MS培养基和GUS染色

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1、大量元素母液的配制（配0.5L）

无机盐中大量元素母液，依照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，分别用50ml烧杯称量，用蒸馏水溶解，必要时加热。溶解后，倒入500ml容量瓶中，最终用蒸馏水定容。在混合定容时，必需最终参与氯化钙，由于氯化钙与磷酸二氢钾能形成难溶于水的沉淀。将配好的混合液倒入细口试剂瓶中，贴好标签。配制培养基时，每配1000ml培养基，取大量元素母液50ml。

化合物名称每升培养基用量（mg/L）扩大20倍称量（g/0.5L）备注NH4NO3165016.5每升培养基取母液50mlKNO3190019.0KH2PO41701.7MgSO4●7H2O3703.7CaCl2●2H2O4404.42、微量元素母液的配制（配0.5L）

无机盐中微量元素母液，依照培养基配方的用量，把各种化合物扩大100倍，分别用50ml烧杯称量，用蒸馏水溶解，必要时加热。溶解后，倒入500ml容量瓶中，最终用蒸馏水定容。

化合物名称每升培养基用量（mg/L）扩大100倍称量（mg/0.5L）备注

MnSO4●4H2O22.31115每升培养基取母液10mlZnSO4●7H2O8.6430H3BO36.2310KI0.8341.5Na2MoO4●2H2O0.2512.5CuSO4●5H2O0.0251.25CoCl2●6H2O0.0251.253、铁盐母液的配制（配0.5L）

目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必需单独配成母液。这种螯合物使用起来便利，又比较稳定，不易发生沉淀。往往配成200倍母液，溶解时可加热。化合物名称每升培养基用量（mg/L）扩大200倍称量（g/0.5L）备注

Na2EDTA37.253.725每升培养基取母液5mlFeSO4●7H2O27.852.7854、有机物母液的配制（配0.5L）

MS培养基中，有机物为甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫氨素（V-B1）、盐酸吡哆素（V-B6），往往配成1000倍或100倍母液。本试验将有机物配成100倍母液。

化合物名称每升培养基用量（mg/L）扩大100倍称量（mg/0.5L）备注Glycine（甘氨酸）2.0100每升培养基取母液10mlThiamine-HCl（VB1）0.420Pyridoxine-HCl(VB6)0.525Nicotinicacid(烟酸)0.525Inositol（肌醇）1005000

以上各种母液必需用蒸馏水配制，然后保存在冰箱（4℃）中，一般可保存几个月，当发现沉淀或霉团时，则不能继续使用。

1）在烧杯内放入一定量的蒸馏水，用量筒或移液枪按上述表格内配方参与各种母液。2）参与蔗糖30g，待蔗糖溶解后加水定容至1L。

3）调理PH值，用酸度计测量PH值至6.2，加热后会降至5.8，常用1mol/l的HCl或NaOH调整。

4）参与琼脂8g，配置固体培养基，液体则不用参与。5）培养基高压灭菌20min.

5）将配好的培养基及时分装到一次性培养皿中，每皿30ml，分装时不要沾壁口。6）用封口膜将培养皿封口。

GUS染色一染色液配制X－Gluc母液（-20℃）

X-Gluc用N-N-二甲基酰胺(DMF)配成20mM的贮存液，分装成每管100μL，保存于-20℃。X－Gluc洗液（4℃）

NaH2PO4.2H2O50mM0.78g/100mlNa2HPO4.12H2O50mM1.79g/100mlNa2EDTA10mM372mg/100mlTriton-1000.1％100μl/100ml

K3[Fe(CN)6]（铁氰化钾）（0.5mM，16.5mg）K4[Fe(CN)6]3H2O（亚铁氰化钾）（0.5mM，21.1mg）染色液：50μlX-Gluc母液＋450μl基液5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）；N-N-二甲基甲酰胺（DMF）；NaH2PO4；Na2HPO4；Na2EDTA；Triton-100；

K3[Fe(CN)6]（铁氰化钾）；K4[Fe(CN)6]（亚铁氰化钾）。

将配好的GUS染色液分装于1.5ml的塑料管中1ml/管，－20°C保存备用。二染色方法

一般5d幼苗可进行试验，早上做以便利白天随时观测幼苗着色状况。1.90%丙酮4℃下固定20min可根据染色效果判断是否需要固定；2.加1mLGUS洗液洗去丙酮洗2遍；

3.将准备好的试材浸泡在染液，37℃保温1小时至过夜；4.隔一阵观测一下，染上色了就进行下面步骤；

5.吸出染色液，参与1mL