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文档简介

试验三双向琼脂糖扩散试验拓展免疫扩散试验是指可溶性抗原、抗体在含有电解质的凝胶内自由扩散，两者相遇而发生特异性结合，在比例适当处出现可见的沉淀。常用的凝胶有琼脂糖和琼脂适宜浓度的凝胶呈网络状结构，抗原和抗体在凝胶中扩散，由于凝胶网孔的大小有一定的限度，抗原抗体结合后形成的复合物在凝胶中不能运动，而形成肉眼可见的沉淀。拓展免疫扩散试验临床意义：根据有否出现沉淀线，可用已知的抗体鉴定未知的抗原，或用已知的抗原鉴定未知的抗体。检查原发性肝癌患者血清中的甲胎蛋白，作为原发性肝癌的早期辅助诊断。抗体效价滴定用梅花型孔，中间放抗原，周围孔放下不同稀释度的相应抗体，以出现沉淀线的最高稀释倍数为该抗体的效价。拓展试验目的掌握双向琼脂扩散试验的原理、操作方法及结果判定方法。观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线。试验原理

可溶性抗原与相应抗体在含有电解质的半固体琼脂凝胶中，由不同孔内各自向四周扩散，彼此在相遇处特异性结合，形成白色沉淀线。试验中，若抗原与抗体只含有对应的单特异性成分，只能形成一条沉淀线；若抗原与抗体具有多种特异性成分，可因它们的相对分子质量、浓度、比列、扩散速度等因素的不同而出现多条沉淀线。

根据沉淀线融合情况，还可鉴定两种抗原是完全相同还是部分相同。所以，可用此法来分析和鉴定标本中多种抗原或抗体成份，并用以测定抗原或抗体的效价。试验材料1.抗原：待检血清（牛血清白蛋白BSA）2.抗体：兔IgG诊断血清。3.10g/L盐水琼脂、生理盐水或其他缓冲液4.载玻片、打孔器、微量加样器、湿盒等。方法与步骤程序：

制备琼脂凝胶板→打孔→加样→扩散1.制备琼脂凝胶板：取加热融化的10-15g/L盐水琼脂4-4.5mL,浇注于普通清洁载玻片上，使其自然流成水平面，要求浇板时要均匀、平整、无气泡、布满整张载玻片。方法与步骤2.打孔：待琼脂凝固后（室温2-3min），用直径3mm的打孔器打孔，孔间距15mm。挑出孔内琼脂，注意不要挑破孔缘3.加样：用微量移液器向中央孔加入抗体。向周围1-5孔分别加入各待测抗原，6孔加入生理盐水作对照。4.扩散：加样完毕后，将琼脂板放入湿盒中，置于37℃温箱中自由扩散24h后观察结果。方法与步骤结果分析与讨论有沉淀线，描述沉淀线，说明了什么？无沉淀线，分析可能原因？结论是一段文字注意事项打孔时不要将琼脂划破，注意避免产生裂缝或将琼脂与玻片脱离，以免影响沉淀线的形成。2.加样时每个孔的加样量应保持一致，不同浓度抗体和抗原不要混淆。3.应选择在24h内观察结果，放置过久可使沉淀线消失。

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