动物细胞工、单克隆抗体

现在是1页\一共有37页\编辑于星期四植物细胞A植物细胞B去掉细胞壁去掉细胞壁原生质体A原生质体B原生质体融合杂合的原生质体再生出细胞壁杂种细胞细胞分裂分化发育愈伤组织杂种植株温故知新:植物体细胞杂交过程现在是2页\一共有37页\编辑于星期四材料1:1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？人-鼠(想像图)现在是3页\一共有37页\编辑于星期四A细胞B细胞人工诱导1.1动物细胞融合的概念杂交细胞动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。一、动物细胞融合现在是4页\一共有37页\编辑于星期四细胞膜的流动性灭活病毒、PEG、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞诱导的手段？融合后细胞的类型？AB杂种细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB（A、B）含两种生物的遗传物质1.2动物细胞融合过程原理？现在是5页\一共有37页\编辑于星期四1.2动物细胞融合过程为什么灭活的病毒灭活病毒诱导细胞融合的原理：能作诱导剂？灭活丧失感染性保留融合活性现在是6页\一共有37页\编辑于星期四灭活病毒诱导细胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。P52生物技术资料卡现在是7页\一共有37页\编辑于星期四1.3动物细胞融合技术的意义和应用现在是8页\一共有37页\编辑于星期四植物细胞杂交与动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理使用的酶诱导方法主要用途细胞膜的流动性细胞的全能性细胞膜的流动性纤维素酶、果胶酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶物理方法（离心、振荡、电激）化学方法（PEG）物理、化学方法（PEG）灭活的病毒获得杂种植株制备单克隆抗体去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合现在是9页\一共有37页\编辑于星期四有梦想，才会有创造！已成功的动物细胞融合实例有很多，如人—小鼠、人—兔、人—鸡、鼠—兔、鸡—鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌—鸡、人—胡萝卜等细胞的融合。生物种间杂交想像图现在是10页\一共有37页\编辑于星期四【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是（）A.离心B.灭活的病毒C.电刺激D.振动【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（）具有原来两个或多个细胞的遗传信息B.能无限增殖C.可形成新个体D.培养过程会贴壁【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞

BB初试牛刀A现在是11页\一共有37页\编辑于星期四强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。温故知新二、单克隆抗体B淋巴细胞效应B淋巴细胞记忆B淋巴细胞分化现在是12页\一共有37页\编辑于星期四抗体的传统生产方法抗原反复注射动物从动物的血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。如何解决这个问题呢？单克隆抗体！现在是13页\一共有37页\编辑于星期四读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念

人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。2.1单克隆抗体的概念单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体现在是14页\一共有37页\编辑于星期四提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。2.2单克隆抗体的制备

现在是15页\一共有37页\编辑于星期四一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验现在是16页\一共有37页\编辑于星期四①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？②会有几种融合方式？③杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？④是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？⑤如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？现在是17页\一共有37页\编辑于星期四BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（第一次筛选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体的B细胞（第二次筛二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞√体外培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。现在是18页\一共有37页\编辑于星期四整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选：用特定的选择培养基筛选出多种杂交瘤细胞第二次筛选（克隆化培养和抗体检测）：筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。现在是19页\一共有37页\编辑于星期四39.筛选出的杂交瘤细胞产生的是同一种抗体吗？否，由于与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞有许多种，因此从这些种杂交瘤细胞中提取抗体的仍然是多种抗体的混合物。

抗原

抗原针对同种抗原的多种抗体40.怎样从众多杂交瘤细胞中筛选到能产生我们需要的产生特异性抗体的杂交瘤细胞？通常采用有限稀释克隆细胞的方法获得单细胞克隆，再利用抗原抗体杂交法检测，筛选出分泌产生所需特异抗体的杂交细胞株，然后进行扩大培养。现在是20页\一共有37页\编辑于星期四多孔动物细胞培养板将含有杂交瘤细胞的培养液按比例稀释，分别加入多孔细胞培养板的小孔中，稀释度保证每个小孔中的细胞数不多于1个，进行细胞培养。抗原抗体杂交法检验呈阳性利用抗原抗体杂交法检测杂交瘤细胞产生的特异性抗体现在是21页\一共有37页\编辑于星期四阳性孔方法——抗原-抗体杂交法

在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。第一次筛选第二次筛选现在是22页\一共有37页\编辑于星期四41.如何得到大量的单一抗体？培养特异的杂交瘤细胞，从中提取出单一抗体，即单克隆抗体。体外培养或体内培养42.如何培养杂交瘤细胞？现在是23页\一共有37页\编辑于星期四单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？

你学会了吗？现在是24页\一共有37页\编辑于星期四单克隆抗体筛选二杂交细胞杂交瘤细胞体外或体内培养筛选一骨髓瘤细胞

诱导融合分泌特异抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞群提取已免疫的B淋巴细胞动物细胞融合技术动物细胞培养技术单克隆抗体的制备既能大量繁殖又能产生专一抗体特异性强灵敏度高可大量制备课堂小结注射抗原现在是25页\一共有37页\编辑于星期四2.3单克隆抗体的应用诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。现在是26页\一共有37页\编辑于星期四“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物单抗导向，药物为弹头治疗疾病和运载药物主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。现在是27页\一共有37页\编辑于星期四谢谢现在是28页\一共有37页\编辑于星期四【例1】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞B.不经过免疫的T淋巴细胞D.不经过免疫的B淋巴细胞【例2】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）B淋巴细胞B．T淋巴细胞C．骨髓瘤细胞D．杂交瘤细胞A初试牛刀D现在是29页\一共有37页\编辑于星期四(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的

细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。（2）d过程是一个_____________过程，该过程的进行常用_____________或_____________的诱导。(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成

种类型的C细胞，因此需用__________培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是

，其特点是_________________________________________。效应B

抗原

细胞融合

聚乙二醇灭活的病毒

选择性3既能无限增殖又能产生特异性抗体

杂交瘤细胞现在是30页\一共有37页\编辑于星期四(4)在培养时通过________分裂方式大量繁殖。D细胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项）__________________________________。（5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是_________________。特异性强、灵敏度高

有丝无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH；适宜的气体环境

现在是31页\一共有37页\编辑于星期四15、（1）单克隆抗体是指

。（2）制备单克隆抗体的步骤：①将__________注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。②将步骤①获得的B淋巴细胞与步骤②培养的骨髓瘤细胞在_________________的诱导下融合。③将诱导后产生的多种细胞，放在_______培养基的多孔培养板上培养，筛选。④这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞_____________的能力，又具有________________的本领。⑤检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。⑥将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体。化学性质单一，特异性强的抗体

抗原

聚乙二醇选择性

无限增殖

产生专一抗体现在是32页\一共有37页\编辑于星期四（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：①体外培养法，可获得10μg/mL的抗体；②动物体内诱生法可获得5~20mg/mL的抗体。你选择的方法及原因是

。（4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的_______细胞制备的，其化学本质是___________，应用于人体，会作为

产生

，解决这个问题的方法是_____________________________。大量生产选①，小规模生产选②效应B蛋白质异物免疫反应采用人的效应B细胞制备现在是33页\一共有37页\编辑于星期四15、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：

（1）该方案能达到预期效果吗？

。原因是

______________________________________________。

（2）图中②为

过程，常用

作为诱导剂。该细胞继承了________