免疫组化技术简介及相关临床应用

免疫组化技术简介及相关临床应用第1页/共33页背景知识简介免疫组化技术是20世纪70年代初SterbBerger在酶标法的基础上,以免疫学的抗原抗体反应为理论基础发展起来的一门方法学。20世纪80年代该项技术在国外开始应用于诊断疾病，国内比国外约晚10年，即90年代开始运用于疾病的病理诊断。第2页/共33页最近20多年来，该项技术得到飞速发展，特别是绝大多数抗体能够应用在福尔马林固定的石蜡切片上，因而大大促进了它在临床病理学上的应用。从开始发展至今，该项技术一直在基础医学和临床研究中发挥重要作用,为疾病尤其是肿瘤性疾病的诊断、鉴别诊断及发病机制的研究提供了强有力的手段。目前绝大多数大中型医院都开展了该项技术检查，我院有待开展此项技术。第3页/共33页定义及基本原理

定义：免疫组化，也称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术，是应用免疫学基本原理—抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。第4页/共33页

基本原理：抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。然后再通过化学显色方法将抗原抗体结合所在的部位显示出第5页/共33页来，从而达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。有如下基本特点：1、特异性强2、敏感性高3、定位准确4、形态与功能相结合第6页/共33页所用抗体及标本类型所用抗体类型常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。第7页/共33页所用标本类型：主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾第8页/共33页性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。第9页/共33页常用染色方法免疫组织化学技术按照标记物的种类不同可分为：1，免疫荧光法，标记物为荧光素，通过荧光显微镜观察；2，免疫酶法，以酶标记抗体，抗原抗体反应后显色，通过光镜或电镜观察，目前最常用；3，其它如亲和组织化学法、免疫铁蛋白法、免疫胶体金法及放射免疫自显影法等。第10页/共33页操作步骤流程简介如下：常规石蜡切片→脱蜡→抗原修复（根据需要）→缓冲液冲洗（3min/2次）→室温下孵育5min→缓冲液冲洗（5min/2次）→室温下孵育5min→缓冲液冲洗（5min/2次）→滴加一抗37℃孵育1-2小时→缓冲液冲洗（5min/2次）→室温下孵育30分钟→滴加二抗室温下孵育1小时→缓冲液冲洗（5min/2次）→滴加DAB液→孵育3-5分钟→自来水充分冲洗→复染→脱水→透明→封片→出诊断。第11页/共33页结果判断

（表达部位、检测物质及常用标记物）表达部位：细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核、细胞多部位及组织等；检测物质：组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。第12页/共33页常用于肿瘤病理鉴别诊断的免疫标记物

（举例）上皮组织：CK、EMA；特异性上皮标记：如TG、PSA，TTF－1等；间叶组织：vinmentin；肌组织：desmin、SMA、MSA、myosin、myogenin、myoD1；血管内皮细胞：CD31、CD34、FVIIIRAg或FVIII；第13页/共33页组织细胞：CD68、Mac387、溶菌酶等；神经内分泌：1、激素标记物：儿茶酚胺、5－HT、多肽和肽释放因子等；2、非激素标记物：NSE、CGA、Syn等；神经组织：S－100、MBP、Leu7、NSE、GFAP、NFP等；淋巴造血组织：CD45（LCA）、CD20（L26）、CD79a、CD3、CD45RO、第14页/共33页CD15、CD30、Bcl—2、Sig(IgM和IgD)等；胚胎性抗原：CEA、AFP等；细胞增殖抗原：PCNA、Ki-67等；激素：ER、PR、AR等；病毒：HBV、EBV、HPV等；癌基因和抑癌基因：c-erBb-2、nm23、P53、P16和Bcl-2等第15页/共33页临床应用免疫组化的临床应用主要包括以下几方面：⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位；⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型；⑷软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，第16页/共33页有时难以区分其组织来源，应用多种标志物进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；⑸发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。⑹为临床提供治疗方案的选择。第17页/共33页小圆细胞肿瘤的免疫组化鉴别诊断ＣＫVimＥＭＡLCANSEDes

S-100CgA小细胞未分化癌＋－＋－－－－－神经内分泌癌＋－＋－＋－－＋神经母细胞瘤－＋－－＋－－

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＋＋EWS/PNET－＋－－＋－－

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＋＋胚胎性横纹肌肉瘤－＋－－－＋－－恶性黑色素瘤－＋－－－

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＋－＋－恶性淋巴瘤－－－＋－－－－第18页/共33页梭形细胞肿瘤的免疫组化鉴别诊断VimＣＫＥＭＡDesactinS-100FVIIIRAgCD34al-ACT平滑肌肉瘤＋－－＋＋－－－－MPNST＋－－/＋－－＋－－－单相性滑膜肉瘤＋＋＋－－－/＋－－－纤维肉瘤＋－－－－－－－－恶性纤维组织细胞瘤＋－－－/＋－/＋－－－＋梭形细胞血管肉瘤＋－－－－－＋－－胃肠道间质瘤＋－－－－/＋－/＋－＋－梭形细胞恶性黑色素瘤＋－－－－＋－－－梭形细胞癌－＋－－－－－－－第19页/共33页生殖细胞肿瘤免疫组化特点KeratinVimCEAAFPHCGPLAP精原细胞瘤－＋－－－＋精母细胞性精原细胞瘤－＋－－－－胚胎癌＋－±±－＋卵黄囊瘤＋＋＋＋－＋绒毛膜上皮癌＋－－－＋±畸胎瘤＋＋＋－－±第20页/共33页淋巴造血组织肿瘤免疫组化鉴别诊断LCACD20CD45ROCD56MPOVsc387CD15CD30KP-1lysoB细胞性淋巴瘤++－－－－－－－－T细胞性淋巴瘤+－+－－－－－－－NK细胞淋巴瘤－－－－－－－+－－间变性大细胞性淋巴瘤+－+－－－－+－－浆细胞性恶性淋巴瘤-/+－－－－+－－－－粒细胞肉瘤－－－－+－+－－－真性组织细胞性淋巴瘤－－－－－－－_++霍奇金淋巴瘤－－-/+－－－++－－第21页/共33页小B细胞淋巴瘤免疫组化特点CD5CD10CD23cyclinD1B－CLL／SLL＋－＋－淋巴浆细胞性淋巴瘤－－－－滤泡性淋巴瘤－＋－－套细胞性淋巴瘤＋－－＋淋巴结边缘区Ｂ细胞淋巴瘤－－－－结外边缘区Ｂ细胞淋巴瘤（黏膜相关淋巴组织淋巴瘤）－－－－第22页/共33页垂体腺瘤的免疫组化鉴别诊断LTHGHACTHPSH/LHFSHCgA

NSEKER泌乳素细胞腺瘤＋－－－－－＋＋生长激素细胞腺瘤－＋－－－－－＋促皮质激素细胞腺瘤－－

＋－－－＋＋促性腺激素细胞腺瘤－－－

＋－＋＋＋/－促甲状腺素细胞腺瘤－－－－＋＋＋＋/－第23页/共33页乳腺浸润性导管癌免疫组化分子分型

与治疗预后关系ERPRHER-2预后治疗有效药物LuminalA＋＋－最好他莫昔芬LuminalB＋＋＋较好他莫昔芬+阿那曲唑TripleNegative－－－一般含铂药物+EGFR抑制剂HER-2+－－＋最差曲妥珠单抗第24页/共33页部分相关相关图片第25页/共33页第26页/共33页免疫组化检测P53在结直肠癌组织中的表达SP×400

P53在结直肠癌组织中肿瘤细胞胞核表达第27页/共33页

CEA

COX2

Ki-67

Bcl-2第28页/共33页cerBb-2CD20ERCK第29页/共33页开展该项目注