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平板菌落计数法第1页/共12页学习平板菌落计数法。实验目的第2页/共12页实验原理微生物的计数方法分为直接计数和间接计数。直接计数是通过血球计数板将微量体积样品中的微生物在显微镜下数出（详见实验三）。直接计数所计为微生物总数（包括死细胞和活细胞），而且适用于体积较大的微生物如酵母、霉菌的孢子等。第3页/共12页实验原理平板菌落计数法是一种典型的间接计数法。将一定稀释度的样品均匀接种到固体平板培养基中，培养长出单菌落后，可认为每个单菌落由一个微生物长出，根据稀释倍数可计算样品中的微生物浓度。该方法不受微生物的大小的限制，所计的只是活的可培养微生物，而且可用于混合微生物样品的计数。第4页/共12页1．编号取无菌平皿9个，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6（稀释度）各三套。另取6支试管，加入9ml无菌水，依次标明10-1、

10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。三.实验步骤第5页/共12页三.实验步骤2．稀释水样：用无菌吸管取1ml样品加入含9ml无菌水的10-1试管中，此即为10倍稀释。将10-1试管振荡，充分混匀。用另一吸管吸取10-1菌液1ml，加至含有9ml无菌水的10-2试管中，此即为100倍稀释。其余10-3、10-4、10-5、10-6稀释依次类推。固体样品：准确称取10g样品，加入90ml无菌水中，充分混匀后即为10倍稀释。将10-1试管振荡，使其充分混匀。用另一吸管吸取10-1菌液1ml，加至含有9ml无菌水的10-2试管中，此即为100倍稀释。其余10-3、10-4、10-5、10-6依次类推。第6页/共12页3．加样倒平板：方法一：用不同的灭菌吸管分别吸取10-4、10-5、10-6稀释液1ml，分别注入3个灭菌培养皿中。分别立即倾注约15ml已熔化并冷却到45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基，并立即在桌面上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀（每稀释度做3个）。另取一空的灭菌培养皿，倾注牛肉膏蛋白胨培养基15ml，做空白对照。培养基凝固后，倒置于37℃温箱中培养。三.实验步骤第7页/共12页三.实验步骤方法二：取0.2ml一定稀释度的样品，加至冷却的平板中，用涂布器涂匀后，于37℃温箱中培养。取10-4、10-5、10-6稀释液，每个稀释度作三个，培养24-48h后计数取平均值。第8页/共12页4．计数培养24-48h后，取出培养平板，并按下列公式进行计算：方法一：每毫升中菌落形成单位（cfu）=同一稀释度的平均菌落数x稀释倍数方法二：每毫升中菌落形成单位（cfu）=同一稀释度的平均菌落数x稀释倍数x5注：一般选择每个平板上长有30-300个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较适宜。三.实验步骤第9页/共12页三．作业：计算菌体含量(单位:c

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