人类辅助生殖技术应用概述

人类辅助生殖技术应用概述第1页，共58页，2023年，2月20日，星期三人工授精夫精人工授精赠精人工授精常规体外受精-胚胎移植（invitrofertilization-embryotransfer,IVF-ET）常规体外受精单精子卵胞质内注射（intracytoplasmicsperminjection,ICSI）射出精睾丸/附睾精植入前遗传学诊断（preimplantationgeneticdiagnsosi,PGD）人类辅助生殖技术第2页，共58页，2023年，2月20日，星期三适应证男方因素宫颈因素免疫因素女方排卵障碍不明原因性不孕步骤夫精人工授精临床妊娠率10-15%第3页，共58页，2023年，2月20日，星期三促排卵治疗诱发排卵有排卵障碍的情况下以诱发单个卵泡或少数卵泡的发育为目的超排卵在可控制的范围内诱发多卵泡发育和成熟为ART奠定基础治疗的对象很多本身有正常的排卵功能第4页，共58页，2023年，2月20日，星期三2010-5-15IUI中促排卵的作用授精时间更精确纠正排卵障碍提供更多可用的卵子第5页，共58页，2023年，2月20日，星期三2010-5-15适应证输卵管盆腔因素子宫内膜异位症排卵障碍经促排卵治疗无效严重少弱畸精症无精症反复IUI失败免疫性不孕常规体外受精-胚胎移植（invitrofertilization-embryotransfer,IVF-ET）第6页，共58页，2023年，2月20日，星期三步骤药物促排卵经阴道穿刺取卵体外授精胚胎培养胚胎移植胚胎冷冻新鲜周期失败后解冻胚胎移植常规体外受精-胚胎移植

invitrofertilization-embryotransfer,IVF-ET第7页，共58页，2023年，2月20日，星期三GnRH激动剂：达必佳，达菲林GnRH拮抗剂：加尼瑞克，思则凯Gn：重组FSH：果纳芬，普丽康尿源性FSH：丽申宝，福特蒙尿源性FSH和LH：贺美奇，HMG主要药物第8页，共58页，2023年，2月20日，星期三促排卵方案-短效长方案GnRH-a0.1mgqd月经第二十天黄体中期GnRH-a0.05mgqdGn14-21天垂体达降调节标准主导卵泡达18mm时注射HCG，36hr后取卵第9页，共58页，2023年，2月20日，星期三促排卵方案-长效长方案月经第二十天黄体中期GnRH-a1.3mg单次注射Gn14-21天垂体达降调节标准主导卵泡达18mm时注射HCG，36hr后取卵第10页，共58页，2023年，2月20日，星期三促排卵方案-拮抗剂方案Gn主导卵泡达18mm时注射HCG，36hr后取卵月经第2-3天启动促排5-6天加拮抗剂第11页，共58页，2023年，2月20日，星期三ART临床治疗风险

穿刺并发症血栓栓塞

妊娠相关并发症

其它风险第12页，共58页，2023年，2月20日，星期三经阴道穿刺取卵术并发症严重并发症（0.5%-1.5%）阴道出血>100ml0.8%盆腔感染0.6%盆腔脓肿卵巢扭转盆腔出血卵巢过度刺激综合征第13页，共58页，2023年，2月20日，星期三取卵术后卵巢改变非常脆容易撕裂通过测定Hb和Hct的变化，推测通常取卵术后平均出血量232±130mL避免在卵巢内横向摆动第14页，共58页，2023年，2月20日，星期三卵巢过度刺激综合征

（ovarianhyperstimulationsyndrome,OHSS）

-促排卵最严重的医源性并发症

-正常妊娠中罕见

*发生率:-轻度：

8–23%

-重度：3.5-8%COH-轻中度：7.3%-重度：

4.2%第15页，共58页，2023年，2月20日，星期三病理及临床表现体液外渗毛细血管通透性增加胸水、腹水、心包积液、全身水肿低血容量血液浓缩高凝状态肾灌注减少少尿、无尿电解质紊乱血栓形成氮质血症腹胀、恶心、呕吐咳嗽、气促第16页，共58页，2023年，2月20日，星期三卵巢过度刺激综合征

（ovarianhyperstimulationsyndrome,OHSS）临床表现卵巢体积显著增大血液浓缩，腹腔积液，胸腔积液少尿电解质紊乱血栓形成、ARDS及多器官功能衰竭第17页，共58页，2023年，2月20日，星期三OHSS分度分类卵巢大小症状轻度5-10cm1级：腹胀不适2级：1级症状+恶心、呕吐及/或腹泻中度>10cm3级：2级症状+超声确定腹水4级：3级症状+腹水、胸水的临床表现和呼吸困难重度>12cm5级：4级症状+血液浓缩，血粘度增加、低血容量，肾灌注减少及少尿第18页，共58页，2023年，2月20日，星期三OHSS分度根据OHSS发生的时间，又分为早发型OHSS和晚发型OHSS早发型发生在HCG后3～7天，其发生与卵巢对促性腺激素的反应性有关，并且被外源性HCG激发晚发型HCG后12～17天，多伴有多胎妊娠，系内源性HCG所致晚发型OHSS程度往往比早发型严重第19页，共58页，2023年，2月20日，星期三体外授精-胚胎移植的实验室步骤第20页，共58页，2023年，2月20日，星期三实验室仪器设备实验室质控体外授精胚胎培养胚胎移植胚胎冷冻胚胎解冻体外授精-胚胎移植的实验室步骤第21页，共58页，2023年，2月20日，星期三A、显微操作系统B、程序冷冻仪及液氮罐C、CO2浓度测试仪和温度测试仪D、电子天平，超纯水仪和渗透压仪E、冰箱F、空气净化设备G、CO2和N2，混合气体气瓶实验室的仪器和设备第22页，共58页，2023年，2月20日，星期三1、显微镜A、相差显微镜B、体视镜C、倒置显微镜D、荧光显微镜实验室的仪器和设备第23页，共58页，2023年，2月20日，星期三IVF工作站实验室的仪器和设备第24页，共58页，2023年，2月20日，星期三CO2培养箱：实验室的仪器和设备ThermoK-systemG-185Cook®MINCBenchtopIncubator第25页，共58页，2023年，2月20日，星期三1、质量控制：温度：23±3℃湿度：30～60%气压：≥10Pa尘埃：百级（配子操作区），万级（胚胎实验室），十万级（更衣室，取精室）可挥发有机物（VOC）：＜0.5ppm振动，光照及噪音：胚胎培养实验室的质量控制和管理第26页，共58页，2023年，2月20日，星期三2、管理：A、按功能和清洁度分区B、实验室禁止吃，喝，抽烟以及使用化妆品C、培养箱和温台的监测D、冰箱的监测E、液氮罐的监测胚胎培养环境的质量控制和管理第27页，共58页，2023年，2月20日，星期三实验室禁止使用酒精等可挥发性有机物和紫外照射可用蒸馏水擦拭台面可用专用洗涤剂擦拭可能会被污染的台面或者区域可使用吸尘器吸走灰尘培养箱的清洁和消毒实验室的清洁第28页，共58页，2023年，2月20日，星期三1、温度和湿度：37.0±0.1℃，>90%2、pH：7.1≤

pHi≤7.2，7.2≤pHe≤7.43、气体：CO2和O24、渗透压：270～290mOsm/kg胚胎培养系统第29页，共58页，2023年，2月20日，星期三培养基的基本组成水：99%无机盐：维持培养基的渗透压和酸碱度碳水化合物：提供胚胎发育的能量氨基酸：促进胚胎体内外发育维生素：调控细胞代谢激素和生长因子：促进胚胎发育大分子物质：维持胶体渗透压，中和毒素抗氧化剂：减少氧自由基对胚胎的损伤螯合剂：螯合重金属离子抗生素：防止污染胚胎培养系统第30页，共58页，2023年，2月20日，星期三培养液配制和平衡胚胎培养系统第31页，共58页，2023年，2月20日，星期三第32页，共58页，2023年，2月20日，星期三单气培养：CO2(5-6%)，O2(21%)和N2(74%)三气培养：CO2(5-6%)，O2(5%)和N2(90%)优势：更接近生理状态（2-8%O2）单气培养和三气培养第33页，共58页，2023年，2月20日，星期三1、精子的形态结构精子和卵子精子形态精子变态示意图第34页，共58页，2023年，2月20日，星期三2、卵子的形态结构卵母细胞颗粒细胞复合体GV期MI期MII期第35页，共58页，2023年，2月20日，星期三异常卵母细胞第36页，共58页，2023年，2月20日，星期三1、常规体外授精体外授精精卵混合精卵结合第37页，共58页，2023年，2月20日，星期三2、卵胞质内单精子注射（ICSI）第38页，共58页，2023年，2月20日，星期三人胚胎体外发育第39页，共58页，2023年，2月20日，星期三异常受精单原核多原核三原核无原核第40页，共58页，2023年，2月20日，星期三胚胎发育阶段：卵裂球的数目胚胎形态学评分：胚胎的碎片评分：卵裂期评分标准8-1-18-2-18-2-3第41页，共58页，2023年，2月20日，星期三1期：囊胚腔小于胚胎体积的一半2期：囊胚腔大于胚胎体积的一半3期：完全囊胚，囊胚腔与胚胎体积相等囊胚的发育阶段1期2期3期第42页，共58页，2023年，2月20日，星期三4期5期6期4期：扩张囊胚，囊胚腔大于胚胎，透明带变薄5期：孵化囊胚，胚胎部分孵出6期：完全孵化囊胚第43页，共58页，2023年，2月20日，星期三胚胎移植数目：35岁以下第一周期：2个35岁以上或者第二周期以上：3个单胚胎移植：胚胎移植第44页，共58页，2023年，2月20日，星期三胚胎移植管装载胚胎移植管空气空气胚胎培养基第45页，共58页，2023年，2月20日，星期三1、精子冷冻：2、卵子冷冻：3、胚胎冷冻：4、生殖组织冷冻：配子和胚胎的冷冻及复苏第46页，共58页，2023年，2月20日，星期三程序化冷冻（慢速冷冻）玻璃化冷冻（快速冷冻）冷冻方法第47页，共58页，2023年，2月20日，星期三Slowcooling-0.3°C/min慢速冷冻法将胚胎放入含有一定浓度的冷冻保护剂处理后，慢速降温（0.2~3℃/min）,在这个过程中，随着细胞外温度的逐渐降低和细胞外冰晶的形成，细胞以一种平衡的方式逐步脱水。直到温度降至-150℃，至于液氮保存。第48页，共58页，2023年，2月20日，星期三Vitrification

-50.000°C/min1sec.玻璃化冷冻法采用更高浓度的冷冻保护剂处理细胞，快速降温，使细胞内外的液体均达到玻璃化状态第49页，共58页，2023年，2月20日，星期三玻璃化冷冻过程（两步平衡法）在不同浓度的冷冻液中进行平衡ESVS第50页，共58页，2023年，2月20日，星期三2.装管3.投入液氮，在液氮罐中保存。第51页，共58页，2023年，2月20日，星期三冷冻前置入冷冻液后0min置入冷冻液后4min置入冷冻液后8min第52页，共58页，2023年，2月20日，星期三囊胚冷冻前人工皱缩皱缩前皱缩后第53页，共58页，2023年，2月20日，星期三控制性超排卵B超监测下取卵体外受精和胚胎培养胚胎活检对活检的细胞进行检测选择胚胎移植入宫腔植入前遗传学诊断(PGD)第54页，共58页，2023年，2月20日，星期三常染色体隐性遗传病β-thalassaemiaCysticfibrosisSpinalmuscularatrophySicklecelldisease常染色体显性遗传病Huntington’sdiseaseMyotonicdystrophyCharcot-Marie-Toothdise