抗生素类药物的分析

关于抗生素类药物的分析第一页，共一百页，编辑于2023年，星期一第一节概述抗生素的定义

在低微浓度下即可对某些生物（病原微生物）的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。第二页，共一百页，编辑于2023年，星期一一、抗生素类药物的特点1.化学纯度低同系物多、异构体多、降解物多2.活性组分易发生变异微生物菌株的变化、发酵条件改变3.稳定性差分子结构大多不稳定，降解后疗效下降、失效或增加毒副作用第三页，共一百页，编辑于2023年，星期一二、抗生素类药物的质量分析（一）鉴别试验1.化学方法利用某些官能团的特性，利用适当的试液与其反应显色2.物理化学方法紫外分光光度法、红外分光光度法3.生物学方法特异的酶反应第四页，共一百页，编辑于2023年，星期一二、抗生素类药物的质量分析（二）杂质检查1.影响产品稳定性的指标水分、酸碱度、干燥失重2.控制有机、无机杂质的指标溶液的澄清度与颜色、重金属、残留溶剂、炽灼残渣3.与临床安全性密切相关的指标热源、细菌内毒素、无菌、降压物质4.其他指标β-内酰胺类抗生素：聚合物第五页，共一百页，编辑于2023年，星期一（三）含量测定或效价测定1.微生物检定法以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标来衡量抗生素效价的一种方法。第六页，共一百页，编辑于2023年，星期一（三）含量测定或效价测定1.微生物检定法优点1、灵敏度高、需用量小、测定结果直观2、测定原理与临床一致，适用范围广3、同一类型的抗生素无需分离，一次测定总效价缺点1、操作繁琐2、培养时间长3、测定误差大第七页，共一百页，编辑于2023年，星期一2.理化方法适用于提纯的以及化学结构已确定的抗生素优点1.操作简单、省时、方法准确2.专属性1.不一定代表生物效价缺点2.易受杂质干扰第八页，共一百页，编辑于2023年，星期一3.抗生素活性表示方法效价：每ml或每mg中含有某种抗生素的有效成分的多少第九页，共一百页，编辑于2023年，星期一三、抗生素的分类（按结构与性质）：

β–内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、氯霉素类、其他抗生素类第十页，共一百页，编辑于2023年，星期一第二节β–内酰胺类抗生素

青霉素类第十一页，共一百页，编辑于2023年，星期一头孢菌素类第十二页，共一百页，编辑于2023年，星期一青霉素（青霉素G、苄青霉素）第十三页，共一百页，编辑于2023年，星期一氨苄西林

（氨苄青霉素）第十四页，共一百页，编辑于2023年，星期一阿莫西林

（羟氨苄青霉素）第十五页，共一百页，编辑于2023年，星期一普鲁卡因青霉素第十六页，共一百页，编辑于2023年，星期一头孢氨苄第十七页，共一百页，编辑于2023年，星期一头孢拉定第十八页，共一百页，编辑于2023年，星期一头孢羟氨苄第十九页，共一百页，编辑于2023年，星期一头孢噻吩钠第二十页，共一百页，编辑于2023年，星期一一、结构与性质Na与碱金属(Na+、K+)成盐1.酸性和溶解度易溶于水第二十一页，共一百页，编辑于2023年，星期一与有机碱(普鲁卡因)成盐

难溶于水，易溶于甲醇普鲁卡因青霉素第二十二页，共一百页，编辑于2023年，星期一2.旋光性

头孢菌素类C6C7青霉素类C3C5C6

﹡﹡﹡﹡﹡第二十三页，共一百页，编辑于2023年，星期一

3.紫外吸收特征头孢菌素类母核有共轭体系青霉素类母核无明显UV

多数有苯环取代基第二十四页，共一百页，编辑于2023年，星期一4.β-内酰胺环的不稳定性水溶液不稳定干燥纯净稳定不稳定性因素四元环张力大酰胺键易水解第二十五页，共一百页，编辑于2023年，星期一例青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2第二十六页，共一百页，编辑于2023年，星期一（一）呈色反应1.羟肟酸铁反应β-内酰胺类NaOH呈色硫酸铁铵试液H+二、鉴别第二十七页，共一百页，编辑于2023年，星期一2.茚三酮反应△α-氨基第二十八页，共一百页，编辑于2023年，星期一2.双缩脲反应β-内酰胺类（开环分解）似肽键第二十九页，共一百页，编辑于2023年，星期一3.与重氮苯磺酸反应（偶合）酚羟基头孢哌酮第三十页，共一百页，编辑于2023年，星期一（二）沉淀反应1.遇酸→↓在过量HCl或有机溶剂（乙醇、三氯甲烷、乙醚）中溶解第三十一页，共一百页，编辑于2023年，星期一2.重氮化-偶合反应重氮化-偶合反应芳伯氨基第三十二页，共一百页，编辑于2023年，星期一K+、Na+反应（三）

焰色→鲜黄色

+醋酸氧铀锌→↓黄

Na+

焰色→紫色

+0.1%四苯硼钠+Ac→↓白

K+第三十三页，共一百页，编辑于2023年，星期一光谱法（四）1、UV法样品、分解产物第三十四页，共一百页，编辑于2023年，星期一（五）IR法第三十五页，共一百页，编辑于2023年，星期一色谱法（五）1、TLC法对照品对照法2、HPLC法第三十六页，共一百页，编辑于2023年，星期一三、特殊杂质的检查高分子杂质检查头孢他啶、头孢曲松钠、头孢哌酮钠分子排阻色潽法、离子交换色谱法、反相色谱法吸光度检查青霉素钠吸光度：0.80-0.8第三十七页，共一百页，编辑于2023年，星期一四、含量测定微生物检定法汞量法HPLC第三十八页，共一百页，编辑于2023年，星期一汞量法（一）1.原理（水解）青霉素族ChP青霉素与汞盐不反应降解产物与汞盐反应巯基化合物与汞定量反应，可测得总青霉素含量第三十九页，共一百页，编辑于2023年，星期一2.方法青霉素钠含量测定

取本品约50mg，精密称定，加水5ml溶解后，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置15分钟，加1mol/L硝酸溶液5ml，醋酸盐缓冲(pH4.6)20ml及水20ml，摇匀，照电位滴定法，在35～40℃，用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)缓慢滴定（控制滴定过程约为15分钟）。每1ml硝酸汞滴定(0.02mol/L)相当于7.128mg的总青霉素

第四十页，共一百页，编辑于2023年，星期一另取本品约0.5g，精密称定，加水与上述醋酸盐缓冲液各25ml，振摇使完全溶解，在室温下，立即用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)滴定，终点判断方法同上。每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当于7.128mg的降解物。总青霉素的百分含量与降解物的百分含量之差值即为青霉素的含量。第四十一页，共一百页，编辑于2023年，星期一4、计算第四十二页，共一百页，编辑于2023年，星期一

精密称取含水量为0.5%的青霉素钠0.0502g，按药典方法测定总青霉素含量时，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)6.97ml。另精密称取上述样品0.5013g，按药典方法测定降解物含量时，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)1.33ml。以干燥品计算，求样品中青霉素的含量。例青霉素钠含量测定第四十三页，共一百页，编辑于2023年，星期一HPLC法（二）ChP头孢菌素类内标法＋校正因子外标法特点快速、高效、灵敏专属性强、重现性好一法多用（鉴别、检查、含测）第四十四页，共一百页，编辑于2023年，星期一第三节氨基糖苷类抗生素常见药物：硫酸链霉素硫酸阿米卡星新霉素卡那霉素硫酸庆大霉素妥布霉素氨基环醇与氨基糖缩合形成含有多羟基，又称为多羟基抗生素第四十五页，共一百页，编辑于2023年，星期一链霉素链霉胍+链霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺苷元糖链霉双糖胺第四十六页，共一百页，编辑于2023年，星期一链霉胍链霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺第四十七页，共一百页，编辑于2023年，星期一链霉胍链霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺第四十八页，共一百页，编辑于2023年，星期一庆大霉素

糖苷元绛红糖胺+脱氧链霉胺+加洛糖胺

糖第四十九页，共一百页，编辑于2023年，星期一绛红糖胺紫素胺2-脱氧链霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺第五十页，共一百页，编辑于2023年，星期一绛红糖胺紫素胺2-脱氧链霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺第五十一页，共一百页，编辑于2023年，星期一庆大霉素C复合物庆大霉素C1R=HR1、R2=CH3

庆大霉素C2R=R2=H

R1=CH3

庆大霉素C1aR、R1、R2=H

庆大霉素C2aR=CH3R1=R2=H庆大霉素C2bR=R1=HR2=CH3第五十二页，共一百页，编辑于2023年，星期一二、性质多与硫酸成盐链霉素3个庆大霉素5个碱性中心碱性1水溶性溶解性2.旋光性第五十三页，共一百页，编辑于2023年，星期一链霉素pH4～7庆大霉素pH2～12稳定UV4.稳定性3.链霉素在230nm处有紫外吸收第五十四页，共一百页，编辑于2023年，星期一坂口反应N-甲基葡萄糖胺反应麦芽酚反应水解产物第五十五页，共一百页，编辑于2023年，星期一二、鉴别试验

茚三酮反应（一）△羟基胺结构第五十六页，共一百页，编辑于2023年，星期一链霉胍特有反应（或α-萘酚）坂口反应（二）方法：取本品0.5mg，加水4ml溶解，加氢氧化钠试液2.5ml与0.1%8-羟基喹啉的乙醇溶液1ml，放冷至15℃，加次溴酸钠试液3滴，即显橙红色第五十七页，共一百页，编辑于2023年，星期一

麦芽酚反应（三）

链霉糖特有反应H+分子重排硫酸链霉素的反应：取本品约20mg，加水5ml溶解后，加氢氧化钠溶液0.3ml，置水浴上加热5分钟，加硫酸铁铵溶液0.5ml，即显紫红色第五十八页，共一百页，编辑于2023年，星期一N-甲基葡萄糖胺反应（四）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛H+红色（Elson-Morgan反应）第五十九页，共一百页，编辑于2023年，星期一（五）硫酸盐的鉴别反应H+TLC法（六）第六十页，共一百页，编辑于2023年，星期一三、特殊杂质检查及组分分析链霉素杂质链霉素B（水解后为甘露糖、链霉素）

方法TLC中的对照品法1.来源反应中间体第六十一页，共一百页，编辑于2023年，星期一薄层色谱法检查链霉素B取本品0.25g，精密称定，置回流瓶中，加5ml新鲜配制的硫酸-甲醇溶液溶解，加热回流1小时，冷却，用甲醇冲洗冷凝管，合并冲洗液，并用甲醇定量稀释成每1ml中含10mg的溶液，作为供试品溶液。第六十二页，共一百页，编辑于2023年，星期一薄层色谱法检查链霉素B精密称取甘露糖对照品36mg，置回流瓶中，同法处理后定量制成每1ml中含72ug的溶液，作为对照溶液取上述溶液，点于同一薄层板上，展开，晾干，显色供试品溶液所显链霉素B斑点的颜色与对照溶液主斑点比较，不得更深第六十三页，共一百页，编辑于2023年，星期一四、含量测定链霉素、庆大霉素微生物检定法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。第六十四页，共一百页，编辑于2023年，星期一第四节四环素类抗生素ABCD第六十五页，共一百页，编辑于2023年，星期一123456789101112第六十六页，共一百页，编辑于2023年，星期一四环素（TC）tetracycline第六十七页，共一百页，编辑于2023年，星期一金霉素(CTC)chlortetracycline氯四环素第六十八页，共一百页，编辑于2023年，星期一土霉素(OTC)oxytetracycline氧四环素第六十九页，共一百页，编辑于2023年，星期一多西环素(DOTC)doxycycline脱氧土霉素第七十页，共一百页，编辑于2023年，星期一美他环素（METC）metacycline第七十一页，共一百页，编辑于2023年，星期一第七十二页，共一百页，编辑于2023年，星期一（二）性质酸碱性1.与酸、碱均能成盐强酸或强碱中溶解度↑

酚羟基、烯醇型羟基弱酸性二甲胺基弱碱性第七十三页，共一百页，编辑于2023年，星期一2.溶解性和吸湿性pH4.5-7.2，难溶于水pH低于4或高于8，溶解度增大具引湿性，含有结晶水第七十四页，共一百页，编辑于2023年，星期一3.旋光性用于定性或定量4.紫外吸收和荧光性质第七十五页，共一百页，编辑于2023年，星期一5.不稳定性（1）差向异构化淡黄→黑蓝色荧光第七十六页，共一百页，编辑于2023年，星期一差向四环素第七十七页，共一百页，编辑于2023年，星期一（土霉素、多西环素不易差向异构化）第七十八页，共一百页，编辑于2023年，星期一（2）酸性条件下的降解λmax=445nmλmax=435nm橙黄色第七十九页，共一百页，编辑于2023年，星期一脱水四环素第八十页，共一百页，编辑于2023年，星期一（3）碱性条件下的降解（荧光）第八十一页，共一百页，编辑于2023年，星期一与金属离子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+Fe3+Al3+与金属离子络合6.第八十二页，共一百页，编辑于2023年，星期一二、鉴别试验H2SO4反应（一）第八十三页，共一百页，编辑于2023年，星期一FeCl3反应（二）第八十四页，共一百页，编辑于2023年，星期一荧光法（三）UV绿色荧光H+UV第八十五页，共一百页，编辑于2023年，星期一TLC法（四）正相分配薄层色谱HPLC法（五）EDTA克服痕量金属造成的拖尾现象第八十六页，共一百页，编辑于2023年，星期一三、检查有关物质（一）HPLC法（2010版）第八十七页，共一百页，编辑于2023年，星期一吸收度（二）第八十八页，共一百页，编辑于2023年，星期一四、含量测定ChP、USPHPLC法（外标法）系统适用性试验1.防护柱2.预试溶液

4-差向脱水四环素四环素3.RSD≤2.0%第八十九页，共一百页，编辑于2023年，星期一1．下列哪个药物会发生羟肟酸铁反应

A.青霉素

B.庆大霉素

C.红霉素

D.链霉素

E.维生素C第九十页，共一百页，编辑于2023年，星期一2．中国药典(2010年版)测定头孢菌素类药物的含量时，多数采用的方法是

A.微生物法

B.碘量法

C.汞量法

D.正相高效液相色谱法

E.反相高效液相色谱法第九十一页，共一百页，编辑于2023年，星期一3．属于-内酰胺类的抗生素药物有

A.青霉素

B.红霉素

C.头孢菌素

D.庆大霉素

E.四环素第九十二页，共一百页，编辑于2023年，星期一4．能和茚三酮发生呈色反应的物质有

A．链霉素

B．庆大霉素

C．土霉素

D．氨基酸

E．苯巴比妥第九十三页，共一百页，编辑于2023年，星期一5.青霉素类药物可用下面哪些方法测定

A.三氯化铁比色法

B.汞量法

C.碘量法

D.硫醇汞盐法