仪器分析法多图

第八章仪器分析法

第一节概述

利用精密仪器，检测物理性质或物理化学性质进，根据所产生的测试信号定性分析和定量分析。

仪器分析的特点：

1．灵敏度高

2．选择性强

3．价格昂贵，普及困难1当前1页，总共84页。仪器分析法在药典中的使用情况2药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前2页，总共84页。目标：1．掌握紫外可见分光光度法、气相色谱法和高效液相色谱法的原理、方法及在药物含量测定中的应用。2．了解荧光分析法、原子吸收分光光度法在药品含量测定中的应用。3．掌握常用仪器分析法的含量计算。4．熟悉常用仪器的基本结构及使用方法。3药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前3页，总共84页。第二节光谱分析法一、紫外-可见分光光度法基本原理：分子光谱，电子跃迁

λmax

λmin

λsh

①摩尔吸收系数ε②百分吸收系数）

4药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前4页，总共84页。仪器:光源、单色器、吸收池、检测器及测量系统。仪器校正:1.波长准确度校正2．吸光度准确度校正对溶剂的要求:5药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前5页，总共84页。测定方法:（一）对照品比较法分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液应为供试品溶液的100％±10％，溶剂一致，测定吸光度.6药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前6页，总共84页。实例：贝诺酯的含量测定精密称取贝诺酯0.07495g，用无水乙醇定量配成100ml溶液，再定量稀释100倍后，照分光光度法在240nm波长处测定吸光度为0.473。另取经105℃干燥2小时的贝诺酯对照品0.03667g，用无水乙醇定量配成100ml溶液，再定量稀释50倍后，同法测定吸光度为0.462，求贝诺酯的百分含量。7药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前7页，总共84页。8药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前8页，总共84页。（二）吸收系数法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸光度，按吸收系数计算含量。注意仪器的校正和检定。

9药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前9页，总共84页。实例：卡比马唑的含量测定精密称取本品0.05012g，配成500ml溶液，再定量稀释10倍后，照分光光度法在292nm波长处测定吸光度为0.555。按C7H10N2O2S的百分吸收系数为557，求卡比马唑的百分含量。

10药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前10页，总共84页。11药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前11页，总共84页。制剂的含量计算

对照品比较法片剂：注射剂：12药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前12页，总共84页。实例：硫酸阿托品注射液（规格：5mg/1ml）含量测定

精密量取本品0.5ml（约相当于硫酸阿托品2.5mg），置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，另取硫酸阿托品对照品25.47mg，精密称定，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置预先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液2.0ml，振摇提取2分钟后，静置使分层，分取澄清的三氯甲烷液，照紫外-可见分光光度法，在420nm的波长处分别测定吸光度，对照与供试品的吸光度为0.450和0.432，依法计算（分子量694.8）的标示百分含量。

13药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前13页，总共84页。14药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前14页，总共84页。制剂的含量计算

吸收系数法片剂：注射剂：15药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前15页，总共84页。实例：盐酸氯丙嗪片的含量测定

取标示量为25mg的盐酸氯丙嗪片20片，除去糖衣后精密称定，总重量为2.4215g，研细，精密称量片粉0.2290g，置500ml量瓶中，加盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加同一溶剂稀释至刻度，摇匀，在254nm波长处测得吸光度为0.440，按为915计算，求其含量占标示量的百分率？16药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前16页，总共84页。17药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前17页，总共84页。注意事项取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。含量测定至少配制2份，平均值的偏差应在±0.5%以内18药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前18页，总共84页。二、原子吸收分光光度法基本原理

由待测元素灯发出的特征谱线通过供试品蒸气时，被蒸气中待测元素的基态原子所吸收。通过测定辐射光强度减弱的程度可求出供试品中待测元素的含量。

19药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前19页，总共84页。原子吸收分光光度计光源：心阴极灯，锐线光源原子化系统：火焰原子化和无火焰原子化。分光系统：衍射光栅检测系统：检测器、放大器、对数转换器和显示装置20药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前20页，总共84页。测定方法1．标准曲线法21药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前21页，总共84页。2．标准加入法22药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前22页，总共84页。三、荧光分析法基本原理：

某些物质（分子结构常常具有长共轭结构、刚性和共平面性）受紫外光或可见光照射激发后，它会在极短的时间内发射出较照射光波长为长的光，这种光称为荧光。光致发光激发光谱和发射光谱23药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前23页，总共84页。荧光分析仪

1．光源：现在大多数仪器采用高压氙灯

2．单色器：由光栅和狭缝组成。3．样品池：常用石英池，质地应较纯24药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前24页，总共84页。测定方法选定激发光波长和发射光波长，并配制对照品溶液和供试品溶液，测定跑光强度。25药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前25页，总共84页。第三节色谱分析法色谱的种类：按流动相所处的物理状态分类，可以将色谱法分为气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和超临界流体色谱（SFC）。气相色谱又可以分为气-固、气-液色谱，液相色谱可分为液-固和液-液色谱。

气相色谱法是一种很重要的，以气体为流动相，以液体或固体为固定相的色谱方法分离效能、灵敏度、选择性、分析速度26药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前26页，总共84页。当前27页，总共84页。硅胶柱上加上中药提取物当前28页，总共84页。洗脱的效果当前29页，总共84页。色谱法原理：一、吸附混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同。当前30页，总共84页。色谱法原理一、吸附当流动相流过时，各组分以不同的速度随流动相流出色谱柱。当前31页，总共84页。色谱法原理：二、分配混合成分在固定相与流动相之间分配当前32页，总共84页。色谱法原理：三、分子筛因混合物中各种分子体积大小不一样而分离当前33页，总共84页。色谱法分类常用色谱法的种类薄层色谱法常压柱色谱法气相色谱法高效液相色谱法当前34页，总共84页。从粗颗粒到细颗粒色谱所用硅胶颗粒变细之后分离效能大为提高，同时阻力也增大。当前35页，总共84页。各种加压泵为提高分离效果，出现了从中压到高压的各种加压泵当前36页，总共84页。从玻璃柱到不锈钢柱当前37页，总共84页。二、高效液相色谱法highperformanceliquidchromatographHPLC当前38页，总共84页。当前39页，总共84页。HPLC基本组成示意图HPLC主要由色谱柱、加压泵和检测器组成当前40页，总共84页。色谱柱色谱柱是液相分离的核心部件当前41页，总共84页。输液泵输液泵分单元等度泵和多元梯度泵当前42页，总共84页。检测器对没有紫外吸收的物质的检测，以蒸发光散射检测器用得较多检测器种类很多，现在最常用的是紫外检测器当前43页，总共84页。进样器—手动进样器Rheodyne7725i几乎成了所有液相色谱仪的手动进样器当前44页，总共84页。进样器—手动进样器—六通阀当前45页，总共84页。进样器自动进样器可由软件完全控制Waters717Agilent当前46页，总共84页。色谱工作站色谱工作站就是HPLC的软件控制系统外企的在数万元左右，国产的几千元。当前47页，总共84页。色谱工作站工作站的两大功能1.控制仪器2.处理数据当前48页，总共84页。液相色谱仪器常见种类

highperformanceliquidchromatograph当前49页，总共84页。液相色谱仪（2）当前50页，总共84页。液相色谱仪（3）安捷伦Agilent1100当前51页，总共84页。液相色谱仪（4）当前52页，总共84页。液相色谱仪（5）上海伍丰科学仪器有限公司当前53页，总共84页。液相色谱仪（6）戴安公司Ultimate3000当前54页，总共84页。高效液相色谱法在药典中的使用

1985年版1990年版1995年版2000年版2005年版数量8561212791327比例%0.53.25.110.441.3当前55页，总共84页。高效液相图谱各成分依次流出色谱柱，从进样到出峰的时间称为保留时间当前56页，总共84页。三、定性方法定性:确定成分归属，依据与对照品相比较时，相同的保留时间当前57页，总共84页。定量方法外标法内标法当前58页，总共84页。定量方法——外标法当前59页，总共84页。定量方法——内标法对照品供试品内标物当前60页，总共84页。内标法供试液（样品+内标）内标物对照液（对照+内标）是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近能与各组分完全分离与被测组分的量接近当前61页，总共84页。校正因子：当前62页，总共84页。当前63页，总共84页。例内标液

取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液对照液精密称取VitE对照品0.2011g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul注入GC仪，测定，计算供试液精密称取供试品0.1998g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul注入GC仪，测定，计算维生素E含量测定当前64页，总共84页。对照液供试液当前65页，总共84页。HPLC操作注意事项流动相严格过滤（0.45μm微孔滤膜），不要相信任何商家宣传的流动相已过滤的保证。样品严格过滤。流动相需经脱气处理。当前66页，总共84页。基本原理：色谱分离体系包括两个相，其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的气体或液体，称为流动相。当两相作相对运动时，反复多次地利用混合物中所有组分性质的差异使彼此得到分离。两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础。

67药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前67页，总共84页。气相色谱系统：主要由分离系统、检测系统和温度控制系统68药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前68页，总共84页。系统适用性试验69药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前69页，总共84页。1.基线和色谱峰

无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。2.保留值

（1）时间表示的保留值

保留时间（tR）：组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的时间

死时间（tM）：不与固定相作用的气体（如空气）的保留时间。

调整保留时间（tR

＇）：tR＇=tR－tM

70药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前70页，总共84页。用来衡量色谱峰宽度的参数，有三种表示方法：（1）标准偏差()：

即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。（2）半峰宽(Y1/2)：

色谱峰高一半处的宽度Y1/2=2.354（3）峰底宽(Wb)：

Wb=471药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前71页，总共84页。塔板理论-柱分离效能指标色谱柱长：L，虚拟的塔板间距离：H，色谱柱的理论塔板数：n，则三者的关系为：

n=L/H理论塔板数与色谱参数之间的关系为：72药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前72页，总共84页。分离度的表达式：R=0.8：两峰的分离程度可达89%；R=1.0：分离程度98%；R=1.5：达99.7%（相邻两峰完全分离的标准）。73药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前73页，总共84页。测定方法内标法加校正因子法（R：对照品S：内标X：待测样品）

校正因子：含量计算：

74药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前74页，总共84页。

按《中国药典》2010版（二部）的规定测定维生素E，做系统适用性实验时的数据如上表。取维生素E对照品20.80mg(98.0%)，精密加入浓度为1.044mg/ml的内标物（正三十二烷）溶液10.00ml溶解，取1μl注入气相色谱仪，对照品峰面积为481736，内标物峰面积为238787，求维生素E的理论塔板数、维生素E与内标物的分离度和校正因子各为多少？再精密称取维生素E供试品22.68mg，内标物28.00mg，用气相色谱法测得供试品峰面积为529887，内标物峰面积为644911，计算供试品中维生素E的含量。物质Rt/minW(1/2h)/minW/min对照品8.880.250.6内标物5.740.61.2实例75药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前75页，总共84页。76药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前76页，总共84页。77药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前77页，总共84页。高效液相色谱法液相：固定相为液相高效、高压、高速高柱效、高选择性、分析速度快、灵敏度高、重复性好、应用范围广78药物分析教研室YAOWUJIANYANJISH前78页，总共84页。高效液相色谱仪：79药物分析教研室YAOWUJIANY