微生物学试验

微生物学试验第1页/共18页微生物学实验第2页/共18页实验一微生物实验规则与安全、无菌概念及无菌操作技术的介绍实验二培养基的制备实验三消毒与灭菌第3页/共18页一.微生物实验规则与安全轻松的心态，认真的实验态度微生物实验的特殊性

-------把所有的微生物都看成是具有潜在致病性充分预习

-------了解实验目的、原理和方法，实验中要思路清楚实验记录

-------观察的结果或现象，分析第4页/共18页实验报告1.实验目的和原理2.实验材料3.实验方法或步骤4.实验结果或绘图5.思考题第5页/共18页实验操作应严格按操作规程进行有机溶液或溶剂不要接触火源，如乙醚或丙酮等（酒精灯的使用）使用一些贵重仪器：显微镜，灭菌锅、电泳装置、凝胶成像仪等，要细心操作，特别爱护称量药品时严禁药匙交叉使用，也严禁取出的药品又倒回药瓶中，造成污染嘴吸取试剂或菌液？遇有盛菌的试管或试剂瓶打破要及时报告

……第6页/共18页二.无菌概念及无菌操作技术

无菌概念

------实际上只是一种习惯用语，因为实验，科研，或生产实践中使用的微生物必须是单一的纯种或菌株，也就是除实验用菌外，无其他杂菌的污染。介绍器具的使用：

------标记，接种环，培养皿，涂布棒，接种等，超净台的使用，培养皿的倒置，斜面的形成第7页/共18页组号日期菌名ABCD第8页/共18页第9页/共18页实验二培养基的制备

一、实验目的

了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤

二、实验原理

培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。

原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。

------目前可培养微生物仅占微生物总量的1%左右第10页/共18页牛肉膏蛋白胨培养基：一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。高氏I号培养基（GauseI）：培养和观察放线菌形态和特征的合成培养基。马铃薯培养基（PDA）：培养基是分离真菌和细菌的常用培养基。用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖。第11页/共18页2216E培养基：分离海洋微生物的培养基配方

蛋白胨5克

酵母膏1克

磷酸高铁0.01克

琼脂15-----20克（固体培养基）

陈海水1000毫升（已过滤）

煮沸氢氧化纳（5%）的溶液调PH值7.6—7.8

第12页/共18页LB:(溶菌肉汤，lysogenybroth）：

培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌。通过培养工程菌，我们可以表达大量的外源蛋白，也可以拿到带有外源基因的质粒。胰蛋白胨(Tryptone)10g/L

酵母提取物(Yeastextract)5g/L

氯化钠(NaCl)5g/L

补水至1000ml根据经验值用NaOH调节该培养基的pH---7.4

(该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长)第13页/共18页三、注意事项调pH:1mol/LNaOH，1mol/LHCl

避免回调----影响培养基内各离子的浓度定容分装：液体----试管(管高）1/4，三角瓶（容积）1/2

固体----试管（斜面）1/5，三角瓶1/2

半固体----试管1/3

第14页/共18页GauseI:淀粉先用冷水调成糊状后加入沸水中使之完全溶解，然后按配方顺序依次溶解各成分（磷酸盐和镁盐混合易产生沉淀）。PDA:

用土豆应去皮切小块，避免带入杂质，产生泡沫，影响通气。灭菌：含糖培养基用0.06MPa，112℃

，15min或将其他成分先行灭菌0.1MPa，121℃

，20min

第15页/共18页实验三消毒与灭菌消毒----指消灭病原菌和有害微生物的营养体，但不一定能杀死细菌芽孢的方法灭菌----指消灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子。第16页/共18页灭菌的类型干热灭菌：利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌。160~170℃

，1~2h高压蒸汽灭