针对SRBSDV水稻病毒的ELISA检测方法课件

针对SRBSDV水稻病毒的ELISA检测方法ELISA基本原理：把具有免疫活性的免疫蛋白(抗原或抗体)结合到某种固相载体表面。使该免疫蛋白与某种特异性的酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体在检测中由于未经过其他任何处理,所以既有免疫活性,同时又保留其酶的活性。在试验时,把受检样品(待测的抗原或抗体)与酶标抗原或抗体按不同的步骤在固相载体表面起反应。然后用缓冲液洗漆,使固相载体上的抗原抗体复合物与其他物质分开。在一定范围内,结合在固相载体上的酶量与样品中受检物质的量成一定的比例关系。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,因为产物的量与样品中受检物质的量直接相关,故可根据反应物颜色的深浅进行定性或定量分析。由于酶是一种生物催化剂,催化效率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的灵敏度。dot-ELISA实验方法：一、材料：具有典型矮缩症状和条纹叶枯症状的水稻植株采自田间水稻植株上的白背飞風材料，暂时浸泡在无水乙醇中备用。二、抗原：用感染RBSDV的玉米病叶的粗提液作为免疫抗原合成SRBSDVCP蛋白的多肽与牛血清白蛋白交联成免疫抗原上述2种制备的抗原分别免疫BALB/C小鼠，分别制备RBSDV、SRBSDV的单抗。

酶标仪酶联免疫检测仪又称微孔板检测器，是酶联免疫吸附试验的专用仪器原理：光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号.电信号经前置放大，对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，最后由显示器和打印机显示结果.

检测单位用常用OD值表示，即被检测物吸收掉的光密度，OD=log（1/trans），其中trans为检测物的透光值。根据LB法则，OD值与光强度成下述关系：E=OD=log(l0/Ι)其中E表示被吸收的光密度，Ι0为在检测物之前的光强度，Ι为从被检测物出来的光强度。可广泛应用于低紫外区的DNA、RNA定量及纯度分析和蛋白定量，酶活、酶动力学检测，酶联免疫测定（ELISAs），细胞增殖与毒性分析，细胞凋亡检测，报告基因检测及G蛋白偶联受体分析等习题1.ELISA技术的基本原理是AA.酶与底物产生颜色反应B.抗原与抗体产生反应C.酶标反应2.酶标仪的应用范围不包括：CA.酶活、酶动力学检测B.酶联免疫测定C.DNA、RNA定量及纯度分析D.均可应用简述ELISA方法的基本原理。把具有免疫活性的免疫蛋白(抗原或抗体)结合到某种固相载体表面。使该免疫蛋白与某种特异性的酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体在检测中由于未经过其他任何处理,所以既有免疫活性,同时又保留其酶的活性。在试验时,把受检样品(待测的抗原或抗体)与酶标抗原或抗体按不同的步骤在固相载体表面起反应。然后用缓冲液洗漆,使固相载体上的抗原抗体复合物与其他物质分开。在一定范围内,结合在固相载体上的酶量与样品中受检物质的量成一定的比例关系。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,因为产物的量与样品中受检物质的量直接相关,故可根据反应物颜色的深浅进行定性或定量分析。参考资料：三种水稻病毒检测方法的研究与