标准操作程序SOP

#第四章研發組SOP400健康監測―、採樣方式：繁殖組送檢動物包含8-10週齡成鼠與老年的淘汰種鼠，每季每品系逢機取樣，動物採樣數則依該品系動物總數決定，由研發組向繁殖組提出並說明採樣動物數的決定過程。動物代養組每季每籠架逢機選擇一隻衛兵鼠作為病材。新進檢疫動物逢機採樣約5%動物總數，但需依族群大小修正。待檢動物需用動物籠或紙箱裝妥，並在其上書明動物淘汰(送檢)原因及採樣日期、動物房號碼、動物品系與年齡，如有臨床症狀也需一併記錄。健康監測動物送檢流程，參照附錄十二並依附錄十三填寫送檢單。將待檢動物送至動物中心研發組實驗室。二、血清病毒監測，使用CharlesRiver生產使用酵素免疫分析法(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay；ELISA)套組。採樣與ELISA流程如下：待檢活體動物以二氧化碳安樂死並心臟採血。所收集的血液靜置於4°C冰箱6-12小時。含血液之微量離心管以800-1,000g離心15分鐘，吸取上層血清於新的微量離心管，存放於-20C備用。血清至少測定黴漿菌、小鼠肝炎病毒與仙台病毒ELISA套組，其餘按所要監測病毒種類，選擇適合之套組做ELISA測試。將測試血清以Blotto溶液(MilkdiluentSolutionConcentrate)60倍稀釋。分別將50mL稀釋液滴入含有TC(對照組組織抗原)與AG(病毒抗原)的分析盤條(microplate)。對照組血清分為高濃度、低濃度與陰性三種，在每一次試驗中均必須使用以有利於判讀；高濃度、低濃度對照血清以Blotto溶液2倍稀釋，陰性對照組則12倍稀釋後使用，稀釋後之對照組血清分別滴入50mL於TC與AG兩孔。將分稀盤置於37C作用40分鐘。以沖洗液(washsolution)沖洗3次。滴入50mL結合液(含第二抗體；6000倍稀釋)於分析盤每一孔。將分稀盤置於37C作用40分鐘。以沖洗液(washsolution)沖洗3次。加入100mL的呈色劑(ABTSPeroxidaseSubstratesystem)到分析盤每一孔，呈色40分鐘。加入100mL的呈色反應抑制劑(ABTSPeroxidasestopsolution)到分析盤每一孔，停止呈色反應。使用405mm波長ELISA判讀機進行判讀。每一測試血清AG與TC所得商數（Q），若3£Q則判為陽性，3>Q32則定為疑陽性，若Q<1則為陰性。三、細菌監測氣管細菌.動物採全血，或解剖後以滅菌小剪刀撿開喉頭，以0.5mLTrypticSoyBroth（TSB）打入氣管抽打一次後吸回TSB。.回收之TSB，取0.2mL滴在血液培養基（bloodagar）上，並將此滴TSB均勻分布在血液培養基，其餘打入另一管滅菌TSB。.接種後培養基置於37°C培養24-48小時。.TSB培養基增菌後呈混淆，以白金耳（loop）無菌操作取少量TSB於Mycoplasma特殊培養基37C培養7-14天觀察是否有菌落產生。.血液培養基經增菌後觀察菌落之型態、大小、顏色，判斷是否有可疑菌落。.可疑菌落可經革蘭氏染色特性與生化性狀（或使用快速診斷套組）等方式，以鑑定細菌種類。註：黴漿菌培養鑑定亦可經下列步驟得到結果：以含有Phenolred的2,4,3D-modificationMycoplasmabroth代替TSB採樣。Mycoplasmabroth於37C二氧化碳培養箱中培養4-6天，觀察培養液顏色。若培養液顏色有改變，取溶液0.2ml於製備好的含2％馬血清之2,4,3D-modificationmycoplasmaagar上畫線後培養於37°C。待菌落長出後，在顯微鏡下觀察菌落型態及染色特性，以鑑定Mycoplasma。腸道細菌.動物解剖後，以滅菌剪刀剪開盲腸並用滅菌棉花棒採樣後，放入GNbroth於37C培養24小時至48小時。.以無菌白金耳由GNbroth釣菌至MacConkeyagar培養基上畫線，於37C培養24小時。.依菌落型態、大小、顏色選擇可疑菌落做細菌鑑定。四、寄生蟲監測鼠類外寄生蟲監測：動物採血後，在放大鏡下觀察皮毛是否健康並注意是否有外寄生蟲。鼠類內寄生蟲監測：動物解剖後，取盲腸與結腸內容數公克，放入裝有飽和硝酸鈉溶液之小燒杯後，攪拌均勻檢視液面上層浮游物。以乾淨膠布直接沾粘肛門後，貼於載玻片，在顯微鏡下觀察。五、組織採樣採樣組織包含頸部淋巴結與下顎唾腺、肝臟、腎臟、胃、十二指腸、迴腸、盲腸、結腸、生殖道、氣管與心肺臟及腦部。組織採樣的大小約0.5cm立方為宜，可視組織不同加以修正採樣組織大小。若有疑似病灶拍幻燈片存檔，一式兩份，分別由研發組與送檢單位存檔。SOP401環境監測―、空氣落菌量監測監測範圍為繁殖組與小動物組SPF動物房，每2週採樣一次。裝備TrypticSoyAgar(TSA)與SabouraudAgar培養皿。採樣當天早上，飼養工作人員未工作之前，於動物房地板前、中、後三分之一，空調出風口、排氣口，與每個動物隔離箱上、中、下層各放一個TSA與一個SabouraudAgar培養皿。經30分鐘後，收取所放置之TSA培養皿，放於37°C培養18-24小時，另將SabouraudAgar培養皿放於22C培養5天，而後觀察並記錄菌落數量。二、隔離區內飲用水水質監測採樣樣品來自滅菌後尚未使用之飲用水，目的在確定飲用水經滅菌後滅菌效果是否完全。每二週採集一次，在一批滅菌飲用水取3-5瓶，倒入含滅菌濾紙(0.2mm)之過濾裝置，以真空幫浦抽氣過濾。濾過後濾紙至於MacConkey及血液培養基，37C培養18-24小時觀察是否有菌落。三、隔離區內飼料微生物監測採樣樣品來自滅菌後尚未使用之飼料，目的在確定飼料經滅菌後滅菌效果是否完全。每二週採集一次，在一批滅菌飼料中取3-5個樣本，每個樣本取約5克。樣本以滅菌蒸餾水中依序10倍稀釋至10,000倍，並將稀釋後樣本取1mL在EMB培養基37C培養24-48小時，並計算菌落數。四、隔離區內墊料微生物監測採樣樣品來自滅菌後尚未使用之墊料，目的在確定墊料經滅菌後滅菌效果是否完全。每二週採集一次，在一批滅菌墊料中取3-5個樣本，每個樣本取約10克。樣本以滅菌蒸餾水中依序10倍稀釋至10,000倍，並將稀釋後樣本取1mL在EMB培養基37C培養24-48小時，並計算菌落數。SOP402疾病診斷―、除一般健康監測流程外，若動物飼養管理員或動物使用者，發現異常動物，請參照下列各點送檢。1.疾病診斷流程參照附錄十四，並依附錄十五填寫送檢單。有關微生物檢查請參照SOP400所述方式，視所需選擇執行。有關寄生蟲檢查請參照SOP400所述方式，視所需選擇執行。有關組織檢查請參照SOP400所述方式執行，拍照並保存任何可能含病灶的病材。SOP403SCID小鼠免疫球蛋白測定―、每季定期與繁殖組共同執行，使用TheBindingSite產品(RIDRN272.3，RN278.3)，應用免疫沉澱法原理，求取高中低三種濃度對照血清，與其形成環狀免疫沉澱現象，得到一直線關係，將可估計血清中的免疫球蛋白濃度。簡單步驟如下：由繁殖組進行SCID小鼠眼窩採血，採集所需血清，送研發組待檢。以免疫擴散法測定血清免疫球蛋白包含IgG與IgM兩項。將待測血清與高、中、低濃度對照組血清5mL分別注入套組孔槽，室溫培養72小時，觀察免疫擴散環的大小代入對照組血清所得的標準直線中即可得待測血清中IgG與IgM濃度。將測定結果小於10mg/mL定為陰性為正常SCID小鼠。建議將有測得免疫球蛋白之SCID小鼠淘汰或做為衛兵鼠。實驗動物中心無菌操作台標準作業程序故障聯絡電話：分機52695，林志展09254932551.目的確保使用者於無菌、乾淨之環境下操作動物實驗，並降低實驗動物於例行性更換籠具時暴露在可能遭受污染之環境下，進而減少疾病的傳播。適用範圍本中心所有放置無菌操作台之程序實驗室與一般飼育室。名詞定義3.1無菌操作台在本中心之無菌操作台係指應用層流(laminarflow)原理，將經由HEPA濾網過濾過之氣流由上而下吹過操作台面，並可避免外界空氣污染操作區域之生物安全防護櫃(BiologicalSafetyCabinet)。程序.檢查電源。.打開風扇開關，盡量使其運轉達10分鐘以上，確保清靜循環流暢。操作前，必須穿戴手套及口罩，用75%酒精噴灑工作台，並用滅菌擦手紙擦拭整個台面，確保無菌無塵之狀態。.操作過程中，玻璃遮門的高度愈低愈好，至少維持在30-35公分內。遮門過高會導致外氣壓力過大而影響內部工作環境。物品盡量避免放置在回風口(沖孔網)上方，以致堵塞影響空氣循環流暢此外。使用完後，用75%酒精擦拭工作台及3面工作牆，拉上玻璃遮門，盡量讓風扇繼續運轉10分鐘以上再將其關閉。最後打開紫外線之開關。.紫外線開啟時要注意玻璃遮門是否緊閉，照射約30分鐘至1小時即可關閉。放置於動物房內之操作台不需開啟紫外線，避免直射動物身上。.定期更換預濾網(pre-filter)，並詳實記錄於「無菌操作台維護記錄表」。以目視法檢查，若感覺很髒，即可更換。一般可使用300小時以上。高效率過濾網(HEPAfilter)可使用約1.5-2.0年，或使用時數超過4000小時/年即需更換。每次更換預濾網時，將操作台及沖網孔拆開，以漂白水清潔。更換高效率過濾網時，打開風扇連續運轉，並以紫外線照射整晚。注意事項.操作台上方排氣口應打開約1/3，以利空氣排出。.盡量避免身體與頭部伸入操作台內。.操作台除了放置必要之工作器材或耗材(飼料、水瓶、滅菌籠具、手套、擦手紙)之外，嚴禁將已滅菌過之器材暴露在操作台之外。其他雜物一律移出。附件/表單6.1無菌操作台維護記錄表日期更換品項放置位故障原因修繕情況初級過濾網高效過濾網移出處移入處□小時□小時□小時

備註◎已更換初級過濾網次數有次，高效率過濾網次數有次。◎清潔內部時間為更換初級過濾網時間。◎修繕情況清填修繕單號。日期更換品項放置位故障原因修繕情況初級過濾網高效過濾網移出處移入處□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時

□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時□小時備註◎已更換初級過濾網次數有次，高效率過濾網次數有次。◎清潔內部時間為更換初級過濾網時間。◎修繕情況清填修繕單號。實驗動物中心緊急事故處理林志展（0925493255）f工務室（52222）f警衛室（52143）-總機查詢（9）災害：地震：大聲呼叫地震了-迅速離開中心-待震後安全無虞始可回中心現場火災：大聲呼叫失火了-滅火器-查訪單位各區塊-林志展-工務室機械故障或異常：林志展-工務室動物逃脫：關門-貼上警告標誌-林志展-研究室-抓捕逃脫動物-安樂死或淨化

實驗動物中心人員工作職責、項目及內容時間工作項目工作內容0800-0830晨間會議貫驗動物中心工作人員晨間會議（前日業務檢討及今日任務說明）0830-0900先前準備空調檢查、設備叫修、消毒鍋開機、動物房飼養用具準備、隔離衣設備及器械包滅菌…等1630-17004亠土厶糸不合討論設備停機、動物房環境檢查、叫修複檢、電源檢查、綜和檢討及單（今日業務檢討及明日任務說明）職稱職責工作流程及說明獸醫師綜合動物中心經營管理。協助各式動物外科手術之保定、麻醉及術後照顧。實驗室環境監測（每季）。進出動物健康監測及檢疫（委外執行）。支援醫學研究部業務（含動物貫驗申請表審核、動物貫驗許可書簽發）。院內研究助理、專助及住院醫師教學訓練。支援醫院住院醫師教學訓練（含院外學員）。研發（研究計畫申請）。0800-0830晨間會議0830-0900先前準備0900-0930動物房巡察0930-1000動物中心設備檢查1000-1200業務執行1200-1300午休1300-1630業務執行1630-1700綜合討論會議或機動業務代養技術員動物代養：0830-0930老EED飼養室（1）兔室(1)&(2)老鼠飼養室(1)&(2)&(3)0930-1030老EED飼養室（2）1030-1130老EED飼養室（3）藥物代謝室1130-1200行為觀察室&墊飼料室

行為觀察室1200-1300午休墊飼料室1300-1400藥物代謝室北側走道區及閘門1400-1500兔室（1）鞋櫃（含拖鞋清洗）1500-1600兔室（2）1600-1630北側走道區及門閘（含SPF區前室）清潔1630-1700綜合討論會議或機動業務清潔技術員籠具清洗：0830-0900豬飼養區清潔豬飼養區清潔0900-0930狗飼養區清潔狗飼養區清潔0930-1000手術室清潔中央走道區清潔1000-1130籠具清洗（鼠）手術室清潔1130-1200中央走道區清潔（防塵墊更新）機械室及