2020年人教版高中生物选修1专题2微生物培养和应用知识点总结

课题1微生物的实验室培养一、培养基1．培基的类型及其应用：标准物理性质

培养基类型固体培养基半固体培养基液体培养基合成培养基

配制特点加入凝固剂较多加入凝固剂较少不加入凝固剂由已知成分配制而成，培养基成分明确

主要应用菌种分离鉴计菌种保存工业生产，连续培养菌种分类、鉴定化学组成琼脂是从红藻中提取的_多_________在配制培养基中用作为____凝剂_______。培养基的化学成分一般含_水_______________无盐______________、____________碳源_____、________源________四类营养成分。培养基成分还需满足微生物生长__pH_________、_殊营养物质_______、气______等要求。牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供____源、氮源、维生素_____________________________等养物质。培养乳酸杆菌时需要添加__维生_________，培养霉菌时需要将培养基pH调节为_酸__________________，养细菌时需要将pH调节为__中或微碱性____________________。6、培养基的配制原则：①制量。②

目的营养

要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。③pH

要适宜：细菌培养基pH呈

中性或微碱性

性，霉菌培养基呈酸性。二、无菌技术1．获得纯净培养物的关键是防外来杂菌的入侵。2、无技术包括：（1）对实验操作空间、操作者衣着和手进行

清洁和消毒；将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；为避免周围微生物污染实验操应在精灯火焰附__________________进行；避免已灭菌处理的材料用具_周围物品_____相触。3、比较消毒和灭菌（填表）比较项

理化因素的作用强度

消灭微生物的数量芽和孢子否被消灭消毒灭菌

较温和强烈

部分微生物所有微生物

一般不能能无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的__有效避免操作者自身被微生物感染和污染环_消毒方法：日常生活经常用到的___煮沸________消毒法；对一些不耐高温的液体，则使____氏______消毒法；温度70-75煮30分钟

时间，或者80°煮C15分对接种室种箱或超净工作台首先喷洒___炭酸或煤酚________等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线照射30分__________进行物理消毒。实验操作者的双手使__酒精_进消毒；饮水水源用___氯气_______进消毒。6、灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口使_灼烧________菌法；玻璃器皿、金属用具等使用培养基、无菌水等使用灭菌锅_________。

干热高压蒸汽

灭菌法。灭菌法，所用器械是_高蒸（4）表面灭菌和空气灭菌等使_紫外_________灭法。7、对接种环灭菌时要用酒精灯充分燃________培养皿的部位。

层火焰灼烧可能伸入试管或利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤是避免响热空气流通物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是____让锅内温度迅速升_________________；后关闭排气阀继续加热，气压升至________100k___Pa，温度__121_°C________，并维持__15-30分钟_________；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降___________

时打开锅盖，其目的是防止____容内的液体会冲出容器，造成污_。________________三、大肠杆菌的纯化培养1、包括：制培养基阶段2．制备牛肉膏蛋白胨固体培养步骤：2.1计算：

和纯大肠杆菌

两个根据配方比例，计算100mL培基各成分用量。2.2称：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，的是潮。

防止吸2

溶化：①加水加热溶化牛膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入琼脂；整个过程不断用玻棒搅，目的是防琼脂糊底而使烧杯破裂④蒸馏水定容到100mL。2

调pH：用1mol/LNaOH溶调节pH至中或微碱性。2

灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用

高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干灭菌箱

灭菌。2倒平板：待培养基冷却至50°C其过程是：

左右时在酒精灯火附近

操作进行。②

在

酒精灯火焰旁

右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；左手将培养皿打开一条稍于口的缝隙，手将培养基倒入培养皿，立刻盖皿盖。③待板却凝固后，将平板倒过来

放置。④平倒置的目的是___既可以止皿盖上的冷凝水落入培养基，又可以避免培养基水分过快的挥发_。3、纯化大肠杆菌1）微生物接种的最常用方法是___板划线法和_稀释涂布平板法_________，另外还有___斜接种________和_刺接种__________。2）平板划线法：通过

接种环

在琼脂固体培养基表连划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散其操作步骤是：

到培养基表面。数次划线培养后，分离到单个菌落。②将种环在酒精灯火焰上灼烧直至接环烧红。②在

火焰旁

冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。③将种试管口通过火焰。④将

已冷

的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划3～5条_平行_________线盖上皿盖，要划破培养基。⑦

灼烧

接种环，冷却后从第一区划线末

开始向第二区域内划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将第五区的划线与第一区划线相。⑧将板倒置

放在培养箱中培养。取菌种前灼烧接种环的目的是__免接种环上可能存在的微生物污染培养物_______；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是

杀死上一次划线后残留在接种环上的菌种一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是防高温杀死菌种；最后灼烧接种环的目的杀死种环上残留种，防污染环境和感染操作者在第1次线后都从上次划线末端开始的目的___线后，线条末端的细菌数目比起始处要少每次从上一次末端开始线够使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少最终分散成单个菌__________________________________3）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当释度足够高，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，即可获得单个菌落系列稀释操作：②取盛有水的菌试管

6支编号、、、、、。用灭菌的移液管吸取1mL菌注入编号为101试中，并吹吸3次，使菌液和水分充分混匀。从101倍液中吸取1mL菌注入到编号为试管内吹吸均匀，获得102倍。依此类推。4作试管口和移液管应在离火焰1-2cm涂布平板的操作：

处个操作过程中使用了支液管。将涂布器浸在盛有酒

的烧杯中量超0.1mL培基表面，将沾有少量酒精的涂布器在火焰上

引燃，酒精燃尽后，冷

，将菌液均匀的涂布在培养基表面时动培养皿菌液分布均匀。注意：培养未接种培养基：作用是对照

结果：若无菌落产生

则，培养基制备成功，可以使用；若有菌落产生，则培养基灭菌不彻底。四、菌种保藏：1、频繁使用的菌种利用临保

法保存，利用固体面

培养基培养后，保存在°

冰箱中，每～个转种培养一次。缺点是保存时间不长，容易被染或产生变异；2、长期保存菌种的方法是甘油藏法将菌种与无菌体积等量甘油混合后保存在℃冷箱。课题土壤中解尿素的细菌分离与计数一筛菌1、科家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为___热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物_________________________________________。2、原理：人为提供有利于目的株抑制或阻止其他微生物生长。

生长的条件（包_营养、温度PH__等时3、选择培养基是指允许

特定种类

微生物生长，同时

抑制或阻止其他微生物生长的培养基。4、尿是一种重要的氮肥，农作___能_______（，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为酶。程式：

氨和，这是因为细菌能合成脲对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借_物化__________的方法。在细菌分解尿素的化学反应中合的脲酶_________尿素分解成了______氨和CO2____。会使培养基的碱_增强_________，PH___高_______。此，我们可以通过检测培养_pH__________化来判断该化学反应是否发生。7、

在以___尿素_______为一氮源的培养基中加_酚红_________指剂。培养某种细菌后果PH升高示将变红_________明细菌能够____分解尿__。二统菌数1计落数目时来计样品中活菌数目的方法__释涂布平板_____。除此之外，____显微镜直接计_______

也是测定微生物数量的常用方法。细菌的数目还可以通过

滤膜法

来测定。测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到_伊红美蓝_培基培养肠杆菌菌落呈___________色通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应____3_______个水样。采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于__样稀释液中的一个活菌____________________。通过统计平上菌落数___________________，能推测出样中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在__30-300_________的板进行计数。从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是_____

（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数。5、利用稀释涂布平板法成功统菌落数目的关键恰当的稀释度_________。6、统计的菌落数比活菌的实际目低______这是因为当

两个或多

个细胞在一起时，平板上观察到的只是__个________菌落数___来表示。

菌落。因此，统计结果一般用_7置对照的主要目的是排__验__________中____测试___________因对实验结果的影响，提高实验结果___可信度______。三实设1、实验设计的内容包括实验方、材料用具、实施步骤和时间安排等。2根据示2－7填写以下实流程：配制土壤溶液

系列稀释

涂布平板与培养

菌落计数3土微生物主要分布在距地表3～近中性土壤中，约％～80％细菌4分离不同的微生物采用不同的稀释度原因是不同微生物在土壤中含量不同目是保证获得菌落数在30～之、适于计数的平板。细菌稀释度为10、5、6，线菌稀释度为10、4、5，菌稀释度为102、、。5培不同微生物往往需要不同养温度。细菌一般在

30～37℃培养1～2d，放线菌一般在25～28℃培养5～7d，霉菌一般在～28℃的温度下培养3～4d。在菌落计数时每隔24h统计一菌落数目选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。菌落的特征包括形状、大小、隆起程度、颜等方面。实验过程操作提示1）取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都

灭菌。2）

应在火焰旁称取土壤10。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。实验时要对培养皿作好标记。注明培养基种类、培养日期、稀释度、培养物等。为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先制定计划。土壤

人为

有利于目的菌株生长中尿素分解菌的分离与计数

分离筛选微生物的原理微生物计数方法与原理对照设置与重复设置

抑制或阻止其他微生物生长稀释涂布平板法显微镜直接计数课题分解纤素的微生物的离一、纤素和纤维素酶1维素是一种由葡萄糖首尾连而成的高分子化合物是含量最丰富的多糖类物质2、

棉花

是自然界中纤维素含量最高的天然产物。3、纤维素酶的作用：纤维素酶一种复

酶，一般认为至少包括三种组分：酶Cx和葡糖酶1纤素

酶Cx酶1

纤二

葡糖酶

葡糖4、证明纤维素酶作用的实验：在一支试管中添加纤素酶另一支试管不纤维酶；都加入滤纸和

醋酸－醋酸钠缓冲液

缓冲液，用量

不同维持相

同的pH=4.8。5、1个酶力单位是指在温度为25℃，其它反应条件1min内化1mmol的底物所需要的酶量。二、筛选纤维素分解菌

最适宜

情况下，在1．筛选纤维素分解菌的方法是

刚果红染色法

。该方法可以通过

颜色

反应直接筛选。2．理是：

刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后红色复