2019年人教版高中生物选择性必修3课件 1.2.2微生物的选择培养和计数

思考与讨论土壤微生物如何从自然界中将我们需要的微生物进行分离？耐热微生物温泉耐寒微生物冰川油田分解石油的细菌思考与讨论实例：水生栖热菌的筛选从水生耐热细菌Taq中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶美国黄石国家公园的一个热泉

水生栖热菌能在70～80℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。思考与讨论一、选择培养基

在微生物学中，允许

的微生物生长，同时抑制或阻止

微生物生长的培养基。特定种类其他种类(1)如何从大豆田土壤中分离出固氮微生物？(2)要分离出分解纤维素的微生物，应在什么样的环境中取土样？应配制什么样的培养基？(3)根据选择培养基的原理，如何筛选出耐酸菌？从大豆田土壤取土样，利用缺乏氮源的培养基分离。从富含纤维素的环境中取土样，如树林中多年落叶形成的腐殖土。配制以纤维素为唯一碳源的培养基。可将培养基的pH调至酸性，再接种培养。思考与讨论思考与讨论CO(NH2)2脲酶+CO22NH3+H2O能被植物利用不能被植物利用以尿素为唯一氮源的培养基如何从土壤中分离出分解尿素的细菌？思考与讨论二、微生物的选择培养1．分解尿素的细菌的分离选择培养基配方葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H200.2g琼脂15.0g蒸馏水1000ml碳源——氮源——葡萄糖、尿素尿素

培养基：除含有细菌必需的碳源、水、无机盐外，只含有

一种氮源。尿素二、微生物的选择培养2．稀释涂布平板法分离分解尿素的细菌菌落计数配制土壤溶液系列稀释涂布平板与培养配制土壤溶液10g土样系列稀释6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1021ml1031ml1041ml1051ml1061ml107菌液微量移液器101将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中取0.1mL菌液，滴加到培养基表面将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀涂布平板与培养涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温箱中培养1～2d稀释103倍稀释104倍稀释105倍三、微生物的数量测定1．稀释涂布平板法一个菌落

一个活菌在稀释度足够高时①选30~300个菌落的平板统计。②每个稀释度取3个平板取其平均值。（活菌计数法）

例、某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值是234，那么，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL）（）

A.2.34×108

B.2.34×109C.234

D.23.4B这个数据和真实值完全一样吗？

统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。思考与讨论三、微生物的数量测定1．稀释涂布平板法一个菌落

一个活菌在稀释度足够高时①选30~300个菌落的平板统计。②每个稀释度取3个平板取其平均值。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。（活菌计数法）计算公式：每毫升原液含菌数＝培养基上平均菌落数÷涂布液体积×稀释倍数2．显微镜直接计数法三、微生物的数量测定利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，再计算一定体积样品中微生物的数量。（活菌数和死菌数的总和）

下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中样品稀释示意图。据图分析，下列叙述正确的是(

)A．3号试管的稀释倍数为103倍B．4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰好为5号试管的10倍C．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109个D．该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要多C思考与讨论课堂小结微生物的选择培养与计数选择培养基微生物的选择培养微生物的数量测定稀释涂布平板法显微镜直接计数法从土壤中分离纤维素分解菌拓展应用1．原理红色复合物纤维素刚果红2．方法刚果红染色法纤维素纤维素酶红色复合物消失出现以纤维素分解菌为中心的透明圈分解3．过程土壤取样拓展应用

选择纤维素丰富的环境从土壤中分离纤维素分解菌3．过程配制选择培养基拓展应用

以纤维素为唯一碳源

液体培养基可以获得更多菌体；进行稀释涂布操作更简单。从土壤中分离纤维素分解菌拓展应用3．过程梯度稀释从土壤中分离纤维素分解菌拓展应用3．过程涂布到鉴别培养基上刚果红鉴别培养基的配方纤维素5-10g酵母膏1gKH2PO40.25g琼脂