血红蛋白的提取和分离

波中高生理课双预案A课）班：名

编:陈审核赵春定

编：专五DNA和蛋质术课题血红蛋白的取和分(第课时）【学习标】1.记凝胶色法、电法分离生物分子的本原理，了缓冲液组成及其作；2.掌血红蛋的提取和分的基本程和方法。【完成目标目标一

原理提取和离蛋白质的理：蛋质的各种特的差异如分子的、所带的性质多少、溶解、吸附质和对其他子的种蛋白。（一）胶色谱法1.胶色谱法称做，是根据法。

等，由提取和分离分离蛋质的有效方白质

2.理：相对子质量同的蛋白质子通过胶时速度不，相对子质量较小蛋进入凝内部的通道路程，移动速度；而相对子质量的蛋白无法进入凝内部的道，只能在

移动，程，移动速度。相对分质量不的蛋白质分因此得分离。3.体过程：（1（）（）（4）（5相对分子质量较小的蛋白质凝胶颗粒相对分子质量较大的蛋白质

多孔板AB1．．．．A

的蛋白由于

作用进凝胶颗粒内而被滞；的蛋白被排阻在凝颗粒外，在颗粒之迅速通。B（1蛋白质合物；（2

开始，对分子质量小的蛋质扩散进入胶颗粒；相对分子量较大蛋白质排阻于凝胶粒之外）相对分子量较小蛋白质被滞；相对子质量较大蛋白质

移动。质还在进中。（二）冲溶液

不同的白质分子完分开；的蛋白行程较短，从层析中洗脱出来

的蛋白1．缓溶液的作用在一定围内，缓冲液能够制持。

对溶液pH的影，而保2缓冲溶液通由种

溶解于配制而成。节

可以制成在不pH范围使用的冲液。【思考1】维持人血液pH态的缓冲对。（三）泳1.念：电泳指

在

的作用发生

的过程2.理：许多要的生大分子，如

等都具可解离的基，在一的pH，这些基会带上。在电场的用下，些带电分子向着和

移动。3.电泳过程，决定电分子迁移向的是电分，决定带电子迁移快慢的是电分子、电量的同。4.用的电泳法是

和，在测蛋白质子量时通常使用。蛋白在聚丙烯酰凝胶中迁移率取决以及

等因素为了消除样分子原净电量对迁速率的响，可以在胶中加，使样品子的迁速率完全取于。波中高生课限作B基题1下列有关叙错误是（）A．醋酸制作果时，通入氧2．利用胶色谱法可离相对子质量不同蛋白质．进行DNA提取时，用精提取含杂较少的．接种需对培养基培养皿实验操作者双手等行灭菌处理2关于蛋白质取的叙中，不正确是（）．分离纯化蛋白质前首先用适当的方使蛋白释放出来．抽提要依据蛋白的不同性选择不同溶剂．蛋白的粗提取物心可除一些小分子质．蛋白的粗制品可是多种白质的混合3下列有关生技术实的叙述，正的是（）．制作酒和制作果所需的酵底物、适温度等相同．在植组织培养过中，制的MS养基需要用精消毒．用二胺鉴定DNA用斐林剂检测还原时均需水浴加热．用凝色谱法分离白质时和分子量较的蛋白相比，血红白移动慢4下图能正确示相对子质量不同蛋白质在凝胶中的进过程是()5下列对红细和血红白的描述，误的是()．哺乳物成熟的红胞可用制备细胞膜提取血蛋白的生物料．血红白属于细胞液的成，其组成元有C、H、O、、Fe．血红白的纯化可凝胶色法，其原理根据相分子质量大分离蛋质D．的红胞可进无丝裂，其征是没有出纺锤丝染色体的变6在血红蛋白提取过中，要使用酸缓冲处理的作用)防止血蛋白被氧气化血红蛋是一种碱性质，需酸中和磷酸缓液会加速血蛋白的取过程让血红白处在稳定pH范围，维其结构性质7下列关于提和分离白质的步骤确的是()样品处、凝胶色谱作、SDS聚丙烯胺凝胶电泳样品处、凝胶色谱作、纯样品处、粗分离、化、纯鉴定样品处、纯化、粗离、纯鉴定8利用凝胶色法分离白质的原理()．蛋白分子和凝胶亲和力大小．蛋白相对分子质的大小．蛋白所带电荷的少．蛋白溶解度的大9用凝胶色谱分离相分子质量小蛋白质，下列说话确的是()．路程长，移动速较慢．路程长，移动速较快．路程短，移动速较慢．路程短，移动速较快310凝胶常在离蛋白时使用，其种类很，但有相同作用是()．改变白质分子通凝胶时路径．吸附部分蛋白质从而影蛋白质分子移动速．将酶细胞固定在胶中．和蛋质分子进行学反应从而影响其动速度11下列对样的加入及洗脱的操错误的)A．样前打开色柱下的流出，使柱内凝面上的冲液缓慢下到凝胶的下面B．加样后，开下端口，使样品入凝胶内．等样完全进入凝层后，闭下端出口．用吸小心地将1mL析后的样加到色柱的端，不破坏凝胶面12下列提纯血红蛋的叙述错误是()．洗涤细胞时，使生理盐可防止红细破裂．猪成红细胞中缺细胞器细胞核，提时杂蛋较少．血红白的颜色可于凝胶谱法分离过的监测．在凝色谱法分离程中，红蛋白比分量较小杂蛋白移动13、了探究酒酵母固定的最佳件，科研人研究了化钙浓度对定化酵发酵性能的影，结果如图请回答(1)和利用游离酵母生产啤酒相比，利用固定化酵母的优点有_________________________________________________________________________________________________________________________________本实验果表明，随化钙浓的增大，凝珠机械度增大，完率结合发性能分析，备凝胶适宜的氯化浓度为________当氯化钙浓过高时发酵液中的糖度升高，酒精度下降，发酵受到影响，原因是______________________________________________________________________________________________________________________(4)用藻酸作为载包埋母细胞溶解海藻酸时最好用的方法，防发生焦糊。化好的海藻钠溶液后，再和已化的酵细胞充分混。若海酸钠浓度过，会导致________，定效果大降低。波中高生理课双预案A课）4班：名

编:陈审核赵春定

编：专五DNA和蛋质术课题血红蛋白的取和分(第课时）【学习标】1.记凝胶色法、电法分离生物分子的本原理，了缓冲液组成及其作；2.掌血红蛋的提取和分的基本程和方法。【完成目标目标二

实验操蛋白质提取和分离一般分四步：、、（一）品处理及粗离

和。1.细胞的洗

洗涤的的是去除，以利于续步的分离化。防止血凝固，应先加入；所用洗涤是

倍于红胞液的；洗涤中用璃棒，用离心

离心；涤干净的标是。2.红蛋白的放：在

和

作用下红细胞破裂放出血蛋白。3.离血红蛋溶液：搅拌好混合转移到心管，以2000r/min速度离min，试管中溶液分为层:第1层（最上层第2层（中上层第3层（中下层第4层（最下层其它杂质的

甲苯层的沉淀，的水溶层，沉淀层

色薄层体的液体将试管的液体用滤过滤，去脂溶性沉层，于液漏斗中静片刻后分离出下层的红透明液体，

溶液。4.析

将血红白溶液装入

中，入

中透析透析的的是除去血红蛋溶液中的

物质。（二）胶色谱操作1.第一步制，二要，因为，所以柱前需要根色谱柱内体积计算需要的凝胶。在装填凝柱时，得有2.）凝胶选择：。

存在。三步是。方法：制凝胶悬浮：计算称取一定量凝胶浸于成。凝胶色柱的装填方①固：将色谱柱直固定支架上

中充分胀后，配②装填将

一次性缓慢倒入5

内，装填轻轻敲色谱柱，使凝胶填均匀。③洗涤衡3.品加入和脱

装填完后，用

充分洗平衡12h使凝装填。（1加样前打开平齐，闭出口。

下端流口，使柱内胶面上

缓慢下到和）加透析样：用吸沿

将样品慢加入色谱内，不破坏。洗脱和集打开下端用磷酸缓冲液脱待用试管集流出液，（三）聚丙烯胺凝胶泳

接近色柱

时，判断

的蛋白是否达到要，需要行蛋白质纯的鉴定SDS聚丙烯胺凝电泳鉴血红蛋白纯三、操提示1红细胞的洗时，洗次数、离心度和离时间十分重。洗涤数过，无法去血浆蛋白离心速度过或离心间过长，会

等一同淀。2．为加快凝胶膨，可以加入除去凝中的和。

的湿凝用

加热，仅节约时间还能3凝胶色谱柱不能存气泡，原因气泡会，降低离效果。思考你能描血红白分离完整程吗？血红蛋提取和分离程序可为四大步，括：样处理、粗分、纯化纯度鉴定。首先通洗涤红细胞血红蛋的释放、离等操作集到血红蛋溶液，样品的处理再经过析去除分子较小的质，即；然后通凝胶色法将相对分质量较大质蛋白除去即样品；最后经丙烯酰胺凝电泳进。【当堂测】请将下实验流程图充完整波中高生课限作B基题1使用聚丙烯胺电泳过程中，不蛋白质电泳迁移率全取决()A.荷的多少B.分子的大C.链的多少D.分子形状差异2下列关于提和分离白质的步骤确的是)样品处、凝胶色谱作、SDS—聚丙烯胺凝胶泳样品处、凝胶色谱作、纯样品处、粗分离、化、纯鉴定6D.品处理、化、粗离、纯度鉴3凝胶常在分蛋白质使用，其的类很多但都有相同作用是()．改变白质分子通凝胶时路径．吸附部分蛋白质从而影蛋白质分子移动速．将酶细胞固定在胶中．和蛋质分子进行学反应从而影响其动速度4下列对样品加入以洗脱的操作误的是)A加样前，打色谱柱端的流出口使柱内胶面上的缓液缓慢降到胶面的面B加样后，打下端出，使样品渗凝胶柱．等样完全进入凝层后，闭下端出口．用吸小心地将析后的样品到色谱的顶端，不破坏凝面5下列对凝胶谱柱相操作过程正的是()将橡皮上部用刀切锅底状凹穴将橡皮下部用刀切凹穴插入的璃管的上部超出橡塞的凹穴底将尼龙剪成和橡皮下部一大小的圆片6使用SDS—丙烯酰凝胶电泳测蛋白质对分子质量，可选一组已知相分子质量的标蛋白同时进电泳，据已知相对子质量标准蛋白的泳区带置，用电泳移率和对分子质量对数作准曲线，可测出未蛋白的相对子质量下列说法不确的是)SDS和蛋白形成复合物掩盖不蛋白质间的荷差别，使电泳移率决于分的大小和已知对分子质量标准蛋的电泳带相，只能计出待测蛋质的相分子质量C.SDS引发剂和化剂的用下参和构聚丙烯胺凝胶D.果只是分混合物不需要测定白质的对分质量时就无需加入SDS此时电泳迁移率决于所带电和分子大小7将经处理破后的红胞混合液以2000r/min的度离心10min后，心管中的溶分为四层，上到下的顺依次是)血红蛋、甲苯层、他杂质暗红色沉淀、沉淀甲苯层沉淀层、血蛋白、他杂质的暗色沉淀其他杂的暗红色沉物、血蛋白、甲苯、沉淀甲苯层其他杂质的红色沉物、血红蛋、沉淀提高题8下列关于血蛋白的取和分离实操作正的是()分离红胞时采用低长时离红细胞放出血红蛋只需要入蒸馏水即分离血蛋白溶液是速短时心透析时用20mmol/L磷酸缓冲，透析9.胶色谱法凝胶电法是分离蛋质的两常用法，据回答问题。①凝胶谱法分离蛋质的原是根据不同小的蛋质分子在凝柱中的不同实现分的：②使用泳法分离蛋质．是用了待分离品中各分子的

差异，及分子本的、形状不同。10.红细胞含有大的血红白，红细胞机能主是由血红蛋完成，红蛋白的主功7能是携氧气或二氧碳，我可以选用猪牛、羊其他脊椎动的血液行实验，来取和分血红蛋白，回答下有关问题：血红蛋提取和分离程度可为四步：______、____________实验前新鲜的血液要切记采血容器中先加入檬酸钠，取回来，上进行离心，收血红蛋白溶。加入柠酸钠的目的__________________以上所的过程即是品处理它包括_____、收集血红蛋白溶。）收集的血蛋白溶在透析袋中以经过析，这就是品的粗离。透析的的是__________________透析的理是______________________________。）然后通过胶色谱将样品进一纯化，后经SDS－丙烯酰胺凝电泳进纯度鉴定。样品纯的目的是____