮食观察和剔除病猪个体的检验。

64猪的临床检疫要点（2）群体检查动（动态检查）：自然活动状态，如起立、运动、排泄、精神等有无异常。静（静态检查）：平静时观察站立、下卧、口鼻、呼吸等有无异常。食（采食状态检查）：观察食欲、食态、食量等有无异常。65猪的临床检疫要点（3）系统检查：有针对性地检查几种疾病，如猪丹毒、猪瘟、猪肺疫、支原体肺炎、副伤寒、流感、猪炭疽、猪传染性水泡病、猪口蹄疫、猪萎缩性鼻炎、猪旋毛虫病、猪囊尾蚴病等。病猪都有一致表现：倦怠、疲劳、嗜睡、怕冷、背毛混乱、皮下有出血点、眼结膜发炎、呼吸急促、排粪硬结或下痢等。66病健猪的区分（1）健康猪病

猪

精神状态活泼沉郁、萎顿。休息状态站立平稳，来回走动，拱地寻食，不断发出“吭吭”声，神态自若，见有人来，凝神而视，睡时多侧卧，四肢舒展。独立一隅，吻部触地，全身颤抖，独卧一处，体温高时喜卧阴湿处或食槽内，睡时多蜷缩或伏卧，或将头枕在别的猪的身上，有的呈犬坐姿势67病健猪的区分（2）运动行走平稳，步态矫健，两眼前视，摇头摆尾，反应灵敏行动迟缓，步态不稳或不协调，遇到惊吓反应迟钝叫声宏亮尖细，嘶哑，咳嗽68病健猪的区分（3）呼吸平稳自如，节奏均匀急促，喘息，呈腹式呼吸，身体震动，有时张口，鼻翼扇动。食欲吃食时争先恐后，嘴直入槽底，大口吞食，鬓毛震动，“喳喳”作响。立于槽外，或啜饮稀食，吃一、二口即自动退槽，吃完后肷部塌陷。69病健猪的区分（4）皮肤柔软有弹性，清洁光滑。粗糙，被毛脏乱眼明亮有神发红，或有眼屎。鼻鼻盘湿润，鼻孔清洁。鼻盘干燥，流涕或血，口流涎。70病健猪的区分（5）排泄物粪便粗圆，有光泽，尿量和色泽正常。粪便干或稀，有血或粘液，尿少而色粽黄。体温38-40℃。38℃以下或40℃以上。71（2）牛的临床检疫要点（1）同样分为：静态、动态、饮食和系统检查四个方面。72牛的临床检疫要点（2）

静态检查健康牛

健康牛常呈膝卧姿势，四肢弯曲，站立平稳，鼻镜湿润，嘴角周围干燥，被毛光亮，反刍正常有力，呼吸平稳，排便正常。

病牛

病牛常横卧，四肢伸展，头颈低伸，弓背弯腰，眼睛有分泌物，鼻镜干燥，被毛粗乱，反应迟缓，呼吸困难、呻吟，粪便稀或干，或带有血样，肛门不洁净。

73牛的临床检疫要点（3）

动态：精神外貌和姿态、步样

健康牛：精力充沛，走路平稳，四肢有力，耳尾灵活，走路不掉队。

病牛：精神沉郁或兴奋，两眼无神，曲背弓腰，四肢无力，耳尾不动。

74牛的临床检疫要点（4）

饮食检查争抢饲料，咀嚼有力，采食时间长。

病牛厌食或不吃，采食缓慢，采食时间短，不到大群中饮水。75牛的临床检疫要点（5）

系统检查主要是详细检查可视粘膜、分泌物、体温和脉搏变化。体温是牛检疫的重要项目，每头牛都要测温，若体温升高，则隔离观察一定时期。主要以口蹄疫、炭疽、牛肺疫、布鲁氏菌病、结核病、副结核病、蓝舌病、地方性白血病、牛传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻-黏膜病、牛肝片吸虫病、锥虫病、泰勒虫病为检疫对象。

76（3）羊的临床检疫要点（1）静态：吃饱后群体合卧，反刍，呼吸平稳，被毛整洁，口和肛门周围洁净，反应敏捷。病羊常独卧一隅，鼻镜干燥，呼吸紧迫、困难、磨牙、流泪等，精神不振。

77羊的临床检疫要点（2）动态：精神活泼，走路平稳，不掉队。病羊沉郁或不安，步态不稳，行走摇摆或跛行，前肢跪地或麻痹，离群掉队。

78羊的临床检疫要点（3）饮食：饲喂、饮水互相争抢，放牧动作轻快，边走边吃。病羊食欲不振或停食，放牧吃草时跟在后面，不饮水更不爆食。

79羊的临床检疫要点（4）系统检查：可视粘膜、淋巴结、分泌物、排泄物、皮肤、被毛、体温等。主要以口蹄疫、炭疽、蓝舌病、羊痘、羊螨病为检疫对象。

80（4）禽的临床检疫要点（1）健康鸡

：精神状态活泼，行动平稳矫健，行走时探头缩颈，两翅紧收。毛光顺紧贴，头部整洁，眼明亮，冠和肉髯红而有弹性。食后嗉囊饱满。体温40-42℃。81禽的临床检疫要点（2）病鸡：精神沉郁、萎顿。行动迟缓，步态僵硬踉跄，弯颈拱背，翅尾下垂。羽毛粗乱蓬松，眼睑肿胀，鼻流涕，口流涎，冠和肉髯肿大发紫或苍白，口腔内有黄色假膜或有酸臭味。

82禽的临床检疫要点（3）个体检查：重点是精神状态、运动和姿势、表被状态（羽毛、冠髯、鼻、眼等）、嗉囊、饮欲、食欲、粪便等。一般不做体温检测。以鸡新城疫、雏白痢、鸡马立克氏病、鸡传染性法氏囊病、禽霍乱、鸭瘟、小鹅瘟、鸡球虫病为主要检疫对象。

83（5）其他动物的临诊检查要点①马的临诊检查要点A、静态观察。健马：昂头站立，机警敏捷，稍有音响，两耳竖起，两眼凝视；多站少卧，若卧地则屈肢，平静似睡；被毛整洁光亮，皮肤无肿胀，鼻眼干净，外阴无异常；粪便球形，中等湿度。病马：睡卧不安，闭眼横卧，起卧困难；站立不稳，低头耷耳，两眼无神，姿态僵硬，精神委顿，对外界反应迟钝或无反应；被毛粗乱无光，皮屑积聚，皮肤有局部肿胀，眼鼻流出黏性或脓性分泌物，外阴污秽；粪便干硬或拉稀，混有恶臭脓血；呼吸喘气，嗳气。84B、动态观察健马：行动活泼，步伐轻快有力，昂首蹶尾，向群前挤；运动后，呼吸变化不大或很快恢复正常。病马：行动迟缓，四肢无力，步伐沉重，有时踉跄，常落在群后面；运动后，呼吸明显增快，甚至呼吸困难。85C、饮食观察。健马：放牧时争向草场，舍饲给草料时两眼注意力集中在饲养员身上，有时发出“咴咴”叫声，食欲旺盛，咀嚼音响，饮水有吮力。病马：对草料不理睬，对饲养员无反应，或吃几口即停食，或绝食，咀嚼、咽下困难，饮水不明显。

86D、个体临诊检查要点主要内容是检测体温、精神状态、姿态步样、可视黏膜、分泌物性状、被毛、体表淋巴结、排泄物、呼吸等。以炭疽、鼻疽、马传染性贫血、马鼻腔肺炎为主要检疫对象。

87②兔的临诊检查要点兔的临诊检疫以精神状态、营养、可视黏膜、被毛、呼吸、食欲、四肢、耳、眼、鼻、肛门、粪便等为主要检查内容。88健兔：神态活泼，行动敏捷；两耳直立，两眼圆瞪明亮，眼睑湿润，眼角干净；被毛浓密，匀整清洁，润泽有光；肛门干净，粪球光滑；背肉丰厚。病兔：精神委顿，两眼无神，被毛粗乱，偏头垂耳；兴奋不安，急躁乱跳；四肢麻痹，伏卧不起；行动踉跄，反应迟钝；眼有分泌物，呼吸困难，粪便稀软，体弱消瘦，体温升高。89③犬的临诊检查要点健犬：站立时，显得自然、挺立；扑食物或玩具时，显得很轻灵；被毛完整有光泽，摸起来有润滑和舒服感；眼睛明亮、有神，对外界事物反应灵敏，眼睛滴溜溜转，很有灵气；无眼屎，不流泪；唇部为粉红色，鼻子摸起来潮湿、润滑，有发凉的感觉。90病犬：被毛粗乱无光泽，有的被毛明显脱落；眼无神，目光呆滞，对外界事物反应迟钝或无反应，或眼睛半睁半闭；眼睛周围很脏，畏光、流泪；可视黏膜潮红或发绀或黄染或苍白；鼻子摸起来干燥，有温热感，精神沉郁，或狂暴91④鱼的临诊检查要点检查的重点是体表、鳃和内脏。健鱼：群居、群游性好，反应灵敏，浮沉自如；发育匀称，食欲正常；体表有该种鱼的自然色泽，美观发亮，富有弹性，不留指凹。体表黏液少而分布均匀，五色透明；鳃盖清洁紧闭，质地坚硬，鳃内洁净，鳃板鲜红并附有少量黏液；肛门圆形凹陷，白色或淡红色，不突出，不破裂；鳞片有光泽，纹理清晰，被覆少量透明液，不易脱落；眼睛饱满稍突出眼眶，眼球原位不易移动，颜色正常不发红，角膜透明富有弹性。92病鱼：离群独游或溜边，急躁不安、跳出水面或打转，浮沉困难；食欲不振，发育异常；失去健鱼的正常体表特征，体色发黑或出血变红；鳃盖张开，鳃片发绀或变白，鳃丝末端肿大或腐烂，黏液增多并有不洁感。有时，可在体表或鳃内等处发现寄生虫。93三、动物尸体病理解剖检疫

外部检查解剖学检查内部检查方法分类

组织学检查94（一）病理解剖学检查法

1、外部检查注意其营养状况，皮毛、可视黏膜及天然孔情况。根据肌肉发育和皮下脂肪确定是否营养不良，检查可视黏膜有无贫血、淤血、出血、黄疸、溃疡等变化，检查皮肤、蹄部有无外伤、水疱、水肿、出血、充血等变化。注意尸僵变化，死于破伤风的动物尸僵发生快而显著，死于败血症的动物尸僵不明显。952、体内检查内部检查包括：剥皮和皮下组织各体腔剖开视检内脏的采出及检查等。

96⑴剥皮及剥皮后的检查具有经济价值或保留意义的皮张，可按动物种类不同，选用不同的剥皮方法进行剥皮。无价值的皮张可不剥皮。在剥皮过程中，应注意皮下有无水肿、出血、血液凝固情况，以及体表淋巴、皮下脂肪、肌肉、骨和关节情况。97传染病时体表淋巴经常肿大、充血、出血、皮下常有出血点、出血斑、血液凝固不良等变化。败血症可见肌肉上有瘀斑和瘀点。因传染病侵袭，关节常出现各种炎症和不同程度的肿胀。98（2）体腔的剖开打开胸、腹腔后，应注意观察腔内有无气体排出和气味；腔内体液的多少、颜色、透明度；有无浆液性、粘液性、化脓性、纤维素性、血性渗出物、血液和血块等；浆膜面有无出血点或出血斑等。内脏器官的摘出多采用分段的方法进行。

99（3）内脏器官的检查内脏器官的检查程序一般是，先观察外部形态特征、质地变化，然后再切开脏器检查内部变化。100心脏：首先注意心包液数量及状态，然后检查心外膜和冠状沟有无出血及心冠脂肪状态，最后检查心房、心室、心肌及心内膜及其状态。如巴氏杆菌病、结核病等传染病多伴有心包炎，心包浆膜潮红、混浊、粗糙、有多量浆液性或纤维素性渗出物积聚于心包腔中。101肺脏：首先观察肺脏表面的色彩、性状，表面是否有纤维素性或化脓性附着物，或塌陷的地方（无气肺），再触摸肺的各部，以查其有无结节或硬块，必要时切下小块肺脏作“浮沉试验”。102脾脏：首先观察大小和颜色，以手触摸其质度，然后切开脾脏观察脾髓、滤泡、小梁的状态，败血症的脾脏常呈显著肿大，且脾髓软化。脾肿大时包膜紧张。边缘钝厚，切面膨隆，呈暗红色或黑红色，脾小梁和白髓不清，用刀背轻刮，可刮下大量血粥样物。有些急性传染病并不引起脾脏的明显变化，如犬瘟热、巴氏杆菌病，有些慢性传染病，如水貂阿留申病、结核病常见脾脏明显缩小。103肝脏：注意观察大小、颜色、硬度等状况。急性细菌性传染病、某些病毒性传染病，常出现肝体积肿大、实质脆弱、颜色灰白混浊，或灰黄色等变性变化。多种动物的沙门氏菌病、坏死杆菌病、李氏杆菌病，可出现肝脏有黄白色、灰白色、大小一定的坏死灶。104肾脏：先检查脂肪囊是否有出血、被膜的紧张度剥离难易程度；被膜下有无出血、淤血、梗死、坏死等变化，然后切开检查肾皮质和髓质、肾盂的变化。在一些急性传染病中，肾可呈急性肾炎变化，肿胀、包膜紧张、皮质增厚、有散在的出血点。而在一些慢性传染病病例可见肾体积缩小，皮质表面凹凸不平，呈栗粒大灰白色小结状的慢性肾炎变化。

105胃肠：首先观察胃肠的膨满状态，浆膜面的变化，然后观察胃内容物与粘膜面的变化，内容物的观察主要是观察内容物的量、稠度、气味、色调、性质、异物、寄生虫等，粘膜的观察要注意是否有肿胀、发炎、出血、溃疡、肥厚、水肿等。106膀胱：主要检查尿液积留情况及粘膜有无出血。膀胱粘膜和膀胱内出血常见于炭疽、狂犬病、猪瘟、猪丹毒、马流脑等传染病。107淋巴结：当发生传染病时，多出现淋巴结炎，在检查各器官系统的同时，要细心检查相应部位的淋巴结。败血症、急性经过的传染病时通常伴发全身性的急性淋巴结炎，表现为淋巴结肿大、被膜紧张、切面膨隆、湿润多汁，呈灰红色或淡红色，有出血时，呈暗红色或黑红色，切面有凝血样光泽。108慢性淋巴结炎：淋巴结体积增大，质地变硬。若纤维增生时，淋巴结不肿大，有时可见缩小，表面不平，质地硬实，切面呈灰白色，干燥，固有结构不清。109（二）病理组织学检查采取病料做组织切片，在显微镜下观察其细微的病理变化，借以帮助诊断。典型病变部位连同健康组织一并采取（每块长宽1~1.5cm，厚0.4cm），冲去血污，置于固定液中送检。固定液一般用10%福尔马林溶液或95%乙醇。110（三）尸体的变化尸冷尸僵尸斑血液凝固尸体自溶与尸体腐败

111四、病原学检查1、病料的采取和保存（1）供微生物学检验的病料根据流行病学调查和临诊检疫，对被检动物可能患有什么疫病做出初步诊断后，针对该疫病病原体可能存在的部位，采集最适宜的病料进行检查，才能比较容易地检查出病原体，而不致漏检。112病名主要临床症状病料标本种类狂犬病神经兴奋，具攻击性、恐水、意识障碍、沉郁、局部或全身麻痹脑，特别是海马角、脑脊髓液、唾液腺、唾液、鼻咽分泌物伪狂犬病发热、奇痒、脑脊髓炎脑、扁桃体口蹄疫发热，口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和溃烂，哺乳期仔兽易发严重心肌炎水泡皮或水泡液新城疫呼吸困难、下痢、神经症状、黏膜和浆膜出血呼吸道分泌物、脑、脾等实质器官113A、病料的采取应于患病动物死后立即采取，或于患病动物临死前扑杀后采取，尽量避免外界污染。采取所需病料时应无菌操作，采后放在预先消毒好的容器内。所采组织的种类，要根据诊断目的而定。114病料采集的方法:①液体材料

一般用灭菌棉拭子采取破溃的脓汁、胸水、鼻液、阴道分泌物和排泄物。未破的脓肿、胸水在皮肤表面消毒后，用无菌注射器抽取。115②内脏组织应在尸体解剖后立即采取。应先用烧红的器具烧烙表面，或用酒精火焰消毒，取深部小块实验器官，放入无菌的器皿内。要尽可能采取有病变及病变交界处的部位。116③胃肠及内容物可将胃肠剪下，两端扎好，送往实验室。粪便可用棉拭子采取，放入装有生理盐水或PBS的试管内。117④血液无菌采取抗凝血，供病原培养、抗体检测和血液检查之用。体型较大的单蹄和偶蹄类动物少量血样可以从耳背静脉采血；毛皮动物小量采血可通过耳壳外侧静脉采取；鼠类可以通过尾尖、耳背静脉、眼窝内血管采血；兔可从耳背静脉、颈静脉、心脏等处采血；鸟类可从肘关节内侧的翅静脉、跖部内静脉或心脏采血。118⑤脑组织

按病理解剖方法开颅，将脑组织取出。取一部分放入10%福尔马林溶液的瓶中，供组织学检查；一部分放入50%甘油生理盐水瓶中，供微生物学检查，或者将头部取下，用塑料口袋包好直接送检。

119病料采集应注意的事项:采样所用刀、剪要锐利，切割要迅速准确，忌拉锯式切割，并要防止挤压病料，造成人为的变化。采集的每块组织标本应包含有病变和其周围较正常的组织，包含器官的重要组成部分。病料以2-3cm厚，4cm×5cm大小为宜。死后要立即采集病料，尤其夏季不应超过4h。拖延过久，则组织变性、腐败，影响检验结果。取材时应选择症状和病变典型，有代表性的病例。120B、病料的保存病料应尽快送实验室检验，若延误送检时间，常会严重影响检疫结果。根据病料的性状及检疫的要求不同，应做暂时的冷藏、冷冻或其他处理。供细菌检验及血清学检验的样品，应放在装有冰块的保温瓶内运送，且必须在24h内送到；121供病毒检验的样品，冷藏处理后须在数小时内送达实验室，超过数小时的应做冻结处理（冻结方法：将样品放入-30℃冰箱内冻结，然后再装入有冰块或干冰的冷藏瓶内运送，也可将装入样品的容器放入保温瓶内，再放入冰块，然后按100g冰块加入约35g食盐，立即将保温瓶瓶口盖紧。瓶内温度可控制在-20℃左右。24h内不能送到实验室的，须在运送过程中保持样品温度处于-20℃以下）122（2）寄生虫检查病料的采取和保存检查寄生虫的病料，应在流行病学调查、临床检查的基础上，按所怀疑的寄生虫所寄生的部位来采取样品，才能达到检疫的目的。123A粪便样品应采取新排出的粪便或直接从直肠内采得，以保持虫体或虫体节片及虫卵的固有形态。根据检查方法的不同，取样量差别较大。例如，直接涂片检查虫卵时，只需用竹签或牙签取少量粪便即可；漂浮法、沉淀法和锦纶筛兜淘洗法，需取粪样以冷藏不冻结状态及时送实验室检查。124B皮屑样品当检查动物的螨病（如疥螨、痒螨）时，在患病皮肤与健康皮肤交界处，将刀刃与皮肤表面垂直，刮取皮屑，直到皮肤轻度出血，接取皮屑供检验。125C血液样品有些丝虫（如犬恶丝虫）的幼虫及血液原虫（如伊氏锥虫、梨形虫和住白细胞虫）均可在动物的血液中出现，这些病的确诊就需依靠血液的检查。不同的血液寄生虫，在血液中出现的时机（白天或夜晚）及部位各不相同，所以要根据具体情况，取相应时机和部位的血液制成血涂片，送实验室镜检。1262病原检查法

（1）病原菌疫病的病原学检查A、病原菌的形态学观察显微镜下菌体的形态学观察要点：通过染色、镜检，注意观察菌体的形态、大小和排列规律，注意是否产生芽孢和芽孢的位置；注意染色反应，有无荚膜等。菌落的形态学观察要点：主要是通过分离培养，注意观察菌落的大小，粗燥或光滑情况，隆起情况，透明情况和颜色；在半固体培养基接种线上的生长情况；在特殊培养基上生长情况等。127B病原菌的生化试验相近的菌种单凭形态学检查不易区别，但是不同菌类的新陈代谢产物不同，可以检查其代谢产物而区别开。因此，用生化反应检查细菌的代谢产物，是鉴别病原菌的重要方法之一。常用的生化反应有糖发酵试验、靛基质试验、VP试验、MR试验、柠檬酸盐利用试验、硝酸盐还原试验、硫化氢产生试验、明胶液化试验、尿素酶试验、牛乳试验等。

128C、血清学试验通过用血清学试验可进行细菌属内分群和种内分型。用于细菌鉴别的血清学方法有凝集试验、沉淀试验、毒素中和试验、补体结合试验等。

129（2）病毒性疫病的病原学检查通常分为分离培养鉴定和血清学鉴定两步进行。A病毒的分离培养鉴定主要是在流行病学调查的基础上，有目的地采取病料针对性接种易感实验动物、禽胚胎和易感组织细胞进行分离培养。130病毒理化性质鉴定

病毒理化性质的鉴定是鉴定病毒的重要指标。有关的理化性质主要有：病毒的核酸类型可采用加入脱氧核糖核酸抑制剂、用Dnase或RNase处理，或借助于生化技术以及染色方法，来观察病毒感染细胞的相应变化，确定病毒的核酸类型是DNA还是RNA。病毒颗粒的大小病毒的大小可以通过过滤和电子显微镜的方法来测定。131对脂溶剂的敏感性有些病毒颗粒外面包有类脂质膜，它能被乙醚、氯仿等脂溶剂所破坏，使病毒失去感染性。而无外膜的病毒对乙醚处理有抵抗力。对酸的敏感性各种病毒对pH值变化的稳定性有一定差异。一般将病毒对酸的敏感性作为病毒鉴定的一个重要指标，如肠道病毒对酸有较强的抵抗力。132耐热性试验胰蛋白酶敏感性试验分离病毒的凝血性质和红细胞吸附特性。133B、病毒的血清学鉴定在初步分离鉴定的基础上，采用血清学试验方法鉴定病毒的种类。常用的血清学方法有中和试验、补体结合试验、红细胞凝集抑制试验、间接血凝试验、免疫扩散试验、免疫荧光抗体技术、免疫酶标记和实验动物交叉保护试验等。

134（3）寄生虫性疫病的病原学检查①蠕虫病的检查方法

A虫卵检查法

寄生虫卵形态检查，常采取粪便，用直接涂片、浮集、沉淀等方法建立确诊。寄生虫卵计数可对寄生虫的寄生量做一个大致判断。135B、幼虫检查法C、寄生虫虫体的检查法D、粪便培养

E、毛蚴孵化法

②原虫病的检查方法③螨病的检查方法

136五、免疫学检查

1、血清学检测技术抗原与相应抗体在体外一定条件下发生反应，这时反应现象能用肉眼观察或通过仪器检测出来。因此，可利用抗原抗体已知的任何一方去检测未知的另一方，以达到检疫目的。1371）凝集反应细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附在红细胞、乳胶颗粒性载体表面的可溶性抗原，与相应抗体结合，在有适当电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集试验。

138A、直接凝集反应颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现凝集现象的试验。直接凝集反应有玻片法和试管法。玻片法在洁净的载玻片或玻璃板上进行；试管法在洁净的试管中进行。139玻片法是一种定性试验方法。可用已知抗体来检测未知抗原。若鉴定新分离的菌种时，可取已知抗体滴加在玻片上，将待检菌液一滴与其混匀。数分钟后，如出现肉眼可见的凝集现象，为阳性反应。该法简便快速。如沙门氏菌的鉴定、人类ABO血型血型的鉴定等多采用此法。140也可用已知的诊断抗原悬液，检测待检血清中是否存在相应抗体。如布氏杆菌的玻板凝集反应和鸡白痢全血平板凝集试验。141A．平板凝集试验+平板凝集试验用抗原阴性血清无凝集现象+平板凝集试验用抗原阳性血清出现凝集现象142试管凝集法

是一种定量试验的经典方法多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查。143操作时，将待检血清用生理盐水连续成倍稀释，然后加入等量抗原，最高稀释度仍有凝集现象者，为血清的效价，也称滴度，以表示血清中抗体的相对含量。通常以能与一定量的抗原发生肉眼可见的明显凝集（++）的血清最高稀释度为血清凝集效价。144145146147148B、间接凝集反应先将可溶性抗原（或抗体）吸附在与免疫无关的载体颗粒（红细胞、乳胶等）表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在有电解质存在的适宜条件下，所出现的特异性凝集反应。149150由于载体颗粒增大了可溶性抗原的反应面积，当颗粒上的抗原与微量抗体结合后，就足以出现肉眼可见的反应，敏感性比直接凝集反应高得多。本试验具有较高的敏感性，一般要比直接凝集反应高2-8倍，但特异性较差。151间接凝集反应若以红细胞（多用绵羊红细胞）做载体，称为间接血凝反应；若以乳胶做载体，称为乳胶凝集反应。152间接凝集反应若用已知抗原吸附在载体上鉴定抗体，称为正向间接凝集反应；若用已知抗体吸附在载体上来鉴定抗原，称为反向间接凝集试验。反向间接凝集试验主要用于猪传染性水疱病与猪口蹄疫检测。

153（正向）间接凝集反应原理示意图154（反向）间接凝集反应原理示意图

155C、血凝和血凝抑制试验某些病毒能选择性凝集某些动物的红细胞，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）。在病毒悬液中加入特异性抗体作用一定时间，再加入红细胞时，红细胞的凝集被抑制（不出现凝集现象），称为红细胞凝集抑制反应（HI）。156HI试验在生产实践中的用途：抗体的检测与监测，即用已知病毒测抗体。新分离的血凝性病毒的鉴定，即用已知抗体测病毒。157HA和HI广泛应用在鸡新城疫、禽流感、鸡减蛋综合征等疫病的诊断检测中。试验常在V型96孔微量反应板上进行。158HI试验的实验原理（图示）

GO抗体与病毒对应抗体与病毒不对应vvvvRBCRBC红细胞凝集（血凝现象）红细胞不凝集（血凝抑制现象）抗体（抗原与抗体的结合具有很强的特异性）RBCvvvvvRBCRBCRBCRBCRBCRBCvRBCRBCRBC血凝性病毒血凝素RBC有其受体的红细胞血凝素的受体++159间接凝集抑制反应原理示意图

A：标本中含抗原B：标本中不含抗原160方法与步骤（以新城疫抗体效价的测定为例）

HI试验用的抗原是定量的四单位病毒，所以在做HI试验前要先配制出四单位病毒。（一）4单位病毒的配制：先做病毒的血凝试验，测出病毒的血凝价，然后推算出４Ｖ的稀释度，把病毒稀释，就得到了４Ｖ。（二）HI试验的操作步骤：结果判定(读出血凝抑制价)

161孔号123456789101112加生理盐水待检血清的倍比稀释血清稀释倍数新城疫4V

505050505050505050505050

50505050505050505050－－

弃50

212223242526272829210

病毒对照盐水对照

5050505050505050505050

－振荡1min，室温（18℃～20℃）下作用20min，或置37℃温箱中作用5～10min1%鸡RBC悬液505050505050505050505050振荡15～30s，置37℃温箱中作用15～30min观察结果HI试验的操作步骤四种试剂：生理盐水鸡被检血清新城疫的4单位病毒1％鸡红细胞悬液(吸头专用)病毒血凝抑制试验操作步骤单位:μl162血凝抑制效价：能完全抑制红细胞凝集的血清最大稀释倍数称该血清的血凝抑制滴度或血清的血凝抑制效价。

完全抑制不完全抑制不抑制

病毒对照盐水对照结果判定水平观看

倾斜观看新城疫4V

50505050505050

5050

5050－

稀释倍数血清21

22

23242526272829210

病毒对照盐水对照结果举例－－－－－－±

±＋＋＋－163Back1642）沉淀反应可溶性抗原（如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出液等）与相应抗体结合，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验。

165液体内沉淀试验

1）环状沉淀试验

2）絮状沉淀试验凝胶内沉淀试验

3）单向扩散试验

4）双向扩散试验免疫电泳技术

5）免疫电泳

6）对流免疫电泳

166A、环状沉淀反应反应在小试管中进行，当沉淀素血清与沉淀原发生特异性反应时，在两液面接触出现致密、清晰明显的白环，即环状沉淀反应阳性。方法评价：

敏感度较低、简便、快速、实用、只能定性不能定量、缺乏多对分辨力。常用于炭疽的诊断和皮张炭疽检疫。167AbAg环状沉淀示意图沉淀管内径1.5～2mm1～5min出现沉淀环为阳性30min不出现沉淀环为阴性操作步骤168原理

B双向琼脂扩散试验

将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散，当抗原与抗体相遇，在比例合适时形成沉淀线。操作步骤

(doublegeldiffusiontest)应用：1.检测未知Ag或Ab2.Ag性质分析3.Ab效价滴定4.Ag或Ab纯度鉴定169平板法170操作步骤:在半固体琼脂凝集板上按备好的图形打孔，一般由一个中心孔和6个周边孔组成一组，中心孔径4-5mm，周边孔径3mm。中心孔滴加已知抗原悬液，周围孔滴加标准阳性血清和被检血清。各孔应编号，当抗原抗体向外自由扩散而发生特异性反应时，在相遇处形成一条或数条白色沉淀线，即琼扩试验结果阳性。171梅花孔结果172琼脂扩散试验是马传染性贫血病、鸡马立克氏病、鸡传染性支气管炎、鸡传染性喉气管炎及鸡传染性法氏囊病常用的诊断方法。173

2.抗原性质分析2表示标准Ag1表示待检Ag待检Ag与标准抗原完全吻合；待检Ag中含有与标准Ag相同的Ag；还有另外的Ag与Ab相对应；待检Ag有与Ab相对应的Ag，但与标准Ag不同；待检Ag与标准Ag性质相同；但含量较低；

抗原性质分析174

1.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。

2.以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为该抗体的效价。

3.可进行任意稀释。

抗体效价滴定175对流免疫电泳(CIEP)

抗原与抗体在直流电场的作用下在琼脂凝胶中发生互逆方向的移动或扩散，二者相遇时可发生特异性的结合，形成肉眼可见的沉淀线。大多数蛋白质抗原物质在碱性溶液中带负电荷，电泳时从负极向正极移动，而抗体带有微弱的负电荷，分子量较大，电泳过程中向负极泳动。操作步骤(counterimmunoelectrophoresis)概念

方法评价：

简便、快速、敏感度较双扩高、分辨力较双扩低。176

示意图1773）标记抗体技术虽然抗原与抗体的结合反应是特异性的，但在抗原、抗体分子小，或抗原、抗体含量低的时候，抗原、抗体结合后所形成的复合物却不可见，给疫病检测带来困难。而有些物质如酶、荧光素、放射性核素、化学发光剂等，即便在微量或超微量时也能用特殊的方法将其检测出来。178根据抗原抗体结合的特异性和标记分子的敏感性而建立的诊断检测技术，称为标记抗体技术。免疫学检测中的标记技术主要包括酶标记抗体技术、荧光标记抗体技术和胶体金免疫检测技术等。179A、荧光抗体技术将抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，用此荧光抗体作染色剂，对待检标本进行染色，当标本中的抗原物质与荧光抗体特异性结合时，荧光素在荧光显微镜的紫外光或蓝光照射下，发射出肉眼可见的荧光，从而显示抗原的存在及所在的部位。直接免疫荧光试验：仅能用于抗原的检测。间接免疫荧光试验：可以检测抗原又可检测抗体。180B、免疫酶技术是把抗原抗体的免疫学反应与酶的高效催化作用原理有机地结合起来，即把具有催化活性的酶类通过化学的方法和抗体(或抗原)结合起来成为酶标记物。这种酶标记物同时具有免疫学反应性和化学反应性，将其与待测的抗原或抗体结合，通过酶的活性降解底物呈现出颜色反应从而显示出该免疫学反应的存在。酶的活性与底物以及与显色反应呈一定的比例关系。显色越深，说明酶降解底物量越大，与酶标抗体(抗原)相检测对应的抗原(或抗体)量也就越多。181分类182ELISA将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

183ELISA基本原理：

（1）抗原或抗体能物理性地吸附于固相载体表面，并保持其免疫学活性；

（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；

（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的。

184ELISA类型

ELISA可用于检测抗体，也可用于检测抗原。根据检测目的和操作步骤的不同，通常有三种类型的检测方法。1．间接法此法是检测抗体最常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体上，加入待测血清(抗体)与之结合，洗涤后，加酶标抗体和底物进行测定。其原理见图。185酶标抗体固相抗原待测抗体EEE图ELISA间接法示意图1862．双抗体夹心法此法常用于检测抗原。将已知抗体吸附于固相载体，加入待测标本(含相应抗原)与之结合，温育后洗涤，加入酶标抗体及底物溶液进行测定。见图

酶标抗体固相抗体待测抗原EEE图双抗体夹心法检测抗原1873．竞争法此法可用于抗原及半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体上，加入待测抗原和一定量的已知酶标抗原，使二者竞争地与固相抗体结合，经过洗涤分离，最后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。见图188EEE酶标抗原待测抗原E底物E显色反应固相抗体EEE酶标抗原底物显色反应EEEEEE图竞争法测抗原示意图固相抗体189补体结合实验一、原理

CFT是根据任何抗原抗体复合物可激活、固定补体的特性，用一定量的补体与致敏红细胞来检测抗原、抗体间有无特异性结合的一类实验。

1、参与本实验的成分包括①已知抗原（或抗体）②待检抗体（或抗原）③SRBC④SRBC相应的溶血素⑤补体190（Ag+Ab）+补体双方不相对应（或缺少一方）形不成IC

不能激活并固定补体

加入SRBC和溶血素

出现溶血双方相对应形成IC

激活并固定补体

加入SRBC和溶血素

不出现溶血

补体结合实验191中和试验

原理：特异的抗病毒免疫血清（中和抗体）和病毒作用后，使病毒失去感染易感动物、鸡胚、细胞的能力。一种病毒只能被相应的免疫血清所中和。192中和试验的应用病毒株的种型鉴定测定血清抗体效价分析病毒的抗原性193根据稀释成分不同可分为：固定病毒用量与等量一系列倍比稀释的血清进行中和试验，以血清中和抗体滴度表示；（血清中和试验）固定血清用量与等量一系列对数稀释的病毒进行中和试验，以中和指数表示。（病毒中和试验）194例1NDV9～11d鸡胚24～48h鸡胚死亡NDV+抗血清9～11d鸡胚鸡胚不死亡195例2口蹄疫病毒(FMDV)4～7d乳鼠乳鼠死亡FMDV+抗血清4～7d乳鼠乳鼠不死亡

196变态反应法

某些疫病在传染过程中引起以细胞免疫为主的Ⅳ型变态反应，这种变态反应是由病原体或代谢产物在传染过程中作为变应原而引起，具有很高的特异性和敏感性。197因此，常用变态反应进行动物疫病的检疫，例如细菌性疫病中的结核病、鼻疽、布鲁氏菌病，病毒性疫病中的疱疹病毒病，真菌性疫病中的流行性淋巴管炎，寄生虫病中的日本血吸虫病等。198六、动物检疫检验的现代生物学技术

单克隆抗体技术

核酸探针技术

PCR技术

免疫印迹技术

限制性核酸内切酶图谱分析

核酸序列分析

限制性核酸片段多态性分析

199A、单克隆抗体技术

一个病原体存在着许多性质不同的抗原，在同一抗原上，有可能存在许多性质不同的属、种、群、型特异性抗原，采用杂交瘤技术，可以识别不同抗原或抗原决定簇的单抗，从而可以对感染性疾病和寄生虫病进行快速准确的诊断，同时，可用于调查疫病流行情况、流行毒株或虫体的分离鉴定，为疫病的诊断和防制提供资料。200

免疫动物培养骨髓瘤细胞

收集致敏的B淋巴细胞收集骨髓瘤细胞

细胞融合

HAT选择培养基筛选杂交瘤细胞

检测筛选阳性细胞

克隆化培养（反复3-5次）

获得稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株

McAb的制备（杂交瘤培养上清或诱生腹水）

McAb纯化及鉴定

单克隆抗体技术201B、PCR技术即聚合酶链式反应，其原理是在模板DNA、引物和四种脱氧单核苷酸存在的条件下，依赖于耐高温的DNA聚合酶的酶促合成反应。PCR以欲扩增的DNA作为模板，以与模板正链和负链末端互补的两种寡核苷酸作为引物，经过模板DNA变性、模板引物特异性结合，并在DNA聚合酶作用下发生引物链延伸反应来合成新的模板DNA。202模板DNA变性、引物结合（退火）、引物延伸合成DNA这三步构成一个PCR循环。每一循环的DNA产物经变性又成为下一个循环的模板DNA。203PCR原理示意图204PCR产物凝胶电泳检测205（1）快速检测病毒性疫病的病原用PCR技术检测的动物病毒性疫病的病原有蓝舌病毒、口蹄疫病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛白血病病毒、马鼻肺炎病毒、恶性卡他热病毒、伪狂犬病病毒、狂犬病病毒、非洲猪瘟病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、马传染性肺炎病毒、马立克氏病毒、牛冠状病毒、轮状病毒、水貂阿留申病病毒、山羊关节炎-脑炎病毒、梅迪/维斯纳病毒、猪细小病毒、鱼传染性造血器官坏死病病毒等。

206（2）快速检测其他疫病病原体致病性大肠杆菌毒素基因、牛胎儿弯曲杆菌、牛分支杆菌、炭疽杆菌芽孢、钩端螺旋体、牛巴贝斯虫和弓形虫等。

207C、免疫印迹技术免疫印迹或免疫转印技术（immunoblotting或Westernblot）是在Southern（1975）创建的DNA印迹术（Southernblotting）基础上发展起来的新型免疫生化技术。208其原理是应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）将蛋白质样品分离后，通过转移电泳或直接印渍方式原位转印至固相介质上，并保持其原有的物质类型和生物学活性不变，然后应用抗原抗体反应进行特异性检测。由于此项技术具有SDS的高分辨力和固相免疫测定的高度特异性和敏感性，方法简便易行，标本可以长期保存和便于比较等优点。209用免疫印迹技术可定性、定量地检测出待检样品中含量很低的特定病原体的抗原成分。对于一些能感染细胞而细胞病变不易观察的病原体的检测也很有用。

210211212七、动物检疫处理方法（一）检疫处理原则除害。通过物理、化学和其他方法杀灭有害生物，包括熏蒸、消毒、高温、低温辐照等方式处理。扑灭。对检疫不合格的动物，依照法规，用不放血的方式宰杀，消灭传染源。销毁。以化学处理、焚烧、深埋或其他有效方法，彻底消灭病原体及其载体。213退回。对尚未卸离运输工具的不合格检疫动物、产品，可用原运输工具退回输出国；对已卸离运输工具的不合格检疫物，在不扩大传染的前提下，由原进出口岸检疫机构监督退回输出国。截留。对旅客携带的检疫物，经现场检疫认为需要除害或销毁的，签发《出入境人员携带物留验/处理凭证》。封存。对需要进行检疫处理的检疫物，应及时予以封存，防止疫情扩散。214（二）入境动物检疫处理

1、现场检疫处理（1）对死亡的动物应及时移送指定地点做病理解剖检验，并采样送实验室检验，死亡动物尸体转运到指定地点进行无害化处理并出具证明进行索赔或其他处理。（2）对有临床症状的动物，若超过半数动物死亡，则禁止卸离运输工具，全群退回并上报国家出入境检验检疫局。215（3）动物铺垫材料、剩余饲料和排泄物等，由货主及其代理人在检疫人员的监督下，做除害处理，如熏蒸、消毒、高温处理等。（4）对入境动物做群体临诊观察，发现疑似感染传染病动物时，在货主或者押运人员的配合下查明情况，立即处理。2162、隔离检疫和实验室检验的检疫处理（1）发现入境动物有一类传染病、寄生虫病，按规定做全群退回或全群扑杀、销毁处理。（2）发现二类传染病或寄生虫病，对患病动物做退回或扑杀、销毁处理，同群其他动物放行至指定地点继续观察，由当地检验检疫机构或兽医部门负责监管。（3）对经检疫合格的入境动物，由口岸检疫检验机构在隔离期满之日签发有关单证（入境货物检疫检验证明）予以放行。217（4）检出的规定检疫项目以外的、对畜牧业有严重危害的其他传染病或寄生虫病的动物，由国家质检总局根据其危害程度做出检疫处理决定。（5）对旅客携带的伴侣动物，不能交验输出国（或地区）官方出具的检疫证书和狂犬病免疫证书或超出规定限量的，做暂时扣留处理。218（三）出境动物检疫处理根据输入国的检疫卫生要求或双边议定书或贸易合同中的检疫要求，经检疫检验不合格的动物不准出境，根据具体情况做出退回原产地或者扑杀销毁处理，发现重大疫情要及时上报国家质检总局并向当地及原产地畜牧兽医部门通报，及时采取措施，扑灭疫情。219（四）国内动物检疫的处理

1、合格动物、动物产品的处理方法经检疫确定无检疫对象的动物、动物产品属于合格的动物、动物产品，由动物防疫监督机构出具检疫证明，动物产品同时加盖验讫标志。2201）合格动物A、县境内交易迁移的动物，出具《动物产地检疫合格证明》。B、运出县境的动物，出具《出县境动物检疫合格证明》。2212）合格动物产品A、县境内交易迁移的动物产品，出具《动物产品检疫合格证明》。B、运出县境的动物产品，出具《出县境动物产品检疫合格证明》。C、验讫标志。剥皮肉类（如马肉、牛肉、羊肉、猪肉等），在其胴体或分割体上加盖方形针码检疫印章；带皮肉类，加盖滚筒式验讫印章；白条禽（鸡、鸭、鹅）和剥皮兔等，在其后腿（肢）上部加盖圆形针码检疫印章。2222、不合格动物、动物产品的处理方法经检疫确定患有检疫对象的动物、疑似动物及染疫动物产品为不合格动物、动物产品，应做防疫消毒和其他无害化处理；无法做无害化处理的，应予以销毁。223若发现动物、动物产品未按规定进行免疫、检疫或检疫证明过期的，应进行