核苷酸和核酸

核苷酸和核酸第1页，共30页，2023年，2月20日，星期五一、核酸的化学反应

1.脱氨基作用（脱氨，deamination）

次黄嘌呤5-甲基胞嘧啶黄嘌呤第2页，共30页，2023年，2月20日，星期五2.脱氧核苷酸的水解——脱嘌呤第3页，共30页，2023年，2月20日，星期五3.紫外线和一些化学因子、烷化剂对DNA的损伤第4页，共30页，2023年，2月20日，星期五亚硝酸第5页，共30页，2023年，2月20日，星期五烷化剂：乙基甲烷磺酸（EMS）第6页，共30页，2023年，2月20日，星期五紫外线诱导胸腺嘧啶二聚体第7页，共30页，2023年，2月20日，星期五4.与嵌合剂的反应第8页，共30页，2023年，2月20日，星期五第9页，共30页，2023年，2月20日，星期五溴乙啶丫啶橙

放线菌素D

第10页，共30页，2023年，2月20日，星期五二、DNA的酶法甲基化（methylation）甲基供体：S—腺苷甲硫氨酸甲基受体：被修饰碱基（A、C多于G、T）碱基的甲基化修饰不是随机的，而是限于一定的顺序或DNA的某一区域，在甲基化酶的作用下进行，甲基化是可逆的。甲基化的意义：帮助细胞识别和区分自身DNA和外来DNA；调节基因表达；帮助DNA修复等。第11页，共30页，2023年，2月20日，星期五第八节

核酸酶和DNA限制性内切酶第12页，共30页，2023年，2月20日，星期五一、核酸酶（nuclease）能水解核酸的酶为核酸酶核酸酶都是磷酸二酯酶（phosphodiesterases）第13页，共30页，2023年，2月20日，星期五核酸酶的分类按底物专一性分类：核糖核酸酶(RNase)和脱氧核糖核酸酶(DNase)按作用方式分类：内切核酸酶和外切核酸酶内切核酸酶：从核酸的内部切割核酸链，产生核酸链片段。外切核酸酶：从核酸链的一端逐个切断磷酸二酯键，释放单核苷酸。按磷酸二酯键断裂方式：3’-核酸酶和5’-核酸酶第14页，共30页，2023年，2月20日，星期五第15页，共30页，2023年，2月20日，星期五核酸酶对其底物的作用具有特异性第16页，共30页，2023年，2月20日，星期五第17页，共30页，2023年，2月20日，星期五二、限制性内切酶（restrictionendonuclease）

限制性内切酶是从细菌中分离的一类专门识别和水解特定核苷酸序列的内切酶类。这类酶在原核生物体内，用于“防御”外来DNA的入侵，将外来DNA以独特的方式切成无感染能力的片段，而自身不受损害（甲基化作用）。第18页，共30页，2023年，2月20日，星期五1.限制性内切酶的分类Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ

基因工程技术中常用Ⅱ型第19页，共30页，2023年，2月20日，星期五不需要ATP参加；不对DNA进行甲基化或其它方式修饰。专门识别和切割特定的核苷酸序列，这个序列一般含4—6个核苷酸残基，并具回文结构“落鹤岛上岛落鹤，垂柳岸边岸柳垂”。

2.II型限制性内切酶

第20页，共30页，2023年，2月20日，星期五Ⅱ类酶识别序列特点

回文结构palindrome第21页，共30页，2023年，2月20日，星期五切口（kerf）：粘端，平端第22页，共30页，2023年，2月20日，星期五第23页，共30页，2023年，2月20日，星期五第24页，共30页，2023年，2月20日，星期五3.限制性内切酶的种类（约1000多种）

第25页，共30页，2023年，2月20日，星期五Hin

dⅢ

属

系

株序Haemophilusinfluenzaed株流感嗜血杆菌d株的第三种酶命名naming第一个字母取自产生该酶的细菌属（genus）名，用大写；第二、第三个字母是该细菌的种（species）名，用小写；第四个字母代表株（strain）；用罗马数字表示发现的先后次序（sequence）。第26页，共30页，2023年，2月20日，星期五4.限制性内切酶在基因重组中的应用

第27页，共30页，2023年，2月20日，星期五第28页，共30页，2023年，2月20日，星期五第29页，共30页，2023年，2月20日，星期五三、限制片段的长度和限制图1.限制片段的长度识别4个核