植物组织硝酸盐含量测定与分析

植物组织硝酸盐含量的测定与分析XXX,ZZZ,YYY一实验目的：1、学会植物组织硝酸盐含量的测定方法。2、复习分光光度法，掌握分光光度计的使用。3、了解硝酸盐含量在植物营养生理中的作用。4、通过对实验原理的掌握，用分光光度法测定油菜柄的硝酸盐含量。二、实验原理：（1）用蒸馏水将植物组织中的硝酸盐和亚硝酸盐提取出来。（2）加锌粉将提取液中的硝酸根还原成亚硝酸根 ：（3）与对氨基苯磺酸生成重氮盐， 同α－萘胺结合生成玫瑰红色的偶氮染料：（4）在520nm有吸收峰，其颜色的深浅在一定浓度范围内与溶液中硝态氮含量成正比，以用分光光度法进行测定 。，

可三、实验材料：油菜

BrassicanapusL．四、实验试剂：（1）硝酸盐标准溶液：取恒重硝酸纳存于冰箱中（ 0—5℃）备用。

0.6071g溶于

1升水中，配成

100μg/ml硝态氮溶液储（2）20%醋酸溶液(V/V)：取2Oml分析纯冰醋酸加 80ml 水。3）混合粉剂：含硫酸钡：100α-萘胺：2锌粉：2对氨基苯磺酸： 4硫酸锰：10柠檬酸 75将上述各种试剂分别研细，硫酸钡烘干，再分别用等分的硫酸钡与其混合，然后再把所有各剂混合在一起 ,使混合粉剂成为无颗粒状灰白色的均匀体， 配制粉剂应在干燥洁净环境中进行，若空气湿度偏高，则混合粉剂成淡攻瑰红色。若药品不纯也会造成此现象，降低测定灵敏度，配好的粉剂应保存在黑暗干燥条件下，七天以后即能使用，存放条件良好，可存放数年，其测定稳定性比新配的更佳。五、实验步骤：1、标准曲线的绘制：（1）配标准系列：配制浓度为 0、4、8、12、16、20μg/ml的硝态氮溶液各 10ml。（2）显色：分别吸取 2ml上述溶液转入到 50ml比色管中，加 20%醋酸溶液 18ml,0.4g混合粉剂，剧烈摇动 1分钟，静置 10分钟，用双层滤纸过滤。（3）比色测定：

取上清液以蒸馏水作对照，测定其520nm的吸光度值，以浓度为横坐标，标准样品的吸光度为纵坐标绘制标准曲线或作出回归曲线。2、植物组织中硝态氮的提取：称取待测的植物功能叶柄 0.5g，剪成l－2mm的碎片，置于干燥的三角瓶中，加入蒸馏水 20ml，加塞进行激烈振荡 1-3分钟，放置 10分钟。上清液为硝酸盐提取液。3、植物硝态氮提取液的测定：（1）取上部清液 2ml，显色 转入到50ml比色管中，加 20%醋酸溶液 18ml,0.4g混合粉剂，剧烈摇动 1分钟，静置 10分钟，用双层滤纸过滤。（2）比色测定：蒸馏水作对照，测定显色后溶液 520nm的吸光度值，查标准曲线求出提取液中硝态氮的浓度 (μg/ml)。六、计算：植物组织中硝态氮含量(μg/g)=C·V其中：C为标准曲线上查得的组织提取液含硝态氮浓度(μg/ml),V为lg植物组织所制备的提取液总体积(ml)。如本方法为40ml。实验数据：蒸馏水0ug/mL4ug/mL8ug/mL12ug/mL16ug/mL20ug/mL待测100.0700.2150.2980.3100.6090.7360.674200.0710.2150.2970.3130.6090.7370.673用Excel作图得：油菜叶柄硝态氮含量测定a-C标准曲线a0.8y=0.0323x+0.05：0.7度0.6R2=0.9326光0.5吸0.40.30.20.10048121620浓度：C可以看出，浓度12ug/mL对应的吸光度偏离其他的数据，极有可能为错误数值，应予删去，得下图：油菜叶柄硝态氮含量测定 a-C标准曲线0.8a0.7y=0.0334x+0.0648：0.6度R2=0.99480.5光吸0.40.30.20.100 4 8 12 16 20浓度：C由公式y=0.0334x+0.0648可得：当吸光度 a=0.6735时，浓度 C=18.22ug/mL所以，测得油菜叶柄中硝态氮含量为： 18.22ug/mL*40mL=728728.8ug/g.七、分析与讨论：1、在刷洗干净试管以及比色管以后要及时贴好标签，以防比色管混淆。2、加入混合粉后要剧烈震荡试管，以使溶液中的硝酸盐充分被还原为亚硝酸盐。3、过滤时要用前滤液润洗试管，充分利用了要弃去的滤液。4、在使用分光光度计时要将比色皿刷洗干净，尤其是作为调零的比色皿。八、实验建议：1、比色皿应该定期彻底清洗，因为外部与内部都有杂质残余。2、建议增加胶头滴管或塑料滴管的数量，用来准确滴加，量取溶液。3、建议更新移液管，因为很多移液管的下端都已破碎，会对移液的精度造成影响。九、小结：通过本次实验我学会了植物组织硝酸盐含量的测定方法，