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7.5.4电化学发光免疫试验电化学发光免疫试验概况电化学发光免疫试验（ECLIA）

是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应。通过三联吡啶钌标记抗原或抗体的抗原-抗体反应顺磁性微粒分离技术广泛应用于临床各种项目的定量检测自动化分析要点（以双抗体夹心法为例）电化学发光免疫试验1.抗原抗体结合2.电化学发光反应3.光信号检测4.检测完毕临床检测试剂盒组成电化学发光免疫试验MR1R2甲胎蛋白（AFP）试剂盒M：链霉亲合素包被的微粒（透明瓶盖）R1：生物素化的抗AFP单克隆抗体（灰盖）R2：三联吡啶钌标记的抗AFP单克隆抗体（黑盖）RU电化学发光免疫试验检测原理1.抗原抗体结合温育RU将生物素标记的特异性抗体、待测标本和三联吡啶钌标记抗体，加入反应杯中共同孵育，形成生物素-抗体-待测抗原-钌标记抗体复合物。RUMR1R2电化学发光免疫试验检测原理1.抗原抗体结合温育RU然后加入链霉亲合素包被的顺磁性微粒共同孵育，使顺磁性微粒表面形成链霉亲合素-生物素-抗体-待测抗原-钌标记抗体复合物。RUMR1R2电化学发光免疫试验检测原理2.电化学发光反应工作电极磁铁RURU通过蠕动泵将上述生成的复合物送入到流动测量室。溶液中还可能包含未结合的标记抗体、抗原、顺磁性微粒等。电化学发光免疫试验检测原理2.电化学发光反应工作电极磁铁当磁性微粒流经电极表面时，磁性微粒被安装在工作电极下磁铁吸附于电极表面。RURU电化学发光免疫试验检测原理2.电化学发光反应工作电极磁铁同时，含有三丙胺（TPA）缓冲液流入，未结合的标记抗体等被冲走。RUTPATPATPATPATPATPARU电化学发光免疫试验检测原理2.电化学发光反应工作电极磁铁与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和三丙胺（TPA）在电极表面进行电子转移，产生电化学发光RUTPARU2+e-RU3+e-电化学发光免疫试验检测原理2.电化学发光反应工作电极磁铁RUTPARU2+RU3+H++e-RU3+与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和三丙胺（TPA）在电极表面进行电子转移，产生电化学发光电化学发光免疫试验检测原理3.光信号检测工作电极磁铁反应释放出的光信号通过光电倍增管测量其光强度，并计算出被分析物的相应浓度。RUTPARU2+光电倍增管电化学发光免疫试验检测原理4.检测完毕工作电极磁铁终止电压，撤去磁场，蠕动泵将清洗液泵进流动室清洗电极表面，准备下一次检测。RUTPA光电倍增管清洗液电化学发光免疫试验总结工作原理：电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体（抗原）,与相应配体发生特异的结合反应后进入流动测量室，电发光过程被启动。特点：电化学发光免疫测定有诸多特点，三联吡啶钌在电场中因不断得到三丙胺提供的电子，可周而复始地发光，持续时间长，信号强度高，容易测定容易控

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