科研课题申请书讲课稿

:::::201412 月dC6、转移复发预后和裸鼠模型上去甲药是否重诱导探的治疗药判断预后提高我国治疗水平具有重要意义。键（）立项依据内容1、项目立项依据的食有密,密相但目前对发发展精确尚不完全清此,探索改变发发展治疗药判断预后提高我国治疗水平具有重要意义。cadherinCadherin细极性及形态形成以及参与间识别和信号传机制(1,2,3,4)。经典Cadherin如E-cadherin和N-cadherin 由外结合Cadherin所名u即3或。n-n分特征密切相关（670将n重新入缺失E-cadherin达肿瘤则肿瘤增殖及侵犯力显著1n（23，48推测n在这些肿瘤中可扮演肿瘤抑制基因角色,但尚无人对在不同肿瘤中基因及机制进行研究2003（黄志勇最新研究明将基因入缺失大鼠脑胶质母C6达n6，在大鼠脑胶质母瘤中肿瘤抑制基因功并进一步揭示抑制机制是通过诱达致使肿瘤于G2期阻滞该文发于udury1为进一步研究发病机制中起着重要作用（0，1，2，3。n基因在乳基化导致基因失活，进而导致其蛋白表达水平显著下降n(25)Riou16q2413个常常在肝癌中缺失表达的基因的转录研究发现，PLC/PRF/C,TONG和HA22TNGH四种肝癌细胞株中缺失表达，但n（（）进一步研究显示T-cadherin基因启动子在肝癌中高度甲基化，而E-cadherin基因启动子在肝癌中不发生甲基化，表明在Cadherin细胞粘附分子超家族中T-cadherin基因启动子甲基化在肝癌中具有高度特异性,且基因启动子甲基化与n（26n启动子甲基化是2ug/ml去甲基化药-deoxycytidine共孵6天能使皮肤鳞癌细胞株恢复n（。但目前对基因失活与肝癌恶性分化程度、肝内转移及复发等恶性生学特征的关系，以及应用去甲基化是否能诱导、侵袭及转移等恶性特征全世界尚无研究报基因功能调查缺失是否能的标本基因失活与恶性化程度、转移及复发等恶性生物学特征关系基因失活与临床预后及裸鼠模型上证实是否去甲基化药物能诱导、侵袭及转移等恶性生物学特征观察其潜治疗作用和可能毒副基因与C6恶性生物学特征关系及其机丰富经验预期该研究成果能国际先进水平。主要参考文献：AngstBD,CandMageeAI.Thecadherinsuperfamily:diversityinformandfunction.JCellSci.,2001,114:629-641KemlerR.Classiccadherins.Semin.CellBiol.,1992,3:149-155KollerE,RanschB.DifferentialtargetingofandN-cadherininepithelialcells.JBiolChem.,1996,271:30061-30067M.Cadherin cell adhesion receptor as a regulator.Science1991,251:1451-1455Angst,B.D.,c.,andMagee,A.L.TheT-cadherinsuperfamily:diversityinfromandfunction.J.CellSci2001,114:629-641Berx,plex:animportantgatekeeperinbreastcancertumorigenesisandmalignantprogression.BreastCancerRes.2001,3::289-293.Bremnes,R.M.,VeveR.,Gabrielson,E.etal.High-throughputtissuemicroarrayanalysisusedtoevaluatebiologyandprognosticsignificanceoftheE-cadherinpathwayinnon-small-celllungcancer.J.Clin.Oncol.2002,20:2417-2428.Handschuh,CandidusS.,LuberB.,etal.Tumour-associatedE-cadherinmutationsaltercellularcellularadhesionandincreasecellularmotility.Oncogene1999,18:4301-4312.Levenberg,S.,A.,KamZ.,etal.p27isinvolvedinN-cadherin-mediatedcontactinhibitionofcellgrowthandS-phaseentry.Oncogene1999,18::869-876.AlteredexpressionofE-cadherininhepatocellularcarcinoma:correlationwithgeneticalteration,beta-cateninexpression,andclinicalfeatures.Hepatology2002,36:692-701Vleminckx,K.,L.,MareelJr.M.,etal.GeneticmanipulationofE-cadherinexpressionbyepithelialtumorcellsrevealsaninvasionsuppressorrole.Cell1991,66::107-119.RiouP,SaffroyR,ComoyJ,etal.Investigationinlivertissuesandcelllinesofthetranscriptionof13genesmappingtothe16q24thatarefrequentlydeletedinhepatocellularcarcinoma.ClinCancerRes.2002Oct;8(10):3178-86.Sato,M.,Mori,Sakurada,A.,etal.TheH-cadherin(CDH13)geneisinactivatedinhumanlungcancer.HumGenet1998,103:96-101Lee,acadherinwithgrowthinhibitoryfunctionsanddiminishedexpressioninhumanbreastNat.Med1996,2:776-782Delgado,J.,etal.LossofH-cadherinproteinexpressioninhumannon-smallcelllungcancerisassociatedwithtumorigenicity.Clin.Cancer22、项目的研究内容、研究目标，以及拟解决的关键问题一、研究T-cadherin在肝癌中的基因功能将基因导入缺失表达的肝癌细胞株HepG2，使其表达分子，研究表达分子的肝癌细胞的增殖、侵袭及转移等恶性生物学特征的变化，证实是否将缺失表达的HepG2细胞和转染后表达的HepG2细胞于皮下接种裸鼠，在裸鼠肝癌模型上进一步证实基因的肿瘤抑制基因功能。研究否在肝癌细胞株存在与在C6细胞中一致的分子机制，即分子通过诱导表达致使肝癌细胞于G2二、在临床切除的肝癌标本中研究T-cadherin基因失活与肝癌恶性分化程度、转移及复发等恶性生物学特征的关系，在人肝癌中揭示T-cadherin基因失活与肝癌的恶性生物学特征及预后的关系。研究50例临床手术切除的肝癌标本及癌周肝组织中（失活与肝癌恶性分化程度、肝内转移（包括合并门静脉癌栓和卫星灶形成）的关系。2复发或肝外转移的肝癌病例的标本20（失活与肝癌复发和转移的关系。肝癌型上证实基化-deoxycytidine能的毒副作用。33、拟采取的研究方案及可行性分析一、研究T-cadherin（T-cad）在肝癌中的基因功能的技术路线1.构建T-cad表达载体pcDNA3.T-cad↓lipofectinHepG2↓G418分子的阳性克隆↓Westernblot鉴定转染后T-cad蛋白表达↓比较表达T-cad的阳性克隆与不表达T-cad的肝癌细胞的生物学特征:细胞增殖计数3H标胸腺嘧啶摄取率测定克隆增殖试验细胞粘试验细胞聚集试验的肝癌细胞的生物学特征裸鼠皮下分别接种（-）的肝癌细胞（各20裸鼠的生存期基因在肝癌中肿瘤抑制功能的分子机制阳性和阴性的肝癌细胞的细胞周期变化blot检测细胞周期调控蛋白p53,p21,p27,cyclinD的表达变化c.P21G2、基因失活与临床恶性化程度、转移及复发等恶性生物学特征关系技术路线收集临床手术切除标本及50例aPCRb.比较与组织缺失（基因失活）与人发生关系。c.比较不病例表水平与肿瘤病理级、内转移（包括合并门静脉栓和卫星灶形成）的关系。2~5cm之间、无内外转移、行根治性切除后采用治疗方案别选取切除术后半年内复发或转移以及2年内未复发或转移20例回顾水平与肿瘤复发和转移关系三、去甲基化药物及其治疗学意义技术路线1.明株HepG2,PLC/PRF/C,和HA22TNGH 缺失采用Herman 已报检实5’3下5’35’3采用nt平表达缺失2.的与去药2l）6天后blot;采用殖计数、3H标胸腺嘧啶摄取率测定、克隆殖试验、粘附试验聚集试验检测学特征变3.启高度（数1x107）分别接种60只裸鼠06只，每组分别按0.5ug、1ug、2ug、4ug、8ug/克体重每日皮下注射5-aa-’e共注射周对照组仅注射生理盐水，观察不同组裸鼠肿瘤生长速度、肿瘤转移发生时间、累及器官及频率及裸鼠生存期。4、项目特色及创新之处癌表达显著下降、缺失报导分这些肿瘤中可能扮演肿瘤抑制基因角色。申请人（黄志勇）最新研究首次证实angZhiyongMolecularandCellularBiology2003,23:566-578n研究工作基础，该研究将进一步揭示分子在肝癌中的基因功能和其分子机制，具有世界先进性和独创性。Cadherin