版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领
文档简介
实验三细菌革兰氏染色第1页/共16页目的要求a.掌握细菌涂片标本的制备方法和普通染色的步骤和关键点b.掌握革兰氏染色法的步骤和关键点c.识别细菌的革兰氏染色结果并画图d.学习无菌操作技术
第2页/共16页材料用具显微镜，擦镜纸，纱布革兰氏染液香柏油,自来水,95%酒精;载玻片,插镜纸,接种环,镊子,酒精灯;金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,未知菌12小时的液体培养液大肠杆菌和酵母菌平板第3页/共16页实验步骤1.涂片左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧,冷却后从试管中去菌液一滴,在洁净载玻片上做一涂膜;从固体斜面或平板上取菌时,用无菌接种环取少量菌体,涂抹均匀于玻片上预先滴有的一滴自来水中;第4页/共16页实验步骤2.干燥在空气中自然干燥或在火焰快速通过干燥(与热固定同步进行).
3.热固定用镊子夹住涂片一端,
在火焰上连续通过几次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜.第5页/共16页实验步骤4.染色在固定的标本上加结晶紫染液1-2滴,染色1min,轻轻滴加水洗;吸干,加半滴水,盖上盖玻片,滴上半滴镜油油镜检。
(到此实际上即为细菌普通染色)揭去盖玻片,吸干水,滴加1-2滴革氏碘液媒染1min,轻轻水洗,吸干。第6页/共16页实验步骤滴加95%乙醇溶液(或30%丙酮乙醇脱色),轻轻摇动玻片至液滴无色,不要过分脱色(约30秒),立即轻轻滴加水洗;吸干。滴加蕃红染液复染3min,轻轻滴加水洗;吸干载玻片背面及标本周围水渍,滴上半滴水，盖上盖玻片,油镜镜检;第7页/共16页实验步骤5.镜检
注意标本中细菌的形态,
大小,排列,和颜色.革兰氏阳性菌为紫色;革兰氏阴性菌为红色;第8页/共16页金黄色葡萄球菌(24hrs)染色结果第9页/共16页金黄色葡萄球菌(48hrs)染色结果第10页/共16页金黄色葡萄球菌(72hrs)染色结果第11页/共16页大肠杆菌(24hrs)染色结果第12页/共16页讨论记录并描绘革兰氏染色结果,注意形状,排列和颜色,看看与理论上是否相同;如不同,分析原因;
分析影响革兰氏染色结果的因素;
酵母菌能进行染色吗?结果如何?为什么?第13页/共16页注意事项干净的载玻片,合适取菌量,菌龄,热固定,每一步水洗要彻底而且吸干,和酒精脱色程度是实验成功的关键禁止把染液倒入水池中,回收到废液桶中第14页/共16页实验三结束，准备实验四肉汤蛋白胨培养基的配制（按实验指导61页配方琼脂为2％）。400ml/组置500ml三角烧瓶中用封口膜封好瓶口，用记号笔在瓶上标明培养基名称、组号（如周次－座次，1－3－2）、配制时间，高压灭菌。包平皿10个/包/组、试管4支/包/组、1ml枪头2个/包/组、5ml枪头1个/包/组、涂布器1个/包
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
评论
0/150
提交评论