分析方法验证标准操作规程

SOP-Z-QA-002/F01/00SOP-Z-QA-002/F01/00NO。AnalyticalMethodValidationStandardOperationProcedure分析方法验证标准操作规程Dept.Dept.部门Name姓名Signature签名Date日期Preparedby QC制定 质量掌握部Reviewedby QC审核 质量掌握部Reviewedby QA审核 质量保证部Approvedby批准EffectiveDate生效日期ReviewDate复审日期DistributionDepartment分发范围:PM-Manufacture生产部制造PM-Package生产部包装PM-Warehouse生产部仓库EM设备工程部GM人事行政部

QA质量保证部QC质量掌握部EHS环境安康安全部Other其他〔说明具体部门〕 TableofContentsSOP-Z-QA-002/F02/00SOP-Z-QA-002/F02/00名目Purpose目的 2Scope范围 3EHS环境安康安全 3Definition定义 3Responsibility职责 5FlowChart流程图 5Procedure程序/要求 67。1 Requirement要求 67。2 Procedure步骤 9References参考 18Annexures附件索引 18RevisionHistory版本历史 18Purpose目的描述分析方法的验证步骤,确认分析方法到达使用要求。为以下试验的验证供给指导和参考.鉴别试验；杂质的定量测试或限度检查；原料药和制剂中有效成分含量测定；制剂中其它成分〔如防腐剂等〕的测定；制剂溶出度、释放度等检查中,其溶出量等；微生物限度。Scope范围本程序适用的化学方法和微生物方法的验证,这些检测方法用于以下目的:进展稳定性争论从而建立产品的有效期;商业用途及临床用途的产品及其生产过程、清洁过程的放行检测。另外,依据需要,本程序也可适用于在使用的上市产品、赋形剂、和原料产品的方法的开发和验证。EHS不适用。Definition定义空白样品不含被测物的特定样品。赋形剂在剂型配方中除原料药以外的其他成分。劝慰剂和药品组成根本一样但不含活性成分或用惰性成分替代活性成分的制剂,或由药品赋形剂组成的混合物,其用量等同于药品制剂中的用量。准确度真实值或认可的参考值与测量值之间的相近程度。检测限(DL〕定的数值。等同于检测限度〔LOD〕.定量限〔QL)分析规程的定量限是指样品中的被分析物能被准确和准确定量的最低量.定量限是样品组成中低水平化合物的定量分析的参数，尤其应用于杂质和/或降解产物的测定。等同于最低定量限〔LOQ〕。专属性〔选择性)指在一些可能存在的组分，如杂质、降解物、基质等存在时，对被分析物准确牢靠测定的力量。假设一个分析方法缺乏专属性，可由其他关心的分析方法作补充。线性分析规程的线性是指〔在给定的范围〕〔数量〕呈比例关系的力量.范围分析规程的范围是样品中被分析物最高和最低浓度〔数量)之间〔包含最高和最低浓度〕的间隔,已证明在此范围内分析规程具有适宜的周密度、准确度和线性。周密度分析方法的周密度是指在规定条件下自均质样品的屡次取样所获得的一系列测量之间的接近程度.周密度可从三个水平考虑：重复性、中间周密度和重现性。承受均质的,可信的样品进展周密度的争论。如不具备，可使用人工配制的样品或样品溶液进展争论。周密度通常以标准偏差或相关系数表示。重复性在短时期内一样操作状况下的测量周密度，亦称为方法偏差。中间周密度中间周密度表示试验室内部变量的周密度，比方不同的测试日,不同的分析员或不同的设备。加标样品一种制备好的物料，通常是在劝慰剂〔空白制剂〕中参加了量的被分析物。耐用性分析规程的耐用性是衡量它不受方法中参数的微小的、但是经过设计的变化的影响的力量,指示了规程在常规使用中的牢靠性。系统适用性分析规程的系统适用性是很多分析规程的根本要素,通过对设备、电气、分析操作和样品进展综合评估。方法验证方案特性值？各项试验的目的？如何进展数据分析？此方案必需由质量掌握部经理和质量保证部经理批准。药典方法的验证(确认)性,这就是通常所说的方法确认.一般要进展方法确认的有:滴定法色谱法〔有关物质,含量,限度试验，鉴别〕，光谱法〔如用于鉴别〕。每一类型的药典方法确实认在USP附录〈1226〉中已有规定。如某一药典方法用于其他品种，必需进展完整的方法验证。内包装材料直接与制剂接触的包装材料。外包装材料与制剂不直接接触的包装材料。Responsibility职责5.1 质量保证部。1依据验证主打算,确定需要进展验证、再验证或确认的分析方法.5。1。2收集和预备支持性的分析文件资料,供给任何有关分析方法的现状或存在问题的相关信息。分析文件资料包括，但不限于:待验证/确认的分析方法及拟定的掌握标准。分析方法的研发或早期验证报告,如有.相关的注册申报文件和公司的内部文件,或药典参照资料。5.1.3审核验证数据记录。5。1。4审核和批准方法验证/确认方案。5.1.5审核和批准方法验证/确认总结报告。。6审核和批准补充的或修订的方法验证/确认方案，如适用。质量掌握部5。2。1起草方法验证/确认方案和总结报告。5.2.2依据已批准的方法验证/确认方案实施验证.汇总数据及图谱信息，对过程中消灭的不合格进展必要的试验室调查。FlowChart流程图方法验证需求方法验证需求N药典方法Y方法验证方案制定〔确认方法的各项参数〕方法确认方案制定〔确认方法的适用性〕方案执行报告制定方法投入使用Procedure程序/要求Requirement要求方法验证/确认方案方法验证/确认方案应在实施验证前建立并获批准,确定了预定的和认可的承受标准。验证/确认过程〔要求验证特性〕的结果要认真记录，以此得出结论来判定此方法是否可到达预定要求.方法验证/确认方案包含以下根本要点:有一个可追踪的方案编号。描述待验证/确认的分析方法。描述每项验证活动及其目的。需评估的验证/确认特性参数的名称〔如，线性、准确度等)要求验证的特性参数(参见附件1〕:a〕准确度线性和范围周密度—重复性中间周密度f〕定量限g〕检测限h〕耐用性i〕系统适用性测试要求确认的特性-参见现行版USP附录<1226>比照品参照SOP—Z—QC-003《参比比照品治理程序》中的规定。。7记录试验中所用物料的特征〔比方,批号、过滤器供给商和型号、劝慰剂组成等〕中将使用的物料、设备、试剂和样品/标准品浓度、参数设定〔比方，流速、色谱柱批号、样品储存温度、试剂浓度等).7.1.1.8规定重复测试的次数。7。1。1。9在评估每一验证特性值时将承受预定的承受标准和统计工具(比方,均值、相对标准偏差、线性回归分析等〕。7.1。1。10承受标准可利用开发争论的资料及其他信息来建立验证承受标准。假设验证明验的结果不符合承受标准,失败的根本缘由的评估及整改措施必需记录并说明,并返回研发部门进展进一步的评估,QAQC的批准。药典分析方法药典赋形剂的方法不需再验证.试方法应依据科学依据进展验证。药典方法通常被认为已经通过验证,的适应性,以下试验并作报告：专属性、中间周密度、样品及标准品溶液的稳定性。药典中分析原料产品和制剂制剂产品的分析规程可能没有关于稳定性的陈述，有时需承受额外的规程来衡量稳定性及原料产品和制剂产品中的杂质。全部这些方法需经过验证。药典微生物测试方法药典方法无需验证。然而这些方法必需通过确认以显示其在实际使用条件下的适宜性。药典方法允许的变量〔比方，培育基、稀释剂、过滤器等〕应被认为是药典方法中的一局部，但必需证明此种变化不会影响方法的性能〔比方,中和、回收率、培育基供给商等)。非药典方法用于测试中间体、药品等的非药典方法须依据本规程、ICH、FDA、USP、中国药典的指南进展验证。对以下验证特性进展验证：准确度周密度〔重复性和中间周密度〕专属性〔包括影响因素试验〕检测限〔DL〕-〔LOD〕定量限〔QL〕-〔LOQ〕线性范围耐用性系统适用性7。1.5再验证当任何测试参数或方法进展了修改〔比方,不同试验室进展的测试、不同的培育基〕、或产品工用性需重验证。以确保分析程序能持续的保证药品的特性、强度、质量、纯度和效价以及药品的生物利用度。立的系统适用性，那么此分析规程须提请方法开发部门进展再评估、修正和再验证。方法验证的程度应基于变更的性质及依据验证方案的要求而定。。6方法验证总结报告方法验证/确认总结报告的格式参照验证报告的格式。7.1.6.1报告包含的内容报告中应包含验证过程中全部的试验、承受标准、结果和数据来源.全部与试验相关的具体内容(材料、设备、方法参数，等等〕应归纳在报告中并进展评估。验证活动和结果应合理安排，留意每一工程的实质性和小结。按承受标准的要求，把试验数据,如方法编号、样品信息、原始数据、统计数据(平均值、％RSD、线性回归数据等〕以表格的形式汇总.相关的色谱图、光谱图等都要包括在报告中，以支持试验中的相关数据结果〔如：样品和标准图谱、专属性/强度争论图谱等〕。在实施验证/确认方案期间发生的全部的试验室调查也将汇总在方法验证/确认报告中。7。1.6。2结果修约、推断、结论全部数据应当依据现行版SOP-Z-QA—022“有效数字的修约和运算”进展修约。全部报告中的数据将比照预定的承受标准进展评估.应明确出验证明验的结论,即该方法阅历证是否符合使用要求。7。1。6.3批准方法验证/确认报告必需经过与批准原验证/确认方案一样级别的签名者批准。7。1.7变更掌握验证过程中的变更必需依据现行版SOP—Z-TM-001“验证治理程序”。Procedure步骤定量/限度测试每次验证运行之前或期间须评估方法中规定的系统适用性参数。7。2.1。1准确度〔空白制剂)中参加量的被分析物〔加标样品)的80％,100％和120％，以确定方法的准确度。配方成分应尽可能反映成品的组成。测定准确度时,应包含了整个测试规格限度的范围.三个浓度,每个浓度下制备三份样品。计算每个样品相对于参加量的百分回收率.按承受标准评估每一结果.百分回收率的公式为:回收率％=测得量/参加量＊100％2。7。2.1。2周密度–重复性重复性表示短期内在一样的操作条件下的周密度.重复性也被称为系统周密度.全部测试工程的重复性:对于制剂产品，依据测试规程制备配方成分(空白制剂〕的供试液，在其中加了量的被分析物〔加标样品〕，预备6份100％测试浓度供9个样品(如33份样品〕完成检测.承受标准：参见附件2.中间周密度样品的制备、分析和计算详见第7。2。1.2节周密度-重复性，适用全部测试物质，并由其次个分析员、在不同的天、使用不同仪器〔假照试验室内有两台或以上仪器并经过确认合格〕,且承受各自配制的试剂/溶液。分别计算两个分析员的测试结果的相对标准偏差。2个分析员的结果也必需满足给定的重复性承受标准，两个分析员的RSD必需满足中间周密度承受标准,参见附件2。7.2。1。4专属性在鉴别测试、杂质及含量测定的验证期间，应进展专属性的争论。用于证明专属性的规程依靠于所用分析规程的预期目标。并不是总能证明某分析规程对于一个特定的被测物具有专属性〔完全区分).如此，建议使用由两个或多个分析规程来到达必需的区分水平.鉴别测试鉴别测试应运用于所关注的活性物质、相关化合物、降解物以及空白制剂。并对含有该物质的测试显阳性结果，对不含有该物质的样品显阴性结果。可以承受构造类似的合成前体或降解产物。但假设缺乏合成前体、降解产物,或者此活性物质的构造与某一可从商业渠道获得的化合物相关，那么鉴别测试应承受此可获得的化合物.一般应对活性物质、相关化合物、降解物以及空白制剂分别进展检测并获得相应的检测结果。承受标准:相对于其它构造相像的化合物，活性物质的响应是专一的〔比方，相对保留时间、色泽、吸取波长等〕。活性物质、相关化合物、降解物以及空白制剂应不相互影响检测结果。含量和杂质测试〔制剂产品)如可能，制剂产品的含量和杂质测试方法可承受一样于原料产品的方法。但仍需进一步确定专属性。色谱方法中，应用典型的色谱图来证明专属性，并在图上恰当地标出每一种成分，应在一等程度上考察关键组分的分别，对关键性分别，可用两个洗脱程度最接近的化合物的分别度来证明其专属性.当非专属性方法测定含量时,可用其他关心性的分析方法来证明整个方法的专属性，如：承受滴定方法来测定用于放行的原料药，可联合使用含量测定和杂质的合理检测方法。可以得到杂质的状况对含量测定来说，专属性应包括供给被分析物在杂质和(或)赋形剂存在时能被区分的证明，实际操作中可以在纯物质(原料或制剂)中参加肯定量的杂质或辅料，与未加杂质或辅料的样品测定结果相比较，以证明其含量测定结果不受这些物质的影响.对杂质检查来说，通过参加含有肯定量杂质的原料药或制剂，证明各杂质之间能分离，并也能与样品基质中其他组分分别无法得到杂质的状况假设杂质或降解物的比照品不能得到，专属性可以通过将含肯定量的杂质或降解产物的样品测定结果与另一种成熟的方法测定结果比较，如药典方法或经论证的其他方法〔独立的方法)进展比较来证明。必要时，应包括放置在强力破坏试验条件下，即光、热、湿度、酸、碱破坏及氧化状况下的样品的测定。假设杂质或降解物的比照品不能得到，专属性可以通过路含肯定量的杂质或降解产物的样品测定结果与另一种成熟的方法测定结果比较，如药典方法或经论证的其他方法〔独立的方法)进展比较来证明。对于含量测定，应比较两个结果。对于杂质测定,应比较杂质谱。色谱峰纯度测试有助于推断被测物的色谱峰是单个还是多个成分〔如:二极管阵列、质谱〕.配制等于或高于测试时承受的浓度的空白样品。必要时，在下述条件下暴露样品进展破坏试验：空白样品掌握-未受耐受性挑战的空白样品。热–406601光–将一薄层〔2mm厚〕，暴露在双倍于ICH耐光性指南中要求的条件下，或其他适当条件。–空白样品，在需考察的条件中，放置适当时间。药品热-406601个月，或其他适当条件.光–制剂去除包装，暴露在双倍于ICH耐光性指南中要求的条件下(总曝2。4百万勒克斯小时和400瓦特小时/平方米的近紫外能量).其他:酸、碱、氧化、高湿–制剂去除包装，或按处方配制的混合样品在需考察的条件中，放置适当时间.经上述暴露后测试。一般还应检查活性成分与相关化合物、降解物以及空白制剂之间的分别度状况。当制剂产品为复方制剂时,还应分别考察各活性成分的出峰状况。承受标准空白样品应无干扰；活性成分与相关化合物、降解物以及空白制剂之间的分别度应符合要求；复方制剂时，各活性成分的出峰时间应不相互干扰；的相关化合物和耐受性试验引入的降解产物不应干扰活性物质的测定。空白溶液用各自相应的样品溶液来评估，以确认是否有来自空白液的影响。计算活性QL5—20％，与治理层争论并评估测得的降解程度.。1.5检测限基于目测检查一般用于非仪器方法,但也可用于仪器方法.通过分析含被测物浓度的样品，来确立能牢靠的检测到被测物的最低水平。基于信噪比此模式仅适用于能产生噪音基线的分析规程。号比较，并建立能牢靠地检测到被测物的最低水平。3.检测限可表示成:DL=3。3σ/S说明：σ响应值的标准偏差S校正曲线的斜率斜率S可由被测物的校正曲线评估。标准偏差可通过多种途径获得，如:定，计算这些响应值的标准偏差。依据校正曲线:测试包含DLY轴截距可作为响应值的标准偏差。推举数据检测限和用于确定检测限的方法必需得到描述。假设DL是依据目测评估或信噪比来确定,供给相关色谱图即可.定数量的近检测限的浓度样品来验证。。6定量限依据目测评估目测评估一般用于非仪器方法,但也可用于仪器方法。能被定量测试的最低水平.基于信噪比此方法仅适用于能产生噪音基线的分析规程。号比较,并建立能牢靠地检测到被测物的最低水平。典型的信噪比为10:1。来确定。定量限可表示成：QL=10σ/S说明：σ响应的标准偏差S校验曲线的斜率斜率S可从被测物的校正曲线中估量。标准偏差可通过多种途径获得包括：测量，计算这些响应值的标准偏差。QL.回归方程的剩余Y轴截距的标准偏差可用来作为响应值的标准偏差.推举数据定量限和用于确定定量限的方法必需得到描述。此限度应通过分析肯定数量的近定量限的浓度的样品来验证。7。2.1.7线性和范围A.线性线性关系的评估应涵盖分析规程的范围,承受建议的测试规程直接用活性物质〔稀释标准储藏液〕和/或产品组分的合成混合物的称量。应观测相当于被测物的浓度或含量的信号图来评估线性。假设呈现线性关系，使用适当的统计方法来评估测试结果，例如:通过最小平方法计算线性回归。应报告相关系数、Y截距、回归线斜率和残差平方和，并包含数据图。另外，分析实际数据点与回归线的偏差同样有助于评估线性。步骤为建立线性分析，推举使用至少5个浓度。其它模式应作评价。每个浓度水平峰面积对浓度作图。当响应值与浓度的关系呈线性时可使用线性回归分析，计算相关系数、Y截距、斜率和残差平方和，并用数据图表示。假设响应值和浓度关系不是直接线性,在进展线性回归分析之前可先进展数学转换.承受标准:参见附件2。B。范围特定的范围通常得自线性争论，并基于规程的应用。分析规程的范围是通过测试含有分析规程特定范围内或极端处被测物量的样品时，分析规程能供给可承受的线性、准确度和周密度来确认.步骤应考虑以下最小的特定范围:活性物质或成品的含量测定：一般为测试浓度的80％～120%；含量均匀度:掩盖至少是测试浓度的70%至130%，除非基于制剂的性质〔如：有定量装置的吸入剂)使用更宽的适用范围。溶出度测试：指定范围的±20%.例如：一个控释产品的规格为1小时后的20%到24900～110%.杂质测定：从杂质报告水平至规格的120%。对于那些有显著作用或能产生有毒或非预期的药理作用的杂质，检测/定量限应与杂质的掌握水平相当。假设含量和纯度测定在一个测试进展，且只有100％标准品被使用，则线性应当120％含量规格的范围。线性范围可通过争论在线性、准确度和周密度上的符合承受标准来确定。7。2.1。8耐用性耐用性是衡量分析规程保持不受设计的小的变化影响的力量.这些变化通常是保持牢靠性.假设测量易受分析条件的影响，则应适当掌握分析条件，或在规程中作预先声明。典型的变化例子有：分析溶液的稳定性萃取时间在液相色谱的状况下，典型的变化例子有：流淌相中pH变化的影响流淌相组分变化的影响不同的色谱柱〔不同批号和/或供给商〕温度流速在气相色谱的状况下，典型的变化例子有：不同的色谱柱〔不同批号和/或供给商〕温度流速溶液稳定性〔推举〕被评估的溶液标准液、样品液、检测限溶液、定量限溶液、杂质类似物溶液和分别度溶液争论条件试验室环境条件和冰箱应考虑额外的被测物储存条件，如光敏性建议的争论周期样品溶液：12小时、24小时、48小时、72小时标准溶液：12小时、24小时、48小时、72小时步骤双份制备考察溶液，然后马上进展双份的含量测定。在考察的条件下储存制备液。在经过每个考察周期后对储藏溶液进展含量测定.受标准比较.承受标准–2检测限、定量限、杂质类似物以及分别度溶液也需评估稳定性。但这些溶液的承受标准应基于能供给认可的系统适用性的要求来制定.承受标准应在方法验证打算中得到规定。药品耐用性的样品制备萃取参数用制剂为关键区域的可变性评估样品制备步骤.典型的变化例子有：搅拌的时间、速度和温度及萃取体积。可变性搅拌的时间、速度和温度：建议参数值的上下25％。萃取体积:规程水平的一半和两倍.步骤双份测定每个指定参数下的考察样品的含量，评估所感兴趣的被测物的回收率，分析结果的平均值用于与承受标准作比较.留意对于杂质含量评估，承受参加了预定规格水平的代表性杂质的样品。假设可行，耐用性试验承受同一检测仪器、柱和/或流淌相。样品分析前应首先测试系统适用性，样品必需和标准制备一起进展测试。样品必需被标准制备所包围。过滤假设使用过滤，则评价回收率和干扰值。–依据规程,分析过滤后的药品制备液，测定平均值。–过滤稀释剂并依据定量方法测试。承受标准：回收率不得少于98％。干扰值不得大于1％。,则可削减参数。溶出度/释放率的样品制备参数溶出度/释放率步骤中典型的变化,参见附件3承受标准6获得的平均结果的5%内。过滤－假设承受了过滤，则评估回收率和干扰值.–依据规程，分析过滤后的相对标准偏差。–过滤稀释剂，依据定量方法测定.承受标准相对标准偏差不得过2。0％。干扰值不得大于1％。留意：假设评估的变化范围不能满足承受标准，则在有说明并有记录的状况下可削减范围，并在另一范围重进展试验。色谱系统—HPLC/GC色谱分析规程中的典型变化，参见附件3步骤承受规程的参数值及所列的范围值，评估每个变化点，同时保持其它参数在程序值。所争论样品包括：药品样品要求的标准溶液分别度溶液留意：可运行系统适用性周密度，但评估耐用性时不作要求。对于杂质分析，假设样品中没有一个可定量的杂质，必需在样品中参加药品中预期的主要杂质,其值为规格水平，所得结果应和承受拟定参数获得的结果相比较。假设打算不争论某一参数，则需在方法验证打算或验证方案中得到说明.标准溶液和样品溶液可在已建立的稳定性期限内使用。假设需要的制备液，此溶液需要在程序条件下经过测试。承受标准每一个被评估的变化范围应有符合要求的系统适用性参数，最终的系统适用性标准在耐用性试验完毕时建立/确认。分别度1。5拖尾<2.0容量因子2QL溶液的信噪比>10RSD％的2倍范围以内.比方，程序参数的RSD%0.30％，承受范围可以小于0.60％。承受程序参数获得的平均结果的％RSD应在周密度范围内。参加的杂质或恒定存在的杂质的平均结果应在承受规程参数获得平均值〔确定值〕0。40%，承受范围可以0.30％～0.50%之间。残留溶剂的含量平均值应在使用规程参数获得平均值的10%内。其它程序评估每个分析规程人为设计的步骤/参数的变化。记录此方案以说明参数/步骤变化时分析程序是牢靠的。承受标准变化不能超过程序相对于承受程序参数获得的平均结果的周密度。微生物测试方法本规程不对微生物检验替代方法的验证做规定。如需承受此类方法时，应由微生物技术人员QCQA经理的批准.药典通用方法必需通过方法适用性确认试验，确认在此检测条件下，所承受的方法适合于供试品的微生物检测。微生物限度检测方法需进展3次独立的平行试验，每次试验应尽可能使用不同批号的样品。方法验证试验应在阳性室进展。菌液的制备验证用菌种传代次数不得超过5代(从菌种保存中心获得的冷冻枯燥菌种为第0代),菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，假设于2～8℃保存，不得超过24小时.黑曲2～8℃，在规定的或验证过的贮存期内使用。取不大于100cfu的试验菌进展测定。供试液制