免疫学相关技术

免疫细胞的检测免疫分子的检测免疫相关基因检测免疫学检测常用标记技术第一页，共27页。

葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法白膜层单核细胞淋巴细胞BT吸附分离免疫细胞的检测免疫细胞的分离与纯化—如PBMC的分离第二页，共27页。方法：E花环分离法、尼龙柱分离法流式细胞术：分离、鉴定细胞磁珠分离法：抗体＋磁珠淘选法：特异性抗体包被培养皿抗原肽-MHC分子四聚体技术：检测特异性TCR淋巴细胞的亚群分离第三页，共27页。流式细胞术flowcytometryassay;flowcytometry;FCM荧光激活细胞分选法fluorescence-activatedcellsorting,FACS一种细胞分选或分析技术。以荧光素标记抗体结合相应细胞，用激光束激发单行流动的细胞，根据细胞所携带荧光(强度或类别)进行分选或分析。第四页，共27页。第五页，共27页。凋亡检测第六页，共27页。磁珠分离法第七页，共27页。T、B细胞检测：通过检测T细胞表面CD分子，以及B细胞膜的SmIg了解外周血T、B细胞数量和亚群的变化。

正常值：CD3+：60～80%；CD4+：55～60%；CD8+：20～0%；CD4/CD8：1.5～2.2/1；

SmIg+细胞：8～12%淋巴细胞及其亚群检测第八页，共27页。smIg荧光染色第九页，共27页。

T细胞功能检测：T细胞增殖试验：淋巴细胞转化试验有形态计数法、MTT法和同位素法三种细胞毒试验：51Cr释放法、凋亡细胞检查法等细胞因子检测：生物活性测定法等

皮肤试验（体内法）：OT试验免疫细胞功能检测第十页，共27页。抗原肽-MHC分子四聚体技术检测特异性TCR抗原特异性T细胞检测链霉亲合素荧光素生物素MHC分子抗原肽结合特异性CTL的TCR第十一页，共27页。原理：Ⅳ型超敏反应OT试验：

细胞免疫功能正常者，阳性

细胞免疫功能低下者，阴性应用：

诊断某些病原微生物感染（结核、麻风）

判断细胞免疫功能

T细胞功能体内检测法－OT试验OT试验第十二页，共27页。

B细胞功能检测：

B细胞增殖试验（同T细胞）抗体形成细胞测定免疫细胞功能检测第十三页，共27页。NK功能检测：形态学、细胞毒、FACS·····吞噬细胞功能检测：趋化功能测定；吞噬功能测定····第十四页，共27页。免疫分子的检测Ig补体及其裂解片段CK膜分子的检测免疫相关基因检测第十五页，共27页。免疫标记技术利用荧光素、酶、放射性同位素等标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。

三大标记技术：免疫荧光法

、酶免疫测定法、放射免疫测定法其次：化学发光免疫分析法、免疫金标记技术Westernblotting、免疫PCR法第十六页，共27页。（1）免疫荧光法

原理：用荧光素标记抗体进行的抗原抗体反应。二抗：抗异种免疫球蛋白抗体，如鼠抗兔第十七页，共27页。第十八页，共27页。应用：敏感性较高，尤其适合检测组织切片、细胞涂片中的抗原成分，测定免疫细胞表面的CD分子。第十九页，共27页。（2）酶免疫测定法

（enzymeimmunoassay，EIA）酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）原理：用酶标记抗体进行抗原抗体反应第二十页，共27页。第二十一页，共27页。双抗体夹心法第二十二页，共27页。应用：测定细菌、病毒、细菌毒素、病人血清中蛋白成分、细胞因子等抗原或抗体。

应用广、方法简便、敏感性高第二十三页，共27页。（3）放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA)原理：用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测的技术常用放射性核素：125I、131I应用：测定血清、尿液等液体中的微量抗原或半抗原物资，如激素、药物等。敏感性很高，应用广泛。第二十四页，共27页。灵敏度达pg/ml水平。常用于微量物质测定，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药物以及IgE等。放射免疫检测法（RIA）竞争法第二十五页，共27页。（4）免疫印迹法－Westernblotting病毒浸于固相载体大小不同的蛋白电