药理学研究科学训练

科研全过程训练概况专业课程、专业外语、统计学、文献检索、常用软件应用（Word,Excel,PowerPoint,图表制作软件，Photoshop,SPSS,etc）阅读文献，确定课题（查阅文献能力）设计实验实验研究（取得初步结果，可以申请基金）统计分析资料；撰写论文答辩、会议报告（Chinese,English）2023/4/81第一页，共86页。一、药理学研究的类型根据研究目的分类基础研究：受体、递质、蛋白质、神经通路、信号转导、基因开发研究：围绕新药研发的药理学研究应用研究：提高治疗效果、减少不良反应的临床药理学2023/4/82第二页，共86页。一、药理学研究的类型根据研究内容分类药效及作用机制研究药动学研究根据研究方法分类实验研究整体动物实验离体器官、细胞实验临床研究2023/4/83第三页，共86页。二、对科研素养的要求独立研究工作的基本能力掌握信息,复习文献的能力科学实验设计能力科学实验操作能力科学论文撰写发表能力科学基金申请能力良好的素质，杜绝造假、剽窃文章的可信率、实验的可重复率2023/4/84第四页，共86页。

掌握信息,复习文献的能力如何针对课题复习文献2023/4/85第五页，共86页。1.站在巨人肩上看世界知识爆炸时代:广博、交叉学科

知识广博与深入、专业化间的矛盾〝开卷有益〞？2023/4/86第六页，共86页。2.按科研需要来复习文献充分占有文献〝方向〞─专业人员水平领域─专家水平课题─No.1专家水平2023/4/87第七页，共86页。2.按科研需要来复习文献文献分类书教科书:相关,交叉学科的基础知识专著编著(资料性)著作(文献性)(方向)(领域)综述资料性(方向)(领域)文献性(领域,课题)Originalpaper课题领域(个别)Datapaper快报摘要会议汇编自己定位不要变,别被文献牵着走2023/4/88第八页，共86页。3.如何收集文献检索重要文献;实验室或学者追踪;确定本学科的重要(核心)期刊分层次收集资料课题有关文献;尽可能收集原著/快报;要新,全本领域非课题文献;新综述,影响大的原著本方向非本领域文献:经典专著/综述不同方向相关知识:专著,教科书2023/4/89第九页，共86页。4.如何看文献精读与浏览看懂:问题的提出(Background)目的设计思想与依据研究对象与方法重要结果结论与启示熟悉程度方向:一般涉及;基础知识;学科水准;当前重大进展与趋势领域:了解焦点与热点;已/正/将进行的课题课题:(全面)历史现状展望；主要方法、手段2023/4/810第十页，共86页。5.文献整理运用自己专业知识按照文献的热点与焦点参照相关综述模式例TGFβ在肾纤维化中的意义(作用)

㈠背景知识

①肾纤维化

②TGFβ的理化特征

③TGFβ的生成与代谢、组织分布等

㈡肾纤维化病程中TGFβ的变化

①血浆的和肾组织的，蛋白与基因表达

②病程中的动态变化与临床病理生理表现

的（相关）关系2023/4/811第十一页，共86页。5.文献整理参照相关综述模式㈢TGFβ的生物学（肾）效应：整体，器官，细胞及分子效应

①外源或刺激内源TGFβ的效应（在正常和疾病条件）

②拮抗或促失活的效应㈣TGFβ效应的机理

受体及细胞内信号转导机理

TGFβ的基因表达和细胞表型改变的机理㈤肾脏疾病的TGFβ高/低表达的机理㈥TGFβ与其他已知肾纤维化因子间的关系（包括遗传易感因素）2023/4/812第十二页，共86页。5.文献整理㈦TGFβ参与肾纤维化发病的临床意义：诊断，治疗，预防策略此外，常用方法学和技术的整理

肾纤维化整体活离体模型；相关细胞的培养；细胞增殖表型转变；胶元测定；

TGFβ受体表达与活性检测……2023/4/813第十三页，共86页。6.如何撰写文献综述目的学科带头人与学科骨干写科研工作人员开题前写科学情报人员写研究生毕业论文(?)基层人员为写而写文献性与资料性,大综述与小专论2023/4/814第十四页，共86页。6.如何撰写文献综述小专论内容

审定好内容与题目(如上述例子)

要有思路，有观点，提炼科学问题，要告诉读者什么？概述问题的提出--研究的历史与背景--本问题(课题)的意义背景知识及相关基本知识（不要写成教科书或讲义）本专论要论述的主要内容,注意从课题与背景联系的学科高度分析小结存在的问题与今后的方向2023/4/815第十五页，共86页。6.如何撰写文献综述资料处理按专业知识列好提纲;文献(作的摘要)编号后按提纲归类背景材料,基础知识,立论依据;权威甚或经典;“教科书式或讲义式”语言不同意见,学术观点与资料如何处理资料的准确性,尤其是翻译,讲不清楚不如不讲老课题文献多,新课题文献太少2023/4/816第十六页，共86页。6.如何撰写文献综述如何表达自己的学术观点:评述?自引?逻辑分析内容集中,目标明确,不要广证博引(与研究生论文不同)参考文献:新(5年内2/3);背景材料,

立论依据;权威经典;

专论内容:新,反映进展,可引会议,摘要及个人咨询,准确发表:刊登进展/综述的专业杂志(如“进展”“国外医学”);专业论文杂志;查阅国内类似综述有无,避免重复.按杂志稿约修改(留底)2023/4/817第十七页，共86页。科学实验设计能力2023/4/818第十八页，共86页。1.实验设计的三个基本原则随机原则排除实验者的主观性，使每个实验单位都有同等机会被分配到实验组和对照组。重复原则实验的取样例数或实验次数2023/4/819第十九页，共86页。1.实验设计的三个基本原则对照原则并行对照配对对照自身对照前后对照2023/4/820第二十页，共86页。2.研究元素要准确处理因素（自变量）试验对象（人、动物；器官、组织、细胞、分子）试验效应（因变量）药物、方法和模型的关系2023/4/821第二十一页，共86页。3.课题目标要明确原则:目标明确;构思新颖;立论依据充分;实验方法恰当选题(科研目标,目的)目标具体:用实验手段解决科学问题,问题是什么,攻关，攀科学高峰，“关”、“高峰”是什么,在哪里?(目的与手段,工具的关系)射箭中的,忌打哪儿指哪儿，看看有什么变化，研究甚少，填补空白等。“三定”基础上明确该课题的学科地位(与原创新关系);注意工作的积累和发展;可参考文献整理中发现的和未解决的问题；将确定的目标逐字推敲写下来。2023/4/822第二十二页，共86页。4.实验方法的选择方法恰当(不是越新越好)

方法选择：目的决定方法选择；实验条件选方法；工作者熟练程度选方法；假设全部顺利，所得结果能否达到设计目标？动物的选择：注意种属、品系、性别差异给药方法：试药的溶解性、给药途径实验水平：整体必做！正常动物与模型动物经典与新建；是否需与人一致或接近；可行性；模型与分组适合研究目的为原则预防与治疗实验：尽可能做治疗实验2023/4/823第二十三页，共86页。4.实验方法的选择比较实验：选阳性药做量-效关系，证实方法和模型可靠。药效评价标准量-效关系：量反应、质反应、时反应（潜伏期、持续时间）时-效关系：药效难测时可用时-量代替药-靶关系：药-配体、受体动力学、酶-底物、药-蛋白相互作用观察指标多（广）或少（精）好？明确每个指标的原理和意义背景指标如证实疾病模型复制成功的指标；反映质控的指标；反映阴性或阳性的对照指标等→必须是肯定的结果探索性指标前瞻性指标2023/4/824第二十四页，共86页。5.影响实验样本数的因素药物效果生物差异实验技术统计处理两组例数相等;计量资料与计数资料；同体、配对、前后对比实验；特殊设计：拉丁方、正交、交叉设计样本数估计的原理2023/4/825第二十五页，共86页。6.实验剂量的确定最佳剂量的探索安全剂量的探索由已知药物的效价比值来推算。由剂量折算系数法计算出最大耐受量的等效剂量剂量递增方案2023/4/826第二十六页，共86页。剂量递增方案2023/4/827第二十七页，共86页。多剂量实验中剂量间距的确定整体动物：1：3：9/1：2：4：8离体实验：1：10：100：10001：3：10：30：100计算LD50或ED50的实验0%及100%之间有3～6个剂量质反应一般取1：0.6～1：0.85最反应取1：0.1～1：0.52023/4/828第二十八页，共86页。剂量换算不同种属动物的剂量换算2023/4/829第二十九页，共86页。5.实验方法要规范建立操作程序落实每个方法预试成熟，建立程序设计实验记录与观察内容实验记录表；单项归纳表；汇总表2023/4/830第三十页，共86页。6.实验结果要有预期预期结果阴性或阳性的解释与再证实；审定设计能否达到目标预期结果追踪深入研究的方向和可行性预期结果图表设计（发表是否单薄）预期结果的学术价值和地位

（写论文的Introduction,M&M）2023/4/831第三十一页，共86页。2023/4/832第三十二页，共86页。怎样写好实验记录2023/4/833第三十三页，共86页。1.基本要求一般要求记录本应事先印有页码，不得撕掉或挪作他用，即使写错了亦应如此。封面或首页应写明科研课题名称，开始工作年、月、日，工作者姓名，每本记录前1～2页应留作写实验目录及页次之用，便于查阅。所有数据，必须立即用不掉色的笔直接清晰地记录在记录本上，严禁用铅笔记录，因为容易退色和被涂改。如有写错不得涂改擦抹，必须改正时，可在错误处画道线或打×，然后写上正确数据，并由课题负责人签字，防止弄虚做假。电脑测得的数据应输入电脑，自动打印，贮存，最好拷贝一份，以防丢失或损坏。2023/4/834第三十四页，共86页。2.认真、客观、全面认真、客观、全面的记录。格式和内容实验方法试剂称量配制时间气候仪器设备动物结果2023/4/835第三十五页，共86页。3.立即、直接、清晰写记录的要求立即不能先记在心上，实验后补写记录，因为记忆有时不可靠。直接要直接写在记录本上，不能先写在纸条上，然后重抄，因为重抄有时抄错，有时甚至把纸条丢掉。清晰字体清楚，不要潦草，不要词不达意，自己能看懂，别人也看得清楚，今天清楚，日后也看得懂。自动仪器打印的数据、结果、图谱等必须将原件依顺序贴在记录本上，有条件的还可输入电脑保存。2023/4/836第三十六页，共86页。4.基本内容记录的内容年、月、日。有的实验还应注明室温实验名称目的材料实验方法，应注明引用参考文献；结果：包括原始数据，图，表，统计方法讨论或小结

2023/4/837第三十七页，共86页。药物效应的测量2023/4/838第三十八页，共86页。

1.药物-受体相互作用的测定生化结合研究（全部受体）功能研究（部分受体）realtimemeasurementstoptimemeasurement2023/4/839第三十九页，共86页。

1种配体与3种不同受体群的相互作用配体与受体结合的特异性是相对的，与药物浓度有关

2023/4/840第四十页，共86页。2.放射受体结合研究20世纪60年代，125I-ACTH、125I-血管紧张素;基本原理：配基与受体特异性结合，以放射性强弱表示结合容量。与放免分析相似（1955年发明，Yalow）2023/4/841第四十一页，共86页。放射配基结合过程图解

2023/4/842第四十二页，共86页。已知药物浓度，可得到受体结合剂量-反应曲线加入大剂量非标记配基，封闭受体，得到非特异性结合相应公式计算非特异性结合、总结合固定配基浓度，改变受体量符合一级动力学：随时间增加，结合达最大值；能被无药物介质逆转2023/4/843第四十三页，共86页。受体结合研究时的平衡情形

2023/4/844第四十四页，共86页。放射性配基结合实验中不同水平的特异性结合

2023/4/845第四十五页，共86页。特别注意点去除非特异性结合在一定浓度的敏感“窗”内进行2023/4/846第四十六页，共86页。3.功能性研究测定功能性反应方法多样经典生理反应酶活性第二信使水平反应、表达产物测定报告物质（酶、基因等）2023/4/847第四十七页，共86页。要求： 大的信-噪比：机体、仪器 基础状态稳定办法：找出衰减规律 设对照（不常用） 也必须在稳定的“窗”内进行2023/4/848第四十八页，共86页。生物制备的稳定窗

2023/4/849第四十九页，共86页。不同受体制备进行实验的前提敏感性和反应性不变（实际不可能）纠正系统不稳定性平衡周期达稳态对照2023/4/850第五十页，共86页。移动基线对剂量-反应曲线的影响

2023/4/851第五十一页，共86页。激动剂作用后指数性细胞死亡对剂量－反应曲线的影响

2023/4/852第五十二页，共86页。组织失去敏感性后，最大反应也丢失一个系统不太可能充当不同组织间基础反应变化的良好对照数据必须在稳定的“窗”内进行，避免继发作用靠一个剂量得到的反应不能下结论2023/4/853第五十三页，共86页。生物制备反应窗

2023/4/854第五十四页，共86页。剂量－反应曲线形状的改变显示继发反应

2023/4/855第五十五页，共86页。生物放大的基本原则具有终端器官反应的细胞体系具有很大价值2023/4/856第五十六页，共86页。细胞代谢指示物氢离子从细胞释放调控示意图

2023/4/857第五十七页，共86页。4.药物反应的表述基础与给药状态的差值原发反应变异性较大利用差值较好有多种转换方法2023/4/858第五十八页，共86页。两种描述药物反应的方法

2023/4/859第五十九页，共86页。生物制备剂量－反应曲线误差范围

2023/4/860第六十页，共86页。

实验数据的不同处理直接反应以对数浓度作图有较高精确性药物反应减去基础值降低反应测量误差反应值以基础水平的百分数表示变异大以最大反应值的百分数表示较好；需要较少的实验次数2023/4/861第六十一页，共86页。直接反应以对数浓度作图

2023/4/862第六十二页，共86页。从上图显示的数据所计算的delta反应

2023/4/863第六十三页，共86页。反应以基础值的百分率表示

2023/4/864第六十四页，共86页。Delta反应以最大delta反应的百分数计算2023/4/865第六十五页，共86页。连续累积剂量－反应曲线

2023/4/866第六十六页，共86页。研究结果的表达2023/4/867第六十七页，共86页。一、研究文章的撰写确定投哪本杂志文章的质量与杂志的档次要相称发表周期2023/4/868第六十八页，共86页。论文撰写基本格式与要求Bacon:Writingmakesanexactman.2023/4/869第六十九页，共86页。二、基本要求值得研究数据真实、经过统计学处理按照国际科学界公认的格式编排文体要好，含义确切、合乎逻辑2023/4/870第七十页，共86页。1978年1月美、加、英医学期刊编辑：《温哥华宣言》1991年国际医学期刊编辑委员会修改BrMedJ1991;302:338-3411995年人民军医出版社《医学生物学文献方法学》2023/4/871第七十一页，共86页。题目（title）作者姓名（author’sname）作者单位地址（address）摘要（abstract）关键词（keywords）引言（introduction）Nature例外材料与方法（materialsandmethods）结果（results）讨论（discussion）总结或结论（conclusionorsummary）致谢（acknowledgement）参考文献（reference）2023/4/872第七十二页，共86页。题目（title）：短！具体；简洁：通常不超过20个字确切；通常在论文写完后确定“甲氨蝶呤加四物汤治疗白血病46例”避免“关于……的研究、调查、分析、观察”作者姓名（author’sname）：第一作者……correspondence;contributedequally作者单位地址（address）2023/4/873第七十三页，共86页。摘要（abstract）目的、方法、结果、结论。150～250个字符，或不超过1000个英文字母。关键词（keywords）：3～7个。引言（introduction）：背景、本项研究的理论基础、为什么要进行此研究或提出假说。全部论文的1/10左右篇幅。引言的最后一句：目的。2023/4/874第七十四页，共86页。材料与方法（materialsandmethods）动物：种类、数量、来源、性别、年龄、体重、饲养条件微生物、细胞：种、型、株、系、培养条件技术、方法的步骤、条件控制仪器设备名称、产地、型号、精度药品试剂来源、规格、纯度、配制、存放条件计算机软、硬件来源;采用的统计学手段2023/4/875第七十五页，共86页。正确、恰当地表达结果文字叙述、图、表、照片、数据文字图表互不重复注意图、表的格式、各种单位的应用连续性数据用线图，非连续性数据用条图图注、表注，自明用标准差SD有效数字是标准差的1/3。进位：四舍六入，五进单。40％～45％；200g±15g；不用mg%，而用mol·L-1。2023/4/876第七十六页，共86页。结果（results）文字叙述、图、表、照片、数据文字图表互不重复注意图、表的格式、各种单位的应用连续性数据用线图，非连续性数据用条图图注、表注，自明用标准差SD有效数字是标准差的1/3。进位：四舍六入，五进单。40％～45％；200g±15g；不用mg%，