二氢吡啶钙拮抗剂作用机制

二氢吡啶类钙拮抗剂的分析药学院药物分析教研室【大纲要求】1、掌握二氢吡啶类钙拮抗剂类代表药物的体内过程2、熟悉二氢吡啶类钙拮抗剂类代表药物的体内分析方法硝苯地平尼群地平尼莫地平氨氯地平主要代表性药物主要的理化性质较强的紫外吸收特性，没有荧光特性一般显中性，含有N原子的显弱碱性不稳定性，见光易分解光学特性体内过程口腹易吸收、半衰期短、达峰时间较快血浆蛋白结合率高一般经肝脏代谢，代谢产物一般没有活性含量分析方法同位素标记法荧光分析法气相色谱法液相色谱法色谱和质谱联用法

样品的制备：往往采用简单的液液萃取法进行，萃取溶剂多为苯、乙酸乙酯和氯仿等，取萃取后的有机层，挥干用流动相溶解后直接进样分析。荧光测定法硝苯地平＋三氯化钛＋邻苯二甲醛＝荧光物质用乙酸乙酯进行液液萃取（pH=7)，测定硝苯地平用氯仿进行液液萃取（pH=2)，测定硝苯地平的代谢产物气相色谱分析色谱柱：填充柱或毛细管柱OV-1OV-17柱温：225℃～270℃检测器：电子捕获检测器ECD人血浆中尼群地平的GC法测定色谱条件：DB-1毛细管柱（25m×0.328mm,I.D.,0.5μm)载气：高纯氮气检测器:ECD进样温度：260℃检测温度：300℃升温方式：程序升温255℃（6.2min)－270℃（5min）分流进样：40：14℃/min

样品的前处理：取内标，加血样，混合后加入1mol/mL的NaOH0.5ml，混合，加入乙醚-环己烷（1：1），窝旋，离心，取有机相用氮气流吹干，残渣用甲醇溶解后进样分析。人血浆中尼莫地平的毛细管气相色谱ECD检测及药代动力学

样品制备：加入1μg/ml的尼群地平，再加入1mol/lNaOH0.5ml，混匀后，用乙酸乙酯－正己烷（1：1）萃取，4000rpm离心，取有机相吹干后用甲醇溶解后进样分析。色谱条件：OV-101毛细管柱（25m×0.2mm,I.D.,0.5μm)载气：高纯氮气检测器:ECD进样温度：260℃气化室温度：270℃检测温度：300℃升温方式：恒温洗脱分流进样：33：12.025.0100.0回收率日间日内82.3％88.4％89.28.5％7.0％1.1％8.8％7.5％2.9％高效液相色谱法一般进行的是反相液相色谱法一般使用紫外检测器或电化学检测器一般多选用含有缓冲液的甲醇或乙腈为流动相可选用同类药物或安定类药物为内标RP-HPLC法测定血浆中的硝苯地平

样品制备取待测血浆600μl，置于10ml具塞离心管中，加地西泮内标物溶液（300ng/ml）200ul,氨水120μl,涡旋振荡1min,再加入提取溶剂[无水乙醚－正己烷（3：1）]4ml，涡旋振荡20min，离心（3000r/min）10min，置-20ºC的冰箱中冷冻2h，上层有机相转移至另一离心管中，于50ºC水浴中用氮气吹干，残渣加50％乙腈200μl,涡旋混合、离心（1500r/min）10min，取15μl进样（低浓度则进样30μl）。色谱条件色谱柱为LunaC18(250*4.6mm,5um)；保护柱为AlltechC18(30*2mm,40um)。流动相为乙腈－水－二乙胺－磷酸（51：49：0.12：0.10，V/V），流速1.2ml/min。柱温45ºC。紫外监测器，波长238nm，进样量15～30μl。RP-HPLC法测定尼群地平样品制备避光操作。取体液1μl或组织匀浆4ml，置15ml具塞离心管中，精密加入地尔硫卓内标物溶液（1g/L甲醇）10.2ml，加50mmol/L磷酸盐缓冲溶液（pH9.8）1ml,摇匀，加环己烷－异丙醇（96.5：3.5，V/V）5ml提取，离心（4000r/min）15min,取有机相于水浴中用氮气吹干，残渣溶于100μl流动相，吸取10μl进样分析。色谱条件色谱柱为YWGC18(150*4.6mm,5μm)。流动相为甲醇：50mmol/L磷酸盐缓冲溶液70：30，V/V），磷酸调pH至6.8；流速1.0ml/min。柱温：室温。紫外监测器，波长236nm；进样量10μl。

HPLC电化学检测法测定血浆或血清中尼卡地平及其代谢产物

样品制备取待测血浆样品200μl，加入pH1.0的Tris缓冲液和内标物布替林，用甲基叔丁基醚提取，离心后分离有机相，取100μl进样。色谱条件色谱柱为S5SCX硅胶柱（125x5.0mm，5μm）。流动相：甲醇，含20mmol/L高氯酸铵。流速：2.0ml/min。检测：电化学检测器，玻碳电极为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，工作电位+1.1V。液相色谱－质谱－质谱联用法测定人血浆中的氨氯地平

样品制备在暗室中取血浆1.0ml置10ml具塞试管中，依次加入流动相100μl,内标物溶液（4¹－羟基普罗帕酮溶液80ng/ml，用流动相溶解）100μl，1mol/LnaOH溶液100ul,涡旋30s。加乙醚－二氯甲烷（2：1）3ml提取，往复振荡10min，离心5min，分取有机相于40ºC空气流中吹干。残留物加100μl流动相溶解，取20μl进样。色谱条件色谱柱：ZorbaxXDBC8柱（150mm*4.6mmID,5μm）。流动相：乙腈－水－甲酸（75：35：1），流速：0.4ml/min。柱温为20ºC。质谱条件离子源为ESI源，源电压4.5kV；加热毛细管温度150ºC；鞘气为氨气，流速621kPa；辅助气（N2）流速23au;碰撞气（Ar）压力1.9Pa。碰撞诱导解离（CID）电压20V(氨氯地平)和40V(内标物)；正离子方式检测；扫描方式为选择反应监测（SRM），用于定量分析的二级碎片离子分别为m/z238(氨氯地平)和m/z11