微生物食源性疾病第二节

微生物食源性疾病第二节第1页，共27页，2023年，2月20日，星期四

1.金黄色葡萄球菌的简单介绍

金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）为革兰氏阳性球菌。无芽孢，无鞭毛，不能运动，呈葡萄状排列。兼性厌氧菌，对营养要求不高，在普通琼脂培养基上培养24h，菌落圆形、边缘整齐、光滑湿润不透明，颜色呈金黄色。最适生长温度为35℃～37℃，最适pH7.4。此菌对外界的抵抗力是不产芽孢细菌中最强的一种，加热80℃30min至1h才能杀死。一、形态结构第2页，共27页，2023年，2月20日，星期四2.形态结构

1.葡萄球菌呈球形或稍呈椭圆形，直径0.4~1.2μ分裂面不规则，菌体常常无规则堆积一起，呈葡萄串状。

2.葡萄球菌无鞭毛，不能运动。无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚膜。

3.革兰氏染色为阳性。其衰老、死亡或被白细胞吞噬后，以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。第3页，共27页，2023年，2月20日，星期四1.营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧。28~38℃均能生长，致病菌最适温度为37℃，PH为4.5~9.8，最适为7.4。2.在肉汤培养基中24小时后呈均匀混浊生长，在琼脂平板上形成圆形凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，不透明的菌落。二、培养与生理生化特性第4页，共27页，2023年，2月20日，星期四

3.不同种的菌标产生不同的色素，如金黄色、白色、柠檬色。色素为脂溶性。葡萄球菌在血琼脂平板上形成的菌落较大，有的菌株菌落周围形成明显的完全透明溶血环（β溶血），也有不发生溶血者。凡溶血性菌株大多具有致病性。第5页，共27页，2023年，2月20日，星期四

3.生化特性

本属菌触酶试验阳性，对糖的发酵反应不规则，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。第6页，共27页，2023年，2月20日，星期四三、抗原构造葡萄球菌抗原构造复杂，已发现的在30中以上，但是其目前了解化学组成及生物活性的只有以下几种：1.葡萄球菌A蛋白（ＳＰＡ）2.多糖抗原3.荚膜抗原第7页，共27页，2023年，2月20日，星期四1.SPA是大多数金色葡萄球菌细胞表面的一种蛋白，为完全抗原SPA可与人类和多种哺乳动物IgG的Fc段结合。SPA与IgG结合后的复合物具有抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等多种生物学活性。此外，SPA与IgGFc结合后IgG（除了IgG3）的Fab段仍能特异性结合抗原，可用于协同凝集试验，检测多种细菌抗原或抗原抗体复合物。SPA也是一种B细胞丝裂原，可使多克隆B细胞活化和增殖。第8页，共27页，2023年，2月20日，星期四２.多糖抗原：为半抗原，具有群特异性，存在于细胞壁，借此可以分群，A群多糖抗原体化学组成为磷壁酸中的N-乙酰葡胺核糖醇残基。B群化学组成是磷壁酸中的N-乙酰区糖胺甘油残基。３.荚膜抗原：其几乎所有金黄色葡萄球菌菌株的表面有荚膜多糖抗原的存在。表皮葡萄球菌仅个别是菌株有此抗原。第9页，共27页，2023年，2月20日，星期四完全抗原和半抗原的区别1.具有免疫原性与免疫反应性的物质，称为完全抗原(completeantigen)，如大多数蛋白质、细菌、病毒、细菌外毒素、动物血清等。既能刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能与其在体内、体外发生特异性结合反应。2.半抗原：其能与对应抗体结合出现抗原-抗体反应、又不能单独激发人或动物体产生抗体的抗原。它只有免疫反应性，不具免疫原性，又称不完全抗原。第10页，共27页，2023年，2月20日，星期四

四、金黄色葡萄球菌引起的肠胃炎及其预防（一）金黄色葡萄球菌的毒素金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一种重要的致病物质。本菌引起的食物中毒是因为食品污染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大量肠毒素而导致的。

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肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的肽链组成。分子量约为3000左右。易溶于水，难溶于有机溶剂。

近年报导表明，50%以上的金黄色葡萄球菌菌株在实验室条件下可产生肠毒素，并且1个菌株能产生两种或两种以上的肠毒素。第12页，共27页，2023年，2月20日，星期四（二）金黄色葡萄球菌肠炎金黄色葡萄球菌肠炎是金黄色葡萄球菌引起的，多因原发疾病长期用抗生素引起肠道菌群失调所致，抗生素敏感菌株受到抑制，耐药的金黄色葡萄球菌株趁机繁殖。金黄色葡萄球菌为侵袭性细菌，能产生毒素，对肠道破坏性大，所以金黄色葡萄球菌肠炎起病急，中毒症状严重，主要表现为呕吐、发热、腹泻。第13页，共27页，2023年，2月20日，星期四（1）临床症状呕吐常在发热前出现，发热很高。轻症大便次数稍多，为黄绿色糊状便；重症大便次数频繁，每日可达数十次，大便呈暗绿色水样便，外观像海水，所以叫海水样便。粘液多，有腥臭味，有时可排出片状伪膜，将伪膜放入生理水，脱落的肠粘膜即漂在水面上，对诊断帮助很大。体液损失多，患儿脱水、电解质紊乱和酸中毒严重，可发生休克。第14页，共27页，2023年，2月20日，星期四（2）检测手段

挑选大便粘液部分涂片，在显微镜下检查可见大量脓细胞，如经革兰氏染色，显微镜检查可见成堆的大量革兰氏阳性球菌。大便培养金黄色葡萄球菌生长，即可明确诊断。第15页，共27页，2023年，2月20日，星期四（三）引起金黄色葡萄球菌肠毒素中毒的食品1.糕、凉拌切粉、剩大米饭和米酒等2.熟肉类食品污染了致病葡萄球菌，又在20-30°C的环境下放置较长时间，极易引起食物中毒3.乳和乳制品以及用乳制作的冷饮4.被葡萄球菌污染的油煎鸡蛋、熏鱼、油浸鱼罐头等含油脂较多的食品第16页，共27页，2023年，2月20日，星期四（四）预防措施1.主要对产乳牲畜应严格检疫，对患有乳房炎的奶牛产的乳不能作为食用2.要定期对食品从业人员进行健康检查。3.乳制品，特别是含乳的冷饮食品，必须使用经消毒的优质乳为原料，加工、保藏必须按照卫生操作规程进行，防止再度污染。4.已被金黄色葡萄球菌污染的食品，不能再食用，因一般的烹调温度不足以破坏肠毒素第17页，共27页，2023年，2月20日，星期四五、金黄色葡萄球菌的检验第18页，共27页，2023年，2月20日，星期四操作步骤：1.増菌2.分离培养3.血浆凝固酶试验4.肠毒素实验5.致病性试验（上述试验可初步判定葡萄球菌数目以及是否存在致病性葡萄球菌）第19页，共27页，2023年，2月20日，星期四吸取1：10的检样稀释液5ml注入75g/L氯化钠肉汤50ml中，37℃24h进行増菌培养返回第20页，共27页，2023年，2月20日，星期四将培养物划线接种于却甫曼氏平板或血琼脂平板上。经37℃培养24~48h后观察。挑取可疑菌落进行革兰氏染色，镜检。返回第21页，共27页，2023年，2月20日，星期四玻片法：取一块洁净的载玻片，一端滴加1:4新鲜兔(人)血浆，另一端滴加生理盐水，然后以接种环挑取可疑菌落的细菌少许，分别于血浆和生理盐水相混合，若血浆出现颗粒生理盐水浑浊，则凝固菌呈阳性。试管法：取1:4新鲜兔(人)血浆0.5ml放入小试管中，再加入培养24h的葡萄球菌肉汤培养物0.5ml，振摇均匀放入36℃水浴锅内每半小时观察一次，观察6小时，呈凝块为阳性。返回第22页，共27页，2023年，2月20日，星期四将分离到的可以菌株，经培养制备成肠毒素进行检验，也可使用待测样品做成1:10、1:100的稀释液后，直接进行动物试验。本实验最适动物为6~8周龄的幼猫，如有葡萄球菌肠毒素存在，幼猫与15min~4h内发生呕吐、寒颤、轻度腹泻，经4~5h后逐渐恢复正常。返回第23页，共27页，2023年，2月20日，星期四将分离到的葡萄球菌接种于肉汤中，37℃培养24h，取1.0ml培养液注射于家兔皮下，如有致病性葡萄球菌存在，则可引起局部皮肤溃疡坏死。静脉接种肉汤培养液0.1~0.5ml，24~48h后，如有致病性葡萄球菌存在，解剖后可见浆膜出血，肾脏、心脏及其他脏器出现大小不等的脓肿，切取组织块触片镜检。返回第24页，共27页，2023年，2月20日，星期四六、金黄色葡萄球菌肠毒素的快速检验（一）主要方法1.动物学试验法2.血清学试验法3.分子生物学试验法第25页，共27页，2023年，2月20日，星期四1.动物学试验法动物学试验即用幼猫和猴作为研究对象，喂食肠毒素，然后观察动物可能出现的各种异常的生理或形态变化，这是测定食物中肠毒素较早采用的一种方法。特点：结果判断直观、准确，在某些情况下可采用，但由于试验动物来源因难、灵敏度低、检测结果不够理想等使其应用受到极大的限制。返回第26页，共27页