性病实验室检测与质量管理

性病实验室检测与质量管理第1页，共75页，2023年，2月20日，星期五性病实验室检测1性病实验室质量管理32第2页，共75页，2023年，2月20日，星期五病种实验室检查诊断依据梅毒暗视野显微镜检查梅毒血清学检查（梅毒特异性和非特异性抗体检测）流行病学史+临床表现+实验室检查淋病涂片镜检淋球菌培养淋球菌核酸检测生殖道沙眼衣原体感染沙眼衣原体抗原检测沙眼衣原体核酸检测沙眼衣原体培养尖锐湿疣疣体组织乳头瘤病毒核酸检测流行病学史+临床表现+/无实验室检查生殖器疱疹皮损单纯疱疹病毒抗原检测皮损单纯疱疹病毒细胞培养皮损单纯疱疹病毒核酸检测单纯疱疹病毒2型抗体检测第3页，共75页，2023年，2月20日，星期五梅毒第4页，共75页，2023年，2月20日，星期五梅毒由梅毒螺旋体（TP）感染人体引起的具有复杂临床表现的慢性感染性疾病，性接触是最主要的传播途径，其次是母婴传播，少数也可通过输血或间接方式传播。梅毒螺旋体又称苍白螺旋体，密螺旋体属，螺旋状的单细胞微生物，介于细菌与原虫之间。第5页，共75页，2023年，2月20日，星期五梅毒临床分期一期梅毒

硬下疳和（或）腹股沟淋巴结肿大。二期梅毒

病期在2年内有多形性皮疹、扁平湿疣等。三期（晚期）梅毒

病期在2年以上，可有皮肤粘膜损害和神经梅毒、心血管梅毒。隐性（潜伏）梅毒

早期：病期在2年以内；晚期：病期在2年以上。无任何梅毒的症状和体征。胎传（先天）梅毒

早期：在2岁前发病；晚期：在2岁以后发病。第6页，共75页，2023年，2月20日，星期五梅毒实验室检测病原学检测暗视野显微镜检查镀银染色梅毒螺旋体核酸检测血清学检测非梅毒螺旋体抗原血清试验（非特异性抗体检测）梅毒螺旋体抗原血清试验（特异性抗体检测）第7页，共75页，2023年，2月20日，星期五病原学检测暗视野显微镜检查镀银染色检查第8页，共75页，2023年，2月20日，星期五世界卫生组织推荐作为性病实验室必备项目之一。用于一、二期梅毒的皮肤黏膜损害（硬下疳、扁平湿疣、鳞屑性皮损）及淋巴结病变的检测。硬下疳出现1-2周后血清学试验才出现阳性，病原学检测可提高早期现症梅毒的检出率。为避免非致病性螺旋体干扰，谨慎用于口腔（齿垢密螺旋体）和直肠（屈折密螺旋体、蚀疮溃疡密螺旋体）部位的检查。试验敏感性不高，未检出螺旋体不能排除梅毒，应同时进行血清学试验。病原学检测第9页，共75页，2023年，2月20日，星期五可用于早期梅毒、现症梅毒、胎传梅毒的诊断及流行病学、复发与再感染、基因亚型与临床等研究。一期、二期梅毒溃疡组织有较高检出率，特别是一期梅毒患者生殖器溃疡分泌物，血液、脑脊液标本由于其中梅毒螺旋体含量极低，检测阳性率很低。梅毒螺旋体核酸检测目前不作临床常规项目开展第10页，共75页，2023年，2月20日，星期五梅毒血清学检测非梅毒螺旋体抗原血清试验（非特异性抗体检测）梅毒螺旋体抗原血清试验（特异性抗体检测）梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可对螺旋体表面的类脂物质作出免疫应答，在3-4周产生抗类脂抗原的抗体（反应素）。抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括重组梅毒螺旋体特异抗原），检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。未经治疗的病人，其血清内的非特异性抗体可长期存在。经正规治疗后，非特异性抗体滴度可以逐渐降低甚至转为阴性。感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。第11页，共75页，2023年，2月20日，星期五梅毒血清学检测非梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒非特异性抗体检测）性病研究实验室试验（VDRL）快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）

甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒特异性抗体检测）荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）梅毒螺旋体抗体免疫印迹试验(TP-WB)

梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（TP-ELISA）梅毒螺旋体快速诊断试验（TP-RT）梅毒螺旋体化学发光免疫分析法（TP-CLIA）

第12页，共75页，2023年，2月20日，星期五《梅毒非特异性抗体检测操作指南（WS/T491-2016）》2016-07-07发布2016-12-15实施非梅毒螺旋体抗原血清试验第13页，共75页，2023年，2月20日，星期五非梅毒螺旋体抗原血清试验VDRLVenerealDiseaseResearchLaboratoryTest抗原（心磷脂、卵磷脂、胆固醇的无水乙醇溶液）、磷酸盐缓冲液。RPRRapidPlasmaReagentCircleCardTest抗原（同上）、EDTA、氯化胆碱、磷酸盐缓冲液、碳颗粒。TRUSTTolulizedRedUnheatedSerumTest抗原（同上）、EDTA、氯化胆碱、磷酸盐缓冲液、甲苯胺红染色粒子。第14页，共75页，2023年，2月20日，星期五非梅毒螺旋体抗原血清试验VDRL（肉眼）第15页，共75页，2023年，2月20日，星期五非梅毒螺旋体抗原血清试验VDRL（低倍镜）1:1阳性1:2阳性1:4阳性1:32阴性1:16阳性1:8阳性第16页，共75页，2023年，2月20日，星期五非梅毒螺旋体抗原血清试验RPR与TRUST第17页，共75页，2023年，2月20日，星期五临床应用

辅助诊断梅毒螺旋体感染后，人体会产生抗类脂质物质的抗体。梅毒非特异性抗体检测呈阳性反应，与活动性梅毒有关，是判断“现症感染”的指标，结合梅毒特异性抗体检测结果可确诊梅毒。超过10%的静脉药瘾者的滴度＞1:8，部分早期梅毒和潜伏梅毒的滴度＜1:8，低滴度值不可用于排除假阳性反应。VDRL是唯一诊断神经梅毒的标准方法，对CSF有较高的特异性，呈阳性反应的患者，可结合流行病资料和临床表现诊断神经梅毒。VDRL/RPR/TRUST有如下结果，可作为判断先天梅毒的依据之一。新生儿的血清、CSF中梅毒非特异性抗体水平高于同期母亲2个滴度；新生儿CSF-VDRL呈阳性反应；出生后3个月内，与初期的血清、CSF中梅毒非特异性抗体水平增加2个滴度。第18页，共75页，2023年，2月20日，星期五临床应用

疗效监测在连续的疗效监测过程中，抗体滴度水平和变化趋势有着不同的临床意义：

抗体下降≥2个滴度判断治疗有效；

抗体下降≥2个滴度，并且连续2个监测周期的定性试验呈阴性反应，判断治愈；

抗体滴度下降＜2个滴度，或上升＜2个稀释度，在排除重新感染和实验室技术性误差的情况下，继续随访监测；

抗体上升≥2个滴度或定性试验从阴性反应转变成阳性反应，应结合流行病学史和临床体征，可判断复发、再感染或治疗失败。监测疗效时应采用与初次检测相同的方法和试剂。第19页，共75页，2023年，2月20日，星期五临床应用假阳性反应个别品牌真空采血管中含有的添加剂成分，可干扰检测结果引起假阳性反应。与梅毒感染无关的其它因素，如急性和慢性疾病、自然组织损伤等，梅毒非特异性抗体试验也可呈阳性反应。常见的疾病因素有系统性红斑狼疮、麻风病、疟疾、传染性单核细胞增多症、病毒性肝炎、肿瘤、其它螺旋体疾病等可引起假阳性反应。常见的生理性因素有孕妇、老年人群可发生假阳性反应。假阴性反应感染梅毒螺旋体后，机体免疫应答需要一定过程，抗类脂质的抗体浓度尚处于实验方法的检测限之下，称为窗口期。可发生假阴性反应。少数早期梅毒和神经梅毒以及部分晚期梅毒，可发生定性试验假阴性反应。前带现象部分早期梅毒（1%～2%二期梅毒、0.5%～1%一期梅毒）的样品可出现前带现象。血清固定部分晚期潜伏梅毒、少数其它病程的样品可发生血清固定现象。5－7%孕妇会出现一过性的RPR阳性。第20页，共75页，2023年，2月20日，星期五血清固定部分患者经过足量驱梅治疗，梅毒非特异性抗体维持在相对恒定的低滴度状态。判断血清固定，应具备3个要素：①流行病学病史和临床表现排除复发、重新感染；②连续2个随访周期（≥6月），血清抗体维持在±1滴度范围之内的低滴度水平（一般≤1:8），既变化趋势方向不明；③无实验室的技术性和方法学误差。少数患者可终生存在血清固定现象。第21页，共75页，2023年，2月20日，星期五方法原理优点缺点FTA-ABS完整形态的梅毒螺旋体作为抗原患者血清经吸收剂处理敏感性好、特异性高“金标准”操作繁琐技术要求高TP-WB超声裂解或重组的梅毒螺旋体印迹至硝酸纤维膜上可分别检测IgM/IgG“确证试验”操作烦琐价格昂贵TPHA超声裂解的梅毒螺旋体致敏红细胞肉眼可见凝集反应相对上述方法操作简单红细胞易产生非特异性凝集TPPA原理与TPHA相同惰性明胶颗粒作为载体试剂稳定特异性好早期梅毒敏感性不高

TP-ELISA重组的梅毒螺旋体抗原包被价格低廉大样本、可自动化厂家间敏感性和特异性差异较大TP-RT双抗原夹心法或间接法免疫层析试验或免疫渗滤试验简便、快速无需仪器设备敏感性、特异性有待评估TP-CLIA化学发光和酶免疫反应相结合双抗原夹心法敏感性特异性优于ELISA法、自动化试剂成本较高梅毒螺旋体抗原血清试验第22页，共75页，2023年，2月20日，星期五梅毒螺旋体抗原血清试验FTA－ABS完整的梅毒螺旋体包被——“金标准”。第23页，共75页，2023年，2月20日，星期五梅毒螺旋体抗原血清试验TP－WB（IgG/IgM）梅毒螺旋体转印或基因重组抗原包被——确证试验/胎传梅毒第24页，共75页，2023年，2月20日，星期五梅毒螺旋体抗原血清试验TPPA抗原为超声裂解的梅毒螺旋体，常用于实验室内部复核。第25页，共75页，2023年，2月20日，星期五梅毒螺旋体抗原血清试验TP－ELISA基因重组抗原，最常用筛查方法，敏感性、特异性有待评估。第26页，共75页，2023年，2月20日，星期五梅毒螺旋体抗原血清试验基因重组抗原，发展快、品牌多，性能有待评估。TP－CLIA第27页，共75页，2023年，2月20日，星期五梅毒螺旋体抗原血清试验TP－RT试验基因重组抗原，发展快、品牌多，性能有待评估。第28页，共75页，2023年，2月20日，星期五方法选择皮肤性病门诊/样本量少的实验室TP－RTTRUST/RPRTPPA入院检查/术前筛查/样本量大的实验室TP－ELISA/TP－CLIATRUST/RPRTPPA

第29页，共75页，2023年，2月20日，星期五流程选择皮肤性病门诊/样本量少的实验室特异性试验与非特异性试验同时做，异常结果时用另一种特异性试验复核（TPPA）；入院检查/术前筛查/样本量大的实验室特异性试验阳性做非特异性试验和滴度，异常结果时用另一种特异性试验复核（TPPA）；

第30页，共75页，2023年，2月20日，星期五梅毒螺旋体抗原血清试验

注明检测方法，如实报告；让医生结合流行病学史、临床表现综合判断；随访……TP－ELISA、CLIA、RT出现异常结果时需要复核，常用TPPA。第31页，共75页，2023年，2月20日，星期五TPPA存在1%假阳性，FTA－ABS/TP－WB试验仍不可或缺第32页，共75页，2023年，2月20日，星期五采用梅毒螺旋体作抗原，是特异性的抗原抗体反应。非特异性试验阳性的前提下，此试验阳性可确诊现症梅毒。绝大部分梅毒患者经过抗梅治疗后，特异性试验仍可阳性，故不能作为疗效观察的指标，也不能用于区分现症感染和既往感染。试验特异性较强，较少出现假阳性。梅毒螺旋体抗原血清试验第33页，共75页，2023年，2月20日，星期五非梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验感染因素肺结核病毒性肝炎肺炎球菌性肺炎亚急性细菌性心内膜炎传染性单核细胞增多症水痘、麻疹、钩端螺旋体病麻风传染性单核细胞增多症麻风莱姆病疟疾非感染因素自身免疫性疾病（系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、干燥综合征等）毒品成瘾者肝硬化孕妇衰老甲状腺炎系统性红斑狼疮梅毒血清学试验的生物学假阳性反应——第34页，共75页，2023年，2月20日，星期五非特异性抗体特异性抗体意义－－排除梅毒极早期梅毒艾滋病毒感染者合并梅毒

+

+现症梅毒（梅毒孕妇所生婴儿除外）治愈的晚期梅毒

+－生物学假阳性(＜1:8)－

+治愈的早期梅毒极早期梅毒三期梅毒(前带现象)梅毒血清学试验的结果解释第35页，共75页，2023年，2月20日，星期五早期梅毒实验室检查流程皮肤损害病原学检查血清学检查非特异性抗体+特异性抗体+有无—非特异性抗体-特异性抗体－非特异性抗体-特异性抗体+诊断梅毒非特异性抗体+特异性抗体－排除梅毒如非既往感染2周复检+第36页，共75页，2023年，2月20日，星期五淋病第37页，共75页，2023年，2月20日，星期五是由淋病奈瑟菌(简称淋球菌)引起的各种化脓性感染，是一种经典的常见的性传播疾病。革兰阴性双球菌、呈肾型、凹面相对、成双排列。营养要求高。对外界抵抗力极弱。淋病奈瑟菌第38页，共75页，2023年，2月20日，星期五直接显微镜检查淋球菌分离培养淋球菌非培养技术检测淋球菌（核酸检测）淋病的实验室诊断方法第39页，共75页，2023年，2月20日，星期五女性淋病涂片（宫颈）男性淋病涂片（尿道）直接显微镜检查第40页，共75页，2023年，2月20日，星期五男性淋菌性尿道炎的尿道标本敏感性及特异性可高达95%～99%，具诊断价值。宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时敏感性仅40～70%。不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部，以及女性宫颈淋球菌感染。不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确认。淋球菌涂片只做描述性报告，需注明“胞内/胞外”。直接显微镜检查淋球菌涂片只能确诊男性淋菌性尿道炎第41页，共75页，2023年，2月20日，星期五特异性极高（100%）；可发现无症状淋球菌感染患者；可用于进一步做药敏试验；可用于治疗后的判愈试验。对女性淋病、直肠、咽部淋球菌感染的确诊应做培养。淋球菌培养第42页，共75页，2023年，2月20日，星期五有极高的敏感性和特异性；下列情况有明显优势：

慢性淋病非典型感染，女性隐性感染使用抗生素之后某些直肠、咽拭子样本淋球菌核酸检测第43页，共75页，2023年，2月20日，星期五时间涂片（%）培养（%）核酸（%）国家调查数据201468.01（2192/3223）36.21（1167/3223）10.15（327/3223）本省调查数据201485.82（345/402）63.93（257/402）10.70（43/402）201583.68（359/429）62.94（270/429）10.02（43/429）※数据不包括疾控机构。淋病实验室检测项目开展情况调查第44页，共75页，2023年，2月20日，星期五第45页，共75页，2023年，2月20日，星期五生殖道沙眼衣原体感染第46页，共75页，2023年，2月20日，星期五沙眼衣原体原核细胞型微生物，比病毒大但比细菌小；具有DNA和RNA两种遗传物质；不能产生ATP，严格细胞内寄生；有独特发育周期：原体（有感染性），始体/网状体（无感染性）；第47页，共75页，2023年，2月20日，星期五女性盆腔炎、输卵管炎、不孕、流产和死胎。男性附睾炎、前列腺炎和不育。新生儿结膜炎、肺炎。约70%女性和50%男性为无症状感染生殖道沙眼衣原体感染第48页，共75页，2023年，2月20日，星期五直接涂片法抗原检测法（酶免法、快速法、免疫荧光法）细胞培养法核酸检测法生殖道沙眼衣原体感染的实验室诊断方法第49页，共75页，2023年，2月20日，星期五直接涂片法眼部感染：敏感性95％男性尿道：敏感性15％宫颈感染：敏感性41％主要用于新生儿眼结膜炎的诊断。第50页，共75页，2023年，2月20日，星期五抗原检测法免疫荧光法酶免法快速法敏感性74－90％71－97％33.3－49.7％特异性98－99％97－99％88.1－99.2％应用快速检测及非培养法阳性标本的确证。临床沙眼衣原体感染和健康体检的筛查。临床症状典型病例的检测。特点需要荧光显微镜，依靠实验者的主观判断。检测LPS（活动的沙眼衣原体的标志）快速、简便、无设备要求敏感性普遍不高，易造成漏检。第51页，共75页，2023年，2月20日，星期五细胞培养法敏感性：52－92％特异性:99－100％实验室条件和实验技术要求高、费时、敏感性低。

“金标准”方法用于沙眼衣原体感染的确证、方法学评价和科研。第52页，共75页，2023年，2月20日，星期五核酸检测法敏感性：75－97％特异性:98－100％实验室条件和技术要求高。应用于临床沙眼衣原体感染检查和健康体检筛查，被誉为“扩大的金标准”。第53页，共75页，2023年，2月20日，星期五不同国家/地区性病报告病例构成比第54页，共75页，2023年，2月20日，星期五2015年医疗机构性病诊疗服务及实验室管理现状现场调查第55页，共75页，2023年，2月20日，星期五抗原（%）核酸（%）2014年70.40（283/402）14.18（57/402）2015年71.50（307/429）13.75（59/429）浙江省沙眼衣原体检测项目调查※数据不包括疾控机构。※截止2016年1月全省评审通过的临床基因扩增检验实验室159家。第56页，共75页，2023年，2月20日，星期五医疗机构抗原检测核酸检测阳性率（%）备注阳性率（%）备注杭州**医院14.44（13/90）艾博14.85（75/505）RNA慈溪**医院-

9.88（182/1843）未知温州**医院3.95（31/784）立明-

海宁**医院13.33（6/45）立明-

湖州**医院0（0/31）凯创-

上虞**医院4.72（20/424）立明-

义乌**医院0（0/5）凯创-

舟山**医院0（0/244）凯创-

台州**医院0（0/100）凯创40（8/20）凯杰温岭**医院4.78（11/230）艾博-

丽水**医院11.42（53/464）安图8.28（40/483）达安松阳**医院37.5（3/8）安图-

浙江省沙眼衣原体检测阳性率调查（2016年5月）第57页，共75页，2023年，2月20日，星期五生殖器疱疹第58页，共75页，2023年，2月20日，星期五生殖器疱疹主要由单纯疱疹病毒2型（HSV-2）引起。DNA病毒，细胞侵袭力强。病毒较易潜伏在脊神经节内。有两个血清型，一般HSV-1主要感染腰以上部位，HSV-2主要感染腰以下部位。生殖器疱疹病毒第59页，共75页，2023年，2月20日，星期五形态学检查：涂片检查、免疫荧光法；细胞培养：传统的“金标准”；血清学检测：ELISA法、免疫印迹法；核酸检测：PCR法；

生殖器疱疹的实验室诊断方法第60页，共75页，2023年，2月20日，星期五单纯疱疹病毒抗体检测实验室最常用的方法；可区分HSV1和HSV2感染；可分别测定IgM和IgG抗体；诊断疑似患者或非疱疹期感染者；孕妇和新生儿筛查；

HSV感染与免疫状态原发感染初发IgM(+)IgG(-)非原发感染初发IgM(+/-)IgG(+)复发IgM(+)IgG(+)无症状/不典型感染型特异性IgG(+)抗体产生的滞后现象影响现症感染的阳性率。第61页，共75页，2023年，2月20日，星期五尖锐湿疣第62页，共75页，2023年，2月20日，星期五尖锐湿疣由人乳头瘤病毒（HPV）感染引起。目前发现的有120多个基因型，约30型与肛门或生殖道损伤有关。70%的宫颈癌为HPV16/18感染，90%的生殖器疣为HPV6/11感染。人乳头瘤病毒第63页，共75页，2023年，2月20日，星期五人乳头瘤病毒疾病HPV亚型扁平疣3、10、14、15、20、21、27、28、41、49、63寻常疣1、2、4、7、26、27、29、40、41、54、57跖疣l、4疣状表皮发育不良5、8、9、12、14、15、17、19~25、36、38、46、47、49、50尖锐湿疣6、11、16、18、31、33、34、35、39、51、64~68、70、73鲍温病6、3l、34鲍温样丘疹病16、18、39、42宫颈上皮内瘤6、11、16、18、31、33、35、43、44、51、56、58、61浸润性宫颈癌16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68阴茎癌16、18女阴癌16、18第64页，共75页，2023年，2月20日，星期五人乳头瘤病毒检测分子生物学方法HPV6/11、16/18HPV分型全套第65页，共75页，2023年，2月20日，星期五尖锐湿疣的辅助诊断；尖锐湿疣复发的预测和随访；宫颈癌及其癌前病变的观察；男性生殖器肿瘤和肛门癌的观察；人乳头瘤病毒检测第66页，共75页，2023年，2月20日，星期五病种实验室检查诊断依据梅毒暗视野显微镜检查梅毒血清学检查（梅毒特异性和非特异性抗体检测）流行病学史+临床表现+实验室检查淋病涂片镜检淋球菌培养淋球菌核酸检测生殖道沙眼衣原体感染沙眼衣原体抗原检测沙眼衣原体核酸检测沙眼衣原体培养尖锐湿疣疣体组织乳头瘤病毒核酸检测流行病学史+临床表现+/无实验室检查生殖器疱疹皮损单纯疱疹病毒抗原检测皮损单纯疱疹病毒细胞培养皮损单纯疱疹病毒核酸检测单纯疱疹病毒2型抗体检测第67页，共75页，2023年，2月20日，星期五病种实验室检查诊断依据梅毒暗视野显微镜检查梅毒血清学检查（梅毒特异性和非特异性抗体检测）流行病学史+临床表现+实验室检查淋病涂片镜检淋球菌培养淋球菌核酸检测生殖道沙眼衣原体感染沙眼衣原体抗原检测沙眼衣原体核酸检测沙眼衣原体培养尖锐湿疣疣体组织乳头瘤病毒核酸检测流行病学史+临床表现+/无实验室检查生殖器疱疹皮损单纯疱疹病毒抗原检测皮损单纯疱疹病毒细胞培养皮损单纯疱疹病毒核酸检测单纯疱疹病毒2型抗体检测第68页，共75页，2023年，2月20日，星期五性病实验室检测1性病实验室质量管理2第69页，共75页，2023年，2月20日，星期五主要工作内容工作