第十四基因重组与基因工程演示文稿

第十四基因重组与基因工程演示文稿现在是1页\一共有44页\编辑于星期五优选第十四基因重组与基因工程现在是2页\一共有44页\编辑于星期五一、同源重组

发生在同源序列间的重组称为同源重组(homologousrecombination)，又称基本重组。是最基本的DNA重组方式，通过链的断裂和再连接，在两个DNA分子同源序列间进行单链或双链片段的交换。现在是3页\一共有44页\编辑于星期五现在是4页\一共有44页\编辑于星期五现在是5页\一共有44页\编辑于星期五二、细菌的基因转移与重组（一）接合作用(conjugation)：当细胞或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA从一个细胞(细菌)转移至另一细胞（细菌）,这种类型的DNA转移称为接合作用。现在是6页\一共有44页\编辑于星期五

质粒：细菌染色体外的环状双链DNA分子。现在是7页\一共有44页\编辑于星期五可接合质粒，如F因子(Ffactor)现在是8页\一共有44页\编辑于星期五（二）转化作用(transformation)：通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型。现在是9页\一共有44页\编辑于星期五（三）转导作用(transduction)：当病毒从被感染的（供体）细胞释放出来、再次感染另一（受体）细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转导作用。现在是10页\一共有44页\编辑于星期五现在是11页\一共有44页\编辑于星期五第二节重组DNA技术现在是12页\一共有44页\编辑于星期五一、重组DNA技术相关概念（一）DNA克隆（也称基因克隆或重组DNA）

应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传物质DNA与载体DNA接合成具有自我复制能力的DNA分子，再通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，经扩增提取获得大量同一DNA分子。现在是13页\一共有44页\编辑于星期五现在是14页\一共有44页\编辑于星期五生物技术工程:

基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程等基因工程----实现基因克隆所采用的方法及相关的工作称基因工程,

又称重组DNA工艺学。

目的

：1、分离获得某一感兴趣的基因或DNA序列 2、获得感兴趣基因的表达产物(蛋白质)现在是15页\一共有44页\编辑于星期五（二）工具酶限制性核酸内切酶

DNA聚合酶I

逆转录酶

T4DNA连接酶碱性磷酸酶末端转移酶

TaqDNA聚合酶现在是16页\一共有44页\编辑于星期五

限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease)：识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+BamHⅠ现在是17页\一共有44页\编辑于星期五Ⅱ类酶识别序列特点—回文结构现在是18页\一共有44页\编辑于星期五BamHⅠGTCCAGGCCTAGGATCCG+GGATCCCCTAGGHindⅡGTCGACCAGCTGGACCTG+平端切口粘端切口现在是19页\一共有44页\编辑于星期五（三）目的基因（又称外源DNA）cDNA：经反转录合成的、与RNA（mRNA或病毒RNA）互补的单链DNA。基因组DNA：在真核生物体，基因组是指一套完整单倍体DNA（染色体DNA）和线粒体DNA的全部序列。现在是20页\一共有44页\编辑于星期五（四）基因载体（克隆载体）：为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。

常用载体：质粒DNA、噬菌体DNA、病毒DNA现在是21页\一共有44页\编辑于星期五

克隆载体(cloningvector)：为使插入的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体。

表达载体(expressionvector)：为使插入的外源DNA序列可转录翻译成多肽链而特意设计的载体。现在是22页\一共有44页\编辑于星期五现在是23页\一共有44页\编辑于星期五二、重组DNA技术基本原理及步骤1、目的基因的获取2、基因载体的选择与构建3、目的基因与载体的拼接4、重组DNA分子导入受体细胞5、筛选并无性繁殖含重组分子 的受体分子（转化子）现在是24页\一共有44页\编辑于星期五（一）目的基因的获取1、化学合成法

要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列。2、基因组DNA文库(genomicDNAlibrary)

现在是25页\一共有44页\编辑于星期五组织或细胞染色体DNA基因片断克隆载体重组DNA分子含重组分子的转化菌限制性内切酶受体菌基因组DNA文库：存在于转化细胞内由克隆载体所携带的所有基因组DNA的集合。现在是26页\一共有44页\编辑于星期五现在是27页\一共有44页\编辑于星期五现在是28页\一共有44页\编辑于星期五

3、cDNA文库：以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，即获得cDNA文库（cDNAlibrary）。现在是29页\一共有44页\编辑于星期五组织或培养细胞载体mRNAcDNAcDNA与载体连接导入大肠杆菌鉴定cDNA文库的克隆数与特征现在是30页\一共有44页\编辑于星期五（二）克隆载体的选择

常用载体：质粒DNA、噬菌体DNA、病毒DNA现在是31页\一共有44页\编辑于星期五载体的选择标准：能自主复制；具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定；有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点；分子量小，以容纳较大的外源DNA。现在是32页\一共有44页\编辑于星期五（三）外源基因与载体的连接现在是33页\一共有44页\编辑于星期五1、粘性末端连接：同一限制酶切割位点连接配伍末端连接现在是34页\一共有44页\编辑于星期五现在是35页\一共有44页\编辑于星期五2、平端连接适用于：限制性内切酶切割产生的平端粘端补齐或切平形成的平端3、同聚物加尾连接

由末端转移酶作用下，在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端，再进行粘端连接。现在是36页\一共有44页\编辑于星期五现在是37页\一共有44页\编辑于星期五4、人工接头：由平端加上新的酶切位点，再用限制酶切除产生粘性末端，而进行粘端连接。现在是38页\一共有44页\编辑于星期五现在是39页\一共有44页\编辑于星期五（四）重组DNA导入受体菌：

受体菌条件:安全宿主菌限制酶和重组酶缺陷处于感受态现在是40页\一共有44页\编辑于星期五导入方式：转化(transformation)

转染(transfection)

感染(infection)现在是