时时保持高代谢率-国泰医院新陈代谢科医师黄莉棋(完整版)实用资料

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时时保持高代谢率国泰医院新陈代谢科医师黄莉棋

黄医师在高中时也曾跟流行用水煮蛋、3日减肥菜单等来减肥，但都无功而返。

进入国泰医院担任内分泌新陈代谢科医师后，现在的她有一套「更专业」的饮食、运动习惯，来提升代谢、控制体重。

饮食秘诀80％用水煮方式烹调！

为了减少油脂的摄取，黄医师的饮食约有80％是用水煮方式，且鸡皮几乎不吃。还尽量减少外食机会，若非得外食，也以自助餐为主。时时保持高代谢率国泰医院新陈代谢科医师黄莉棋（完整版）实用资料(可以直接使用，可编辑完整版实用资料，欢迎下载）

保养秘诀勤练气功+泡澡！

黄莉棋医师喜欢买日本汤包回家DIY泡澡，尤其是熏衣草类，感觉非常棒，不过1星期只泡1次，每次20分钟左右，泡太久血液扩张太快，反而会头晕。

值得一提的是，她早晚还练气功，不但纾解压力，疲劳也改善了不少喔！

★特别叮咛

睡前练气功5-10分钟，养生外，还可弥补白天不足的运动量。每天早上吃1颗维生素B群，让妳整天都有好心情，也有助于代谢力喔！

运动秘诀快走+爬楼梯！

工作忙碌的黄医师，最常做的运动就是走路及爬楼梯，因为看诊的关系，所以1到7楼，每天爬个5、6趟，是稀松平常的事。而且为了延续较高的心跳率，到了楼层，还继续快步走，让每次「爬楼梯运动」的燃脂效果都可以持续20～30分钟。

此外，她还利用忠孝捷运地下街，每天从明耀百货以10分钟走到sogo，不仅增加肺活量，更保持高代谢率。

★特别叮咛

走路的时间最好选择在中午之前，1星期至少3天，就可以保持良好的代谢能力。

提升代谢的私房饮食小Tips

TIP1

维生素B群具有提升代谢的能力。维生素C、E及锌属于抗氧化剂，有助于减缓老化，当然代谢率的下降也能因此稍稍趋缓。

TIP2

人蔘、银杏等虽不能直接促进代谢力，但可以帮助气血循环，对增加活力也有帮助。

TIP3

平均每天喝2000c.c.的水，尤其在运动时更要补充。能维持电解质平衡，使钠、钾不会流失。

TIP4

每次进食时，都是提高代谢的机会，所以，少食多餐，最好1天能吃6小餐，增加热量消耗！1998年12月September1998中国油料作物学报Chinesejournalofoilcropsciences第20卷第4期Vol.20No.4植物脂肪酸代谢工程研究进展王幼平曾宇罗鹏(四川联合大学生物系成都610064摘要简述植物脂的生物合成途径以及近年来植物脂肪酸代谢工程研究进展。关键词油料作物脂肪酸代谢酶修饰大豆、油棕、油菜、向日葵、棉籽和花生等食用植物油的主要成分为棕榈酸(C16∶0、硬脂酸(C18∶0、油酸(C18∶1、亚油酸(C18∶2和亚麻酸(C18∶3等。而潜在的非食用植物油资源较多,现已发现上千种脂肪酸类型在植物中都可找到[1]。如在野生植物中,筛选到含量很高的长链脂肪酸植物有Crambe,Limnanthes和Lunaria,中链脂肪酸植物有Cuphea和Lauraceae,羟基脂肪酸植物有Lesquerella,环氧脂肪酸植物有Vernonia,Stokesia,液体蜡酯植物有Simmondsia等[2]。但是一种潜在的种质资源要成为合乎要求的作物,还有许多工作要做。诸如种质的收集、鉴定、评价和利用等。近年,分子生物学家利用现代遗传操作技术,通过基因工程的方法把一些种质资源中有益的性状通过分子克隆等手段转移到新的宿主中去,重新设计植物脂类代谢方面已进行了大量的尝试,并取得了显著成绩。本文将阐述植物脂的生物合成途径以及近几年来植物脂基因工程研究的状况。1贮藏脂(storagelipids的生物合成尽管植物脂代谢途径相当复杂,但大多数反应步骤已了解很透彻[3]。植物脂的生物合成主要有两个去向,一是用来构成生物膜的甘油脂和磷脂,另一个是贮藏在种子中,即贮藏脂,常以甘油三脂(TAG的形式存在。研究表明:贮藏脂的生物合成和膜脂的形成是受不同遗传机制控制的,即使它们的早期阶段具有一个共同的生物合成途径,但贮藏脂的脂肪酸组成的变化并不会影响膜脂的成分。如亚麻酸(C18∶3是所有植物光合膜的主要组成成分之一,同时也是亚麻子油的基本组分,利用化学诱变缺失两个基因功能,使亚麻子油中的亚麻酸含量从46%降低至2%,而在膜脂中的含量不受影响[4]。因此有人推测可能存在两套基因编码相应的同功酶,或一套基因通过复杂的表达调控使得膜脂合成途径活跃。植物脂的生物合成途径特别适合于植物分子遗传操作,因为贮藏态脂是一种封闭的相对惰性的光合终产物,其主要成分的改变不影响植物总的分解功能,只是这种改良后的贮藏脂必须适合萌发后的脂分解[5]。本文只简述植物贮藏脂的生物合成。植物细胞脂肪酸的生物合成主要发生在质体的基质中,由乙酰辅酶A经一系列反应生成不同链长(C8~C18的脂肪酸,通过与ACP结合组装脂肪酸并引入第一双链(③,在特异性硫酯酶(④作用下,脂肪酸从ACP复合物释放并经辅酶A脂化后(⑤穿过质体膜进入细胞质,收稿日期1998—02—24课题来源国家自然科学基金资助项目作者简介王幼平,男,33岁,副教授,博士在多种酶(⑥~⑨的作用下进一步代谢和修饰,包括脂肪酸的去饱和以及链的延长等[6](图1。图1植物贮藏脂类生物合成简图(引自Somerville,1991Topfe,1995注:①乙酰辅酶A羧化酶;②脂肪酸合成酶;③△9—硬脂酰ACP去饱和酶;④酰基ACP硫酯酶;⑤酰基CoA合成酶;⑥△12—油酰去饱和酶;⑦△15—亚油酰去饱和酶;⑧⑨延长酶;βκ3—磷酸甘油酰基转移酶(G3PAT;βλ溶血性磷脂酸酰基转移酶(LPAAT;βµ磷脂酸磷化酶(PAP;βν二酰甘油酰基转移酶(DAGAT;ACP,酰基载体蛋白;CoA,辅酶A。TAG的组装是通过Kennedy途径[7]:3—磷酸甘油(G—3—P→溶血性磷脂酶(LAP→磷脂酸(PA→二酰甘油酯(DAG→三酰甘油酯(TAG。所需酶分别为3—磷酸甘油酰基转移酶(G3PAT,溶血性磷脂酸酰基转移酶(LPAAT,磷脂酸磷酸化酶(PAP和二酰甘油酰基转移酶(DAGAT,上述四种酶均定位于内质网膜上。2植物脂肪酸代谢工程植物脂类代谢工程的主要目标是通过增加新酶、促使已存酶的超量表达以及采用反义RNA达到减少内源酶表达水平途径来控制脂肪酸的合成过程,利用植物这一天然工厂定向生产和加工出更多、更好的为人类所需的物质。目前主要通过操纵TAG的生物合成来直接改变油的成分,已鉴定出的主要酶类有两类:脂肪酸修饰酶和TAG组装酶。上述大部分酶已经纯化并建立了它们的基因文库。2.1脂肪酸修饰酶类2.1.1脂肪酸去饱和由于植物油中饱和脂肪酸的含量远低于动物脂肪(饱和脂肪酸含量达10%~50%,因此用植物油取代动物脂肪是降低胆固醇水平的最有效方法。不过植物油仍含有10%~20%的饱和脂肪酸,其主要成分是棕榈酸(C16∶0。棕榈酰—ACP在脂肪酸代谢过程中是一关键物,其碳链既能被3—酮酯酰ACP合成酶进一步延长,也可以在乙酰—ACP硫脂酶作用下脱ACP形成棕榈酸并转化为贮存态油,因此植物油中饱和脂肪酸的含量主要是由98王幼平等:植物脂肪酸代谢工程研究进展09中国油料作物学报1998,20(43—酮酯酰ACP合成酶和硫酯酶活性所决定,控制其中一种酶的活性就可使油中饱和脂肪酸含量有所改变。如Bleibaum等在甘蓝型油菜种子中通过3—酮酯酰ACP合成酶的超量表达导致了棕榈酸含量的降低[8]。Yadav等在大豆中通过一种“协同抑制”的方法,即用另一乙酰—ACP硫酯酶基因转化大豆,结果降低了本身具有的硫酯酶活力,导致胚中饱和脂肪酸含量减少了一半[9]。近一半的植物油被加工成奶油和起酥油而间接食用。由于大多数植物油在室温下为液态,因此要做成奶油和起酥油必须提高植物油的熔点,其实质就是增加植物油中饱和脂肪酸的份额。通过催化加氢的方法可提高植物油的饱和度,但研究发现氢化作用可导致不饱和脂肪酸双键由顺式向反式转化,不利于人的健康[3]。如果通过分子遗传操作方法改变脂肪酸代谢中的去饱和酶正常活性,阻止双键的形成,也会实现上述目的。Knutzon等通过硬脂酰—ACP去饱和酶(③cDNA的反向表达,使芜菁种子油中硬脂酸含量由2%增加到40%[10]。通过硫酯酶(④的超量表达和降低硬脂酰—ACP去饱和酶的表达水平,也会使种子中的硬脂酸含量提高到45%[8]。Hitz等通过对△12—油酰去饱和酶(⑥反义抑制可使油菜的油酸含量上升到83%,这种转基因油菜和一种突变体油菜(其油酸含量为78%杂交,结果可培育出油酸含量达87%的油菜新材料。在大豆中,对△15—亚油酰去饱和酶(⑦反义抑制,使其种子中亚油酸的含量提高了10%[11]。2.1.2脂肪酸链的终止中等长度的脂肪酸(C8~C12主要用于制造肥皂、去污剂和表面活性剂,其中月桂酸(C12为最理想的表面活性剂,但这些脂肪酸主要分布于热带植物中,如椰子树和棕榈树等。美国Calgene公司为了改变靠进口椰子油和棕榈油来生产月桂酸,从加州桂树(Umbellulariacalifornia中发现一种特殊的酶(酯酰—ACP硫酯酶,如果植物中含有该酶,ACP上的脂酰链长度达C12时即终止合成反应。通过该酶的纯化和氨基酸序列分析,分离其cDNA,现已获得表达同一硫酯酶的油菜转基因植株,并可产生出40%以上的月桂酸,而且转基因植株的农学性状没有明显的变化,种子的产油率较高[12]。在Cuphealanceolata植物种子中癸酸(C10含量高达83%,从该植物中分离特有的硫酯酶基因并转入油菜中,结果使油菜种子中含有1%的辛酸(C8和3%的癸酸[10]。2.1.3脂肪酸链的延长芥酸(C22∶1是具有广泛用途的精细化工原料,除用作溶剂和润滑剂外,还可精炼成有价值的产品,如香料、橡胶添加剂、十三烷二酸、高级工程塑料(如尼龙1313等[13]。但目前工业上芥酸的生产主要是以普通菜油为原料,其芥酸含量较低(30%~50%,且食用油菜育种日趋向零芥酸方向发展,因此严重限制工业芥酸的生产。如果通过现代生物技术使目前植物油中的芥酸含量由50%提高到90%以上,就会大大降低芥酸的生产成本,提高植物油在市场中的竞争力。要使种子中芥酸含量达90%以上,首先,必须引入具有链延长功能的特异性酶。芥酸的合成是以油酸(C18∶1为原料,在细胞质中进行,现已发现在油菜中是由2种延长酶的作用来完成[14],即C18∶1—CoA和C20∶1CoA延长酶。目前美国Calgene公司从Simmondsiachinensis植物(该植物种子含100%的液体蜡酯中分离出2个目的基因,期望对此酶进行修饰[15]。其次,还要考虑TAG组装过程各种酰基转移酶。因为即使芥酸产生了,是否全部能整合到甘油的三个羟基上还是疑问[5]。Bernerth等研究发现,如果增加芥酰CoA的浓度(是油酰CoA的5倍,LPAAT在sn—2位上还是优先使用油酰CoA,因此要想进一步提高油料植物中芥酸的水平,只提高细胞中芥酸CoA的浓度是不能根本解决问题,必须对LPAAT的性质进行修饰[16]。2.2甘油三酯(TAG组装酶油料种子通过Kennedy途径合成TAG,大量的研究表明不同来源的G3PAT和DAGAT对酰基CoA的选择性较小,而LPAAT则具有很强的选择性。TAG的sn—1和sn—3位的酰基类型很大程度上依赖于细胞内的酰基CoA组成含量,而sn—2位受LPAAT选择特异性的高度限制,即在TAG的sn—2位上不接受C16或C18的饱和脂肪酸以及大于C18的不饱和脂肪酸[16]。但在自然界也有特例,如乌桕的种子中棕榈酸含量高达71%,旱金莲(Tropaeolumma2jus的芥酸含量为78%~82%[2]。这为基因工程创造单一的特高脂肪酸含量的新型油料植物提供了可行性证据。目前G3PAT已从椰子种子中分离纯化[17],基因已被克隆[18],DAGAT已从大豆叶中分离纯化[19]。通过对油菜、旱金莲、大豆、玉米、棕榈、蓖麻子和草地泡沫(Limnanthesalba等油料植物种子成熟过程的研究,发现只有草地泡沫植物中的LPAAT酶可使芥酸CoA与1—芥酸—3—磷酸甘油酯生成二芥酰磷脂酸,并可进一步生成三芥酰甘油酯[20]。这个特点对通过基因工程方法培育高芥酸油菜是相当重要的,因为传统的育种方法培育的油菜芥酸含量最多不超过理论值66%。如果将草地泡沫的LPAAT基因转入高芥酸的油菜中,理论上将会产生90%以上芥酸的油菜新材料,此项工作目前国内外有关单位正进行研究,并有望5年内培育出特高芥酸含量的新型油料植物。3结语目前,分子生物学家通过对植物脂肪酸生物合成的深入了解,运用分子遗传操作技术,不仅可设计出单一的特高含量的中、长链脂肪酸油料植物,而且可创建出特异性(如环氧脂肪酸、环链脂肪酸等高值产品的新型油料植物。因此,今后我们可从以下几方面开展工作:①进一步拓宽目的基因源,来自细菌、动物和真菌的膜结合脂肪酸修饰酶均能在转基因植物中发挥作用[21]。②通过对光合产物的流向进行控制,可直接生产出贮藏态油脂含量高的植物种子,几乎不含有贮存蛋白和碳水化合物,这种种子可能不具有活力,但只需用化学方法或通过品种杂交便可获得控制该品质的油料作物[3]。③依据现有酶的结构,利用基因点突变产生新酶,以合成特异性的化学产品。随着人们利用光能进行光合再生产以及植物代谢基因操作手段的积累,进一步扩展转基因植物这种高效、低污染的化学工厂的生产能力是完全可能的。参考文献1PrincenLH,PothfusJA.Developmentofnewcropsforindustrialrawmaterials,1984,61(2:281~2892王幼平,贾勇炯,罗鹏.某些特油植物资源的脂肪酸类型及用途.中国油料,1997,19(2:72~753OhlroggeJB.Designofnewplantproductsengineeringoffattyacidmetabolism.Plantphysiol,1994,104:821~8264GreenAG.Geneticcontrolofpolyunsaturatedfattyacidbiosynthesisinflax(Linumusitatissimumseedoil.Theorapplgenet,1986,72:654~6615MurphyDJ.Modifyingoilseedcropsfornon2edibleproducts.Tibtech,1992,10:84~876SomervilleC,BrowseJ.Plantlipids:Metabolism,MutantsandMembranes.Science,1991,252:80~8719王幼平等:植物脂肪酸代谢工程研究进展29中国油料作物学报1998,20(47StymneS,StobartAK,GladdG.Theroleoftheacyl2CoApoolinthesynthesisofpolyunsaturated182carbinfattyacidsandtriacylglycerolproductioninthemicrosomesofdevelopingsafflowerseeds.Biochim2icaetbiophysicaacta,1983,752:198~2088TopferR,MartiniN,SchellJ.Modificationofplantlipidsynthesis.Science,1995,268:681~6869YadavN,WierzbickiA,KnowltonSetal.In:NMurata,CRSomerville,eds.Biochemistryandmolec2ularbiologyofmembraneandstoragelipidsofplants.Rockville,MD:Americansocietyofplantphysiol2ogists.1993.60~6110KnutzonDS,ThompsonGA,RadkeSEetal.ModificationofBrassicaseedoilbyantisenseexpressionofastearoyl2acylcarrierproteindesaturasegene.ProcnatlacadsciUSA,1992,89:2624~262811HitzWD,YadavNS,ReiferRSetal.In:KaderJCandMazliakPeds.Plantlipidmetabolism.Netherlands:Kluwer,Dordrecht,1995,506~50912PollardMR,AndersonL,FanCetal.Aspecificacyl2ACPthioesteraseimplicatedinmedium2chainfat2tyacidproductioninimmatrecotyledonsofUmbellulariacalifornica.Archivesofbiochemistryandbio2physics,1991,284(2:306~31213周永明.油菜遗传改良研究进展.国外农学—油料作物,1996:1~614PollardMR,StumpfPK.BiosynthesisofC20andC22fattyacidsbydevelopingseedsofLimnanthesal2ba,chainelongationanddesaturation.Plantphysiol,1980,66:649~65215MoffaAS.Plantsaschemicalfactories.Science,1995,268:65916BernerthR,FrentzenM.Utilizationoferucoyl2CoAbyacyltransferasefromdevelopingseedsofBrassi2canapus(L.involvedintriacylglycerolbiosynthesis.Plantscience,1990,67:21~2817FritzPJ,KauffmanJM,RobertsonCAetal.Cocoabutterbiosynthesis,purificationandcharacteriza2tionofasolublesn2glycerol232phosphateacyltransferasefromcocoaseeds.Thejournalofbiologicalchemistry,1986,261(1:194~19918IshizakiO,NishidaI,AgataKetal.CloningandnucleotidesequenceofcDNAfortheplastidglycerol232phosphateacyltransferasefromsquash.EFBSletters,1988,238:424~43019KwanyuenP,WilsonRF.Isolationandpurificationofdiacylglycerolacyltransferasefromgerminationsoybeancotyledons.Biochimicaetbiophysicaacta,1986,877:238~24520LaurentP,HuangAHC.Organanddevelopmentspecificacylcoenzymealysophos2phatidatesinpalmandmeadowfoam.Plantphysiol,1992,99:1711~177521VoelkerTA,DaviesHM.AlterationofthespecificityandregulationoffattyacidsynthesisofEs2cherichiacolibyexpressionofaplantmedium2chainacyl2acylcarrierproteinthioesterase.Journalofbacteriology,1994,176(23:7320~7327热激锻炼对高温胁迫下菊花生理代谢的影响李云,张钢*,杨际双*(河北农业大学园艺学院,河北保定071001摘要:以菊花(Chrysanthemummorifolium品种‘神马’的扦插苗为试验试材,在40℃下对其进行8h的热激锻炼,然后在50℃下分别进行0,1,1.5,2,2.5和4h不同时间的高温胁迫。通过对其相对电导率、丙二醛(MDA、脯氨酸(Pro和可溶性蛋白质含量及过氧化物歧化酶(POD和超氧化物歧化酶(SOD活性的测定,研究了热激锻炼对菊花耐热性的影响。结果表明,热激锻炼的菊花叶片相对电导率相对较小,MDA含量也相对少,而且保持了较高的可溶性蛋白质和Pro含量及POD和SOD活性,说明热激锻炼在一定程度上提高了菊花幼苗的耐热性。关键词:菊花;热激锻炼;高温胁迫;耐热性中图分类号:S682.1EffectsofHeatShockonPhysiologicalActivityofChrysanthemumunderHighTemperatureStressLIYun,ZHANGGang*,YANGJi-shuang*(CollegeofHorticulture,AgriculturalUniversityofHebei,BaodingHebei,071001,ChinaAbstract:Toinvestigatetheeffectsofheatshockontheheattolerance,thecuttingsofchrysanthemum‘JinBa’weretreatedat40℃for8hours,andthenthechangesofelectrolyticleakage,contentofmalondialdehydelevel(MDA,solubleprotein,proline(Proandactivityofsuperoxidedismutase(SODandperoxidase(PODweremeasuredafterhightemperaturestresswithdifferenttimes(1h~4h.TheresultsshowedthattheelectrolyticleakageandthecontentofMDAinleavestreatedwithheatacclimationwerelowerthanthoseofnon-treated,thecontentsofsolubleproteinandProandtheactivitiesofSODandPODkepthigherlevelscomparedwiththoseofcontrols.Theresultsindicatedthattheheattoleranceofchrysanthemumwasimprovedbyheatshock.Keywords:Chrysanthemummorifolium;Heatshock;Hightemperaturestress;Heattolerance.菊花(Chrysanthemummorifolium是原产于我国的菊科菊属宿根性花卉,是世界四大切花之一。我国切花菊的生产部分用于出口,但是由于切花菊大多是秋菊,不耐高温,我国许多地区在春夏之交时温室和塑料大棚内高温危害日益突出,因此夏季切花菊的生产和出口出现断档。热锻炼提高植物耐热性在许多植物上有报道[1,2,3],而未见过热锻炼对菊花耐热性影响的研究报道。本试验以菊花幼苗为研究对象,在热激锻炼后对其进行50℃高温胁迫,通过对热激锻炼后菊花幼苗在热胁迫下生理活性变化规律的研究,将有助于采取相应措施减轻高温对菊花的危害,并通过揭示热激锻炼下菊花生理变化特点及特异性表现,为热激锻炼提高植物抗逆性提供理论依据,并为菊花的耐热性鉴定提供科学简捷的方法。1材料和方法1.1试验材料供试材料为河北宝硕集团提供的菊花品种‘神马’扦插苗(40天,2007年3月18日,在温室中(25℃将扦插苗置于18cm×18cm的塑料钵中,每个塑料钵中栽4棵菊花幼苗。栽植用土为:蛭石:草炭土=1:1,其它按常规管理。1.2热激锻炼和热胁迫处理随机选取生长一致的菊花幼苗置于智能人工气候箱中(PRX-450D-30,宁波海曙赛福试验仪器厂,光照强度3000µmol·cm-2·s-1,相对湿度65%,进行40℃热锻炼8h,然后在50℃高温下分别进行不同时间(0,1,1.5,2,2.5和4h的处理,以未经热锻炼的为对照,随后进行耐热指标的测定。1.3测定指标与方法将扦插苗在50℃下分别进行0,1,1.5,2,2.5和4h的高温胁迫后取出,用于各种指标的测定。1.3.1电导法测膜透性电导率的测定参考Ryyppö等[4]的方法,每个处理取5片叶,用打孔器(直径为0.5cm避开叶脉部分打48个孔,样本切后先用去离子水清洗,再平均置于3个盛有15mL去离子水的试管中,每个试管16片小圆片;装好后用封口膜封口,室温下静置3h,之后用数字电导仪(DDSL-308,上海京科雷磁测定初电导值(C1;然后将试管置于沸水中煮沸20min,组织死亡和电解质释放完全后测定终电导值(C2。相对电导率(REL计算公式:REL=(C1/C21001.3.2MDA、SOD、POD和可溶性蛋白质含量的测定每个处理取5片叶片,随机称取3个重复,每个重复称取0.3g,将样品在冰浴的研钵中研磨,加入1mLpH7.8的磷酸缓冲液转移至离心管中,再加2mLpH7.8的磷酸缓冲液将研钵冲洗干净。在10000×g下离心20min,粗酶液用于MDA、SOD、POD和蛋白质含量的测定。MDA测定参考张宪政[5]的方法;SOD测定参考李柏林和梅慧生的方法[6],根据SOD抑制NBT的光化还原原理测定。POD测定参考李合生[7]的方法采用愈创木酚显色法测定。可溶性蛋白质测定方法参考马斯亮蓝G-250染色法[8]。1.3.3脯氨酸含量的测定每个处理取5片叶片,随机称取3个重复,每个重复称取0.3g。测定参考薛应龙[9]的方法。1.4统计分析根据测定的膜透性数据,计算相对电导率,在Excel中作图。用SPSS11.5(SPSSInc.,Chicago,Il.,U.S.A.软件的One-wayANOVA分析不同时间处理的热锻炼和对照的相对电导率,SOD和POD活性,MDA,蛋白质和Pro含量的平均值差异是否显著。2结果与分析2.1热激锻炼对热胁迫下菊花叶片MDA含量和相对膜透性的影响在50℃胁迫0~4h范围内,热激锻炼的扦插苗叶片中MDA含量变化趋势大体与对照一致,呈现出先上升再下降(0~1.5h,再上升后又下降的趋势(2~4h。但是热激锻炼的MDA含量比对照低,在1和2.5h时最为显著(p<0.05(图1。MDA是膜脂过氧化产物之一,热激锻炼抑制了MDA含量的增大,说明热激锻炼减弱了膜脂的过氧化作用,延缓了高温对细胞结构的破坏,提高了植物体对高温的耐忍性。在50℃胁迫0~4h范围内,热激锻炼的叶片相对电导率始终低于对照。在1,2,2.5和4h热激锻炼的相对电导率与对照的差异都显著(p<0.05(图1。在0~1.5h期间热激锻炼和对照的相对电导率都是先上升后下降,在短暂的时间内机体可能是经历了一个逐渐适应高温环境的过程。1.5h后热激锻炼的叶片相对电导率呈现出先缓慢下降又缓慢上升的趋势,而在此过程中对照则一直缓慢上升,且上升幅度较大。相对电导率的增高,是膜透性增大的缘故,热激锻炼后的扦插苗相对电导率比对照低,说明热激锻炼在一定程度上缓解了菊花幼苗叶片膜损伤程度。2.2热激锻炼对热胁迫下菊花叶片POD和SOD活性的影响在高温胁迫0~4h范围内,热激锻炼的菊花叶片中POD活性先逐渐升高,2.5h后下降,且在整个热胁迫过程中始终高于对照(图2。对照没有明显的POD活性升高过程。这意味着在热胁迫初期,经热激锻炼的菊花幼苗可通过自身调节机制,提高POD酶活性以适应环境胁迫。随着胁迫时间的延长,菊花幼苗自身调节能力己经减弱,内源抗氧化酶系统清除活性氧能力下降。但相对于对照,高温胁迫下热激锻炼处理使细胞内POD保持了较高的活性。热激锻炼的菊花幼苗SOD活性在50℃胁迫过程中变化比较平稳,且在1~2h期间低于对照。热胁迫2h时,对照的叶片SOD活性急剧下降(图2,而热激锻炼的菊花幼苗叶片SOD活性下降幅度较小。2.3热激锻炼对热胁迫夏菊花叶片可溶性蛋白质和Pro含量的影响热激锻炼的菊花幼苗在50℃胁迫0~4.0h期间都具有较高的可溶性蛋白含量,在1~2.5h期间显著高于对照(p<0.05(图3。在整个热胁迫过程中,热激处理和对照的可溶性蛋白含量在0~1h期间都呈现出急剧上升的趋势,可能是植物应急反应,急剧合成热激蛋白的缘故。而在1~4h期间,热激处理和对照的可溶性蛋白含量变化呈现出不同的趋势。热激处理的可溶性蛋白含量在2h时略有降低,但没有达到显著水平(p>0.05,总体来说变化平稳;对照在此期间却出现先下降后上升现象,这可能是因为胁迫的加重使蛋白合成受阻,植物体内可溶性蛋白结构遭到破坏降解,当植物体恢复调节能力时蛋白含量又表现为缓慢上升。在50℃胁迫下,热激锻炼和对照的Pro含量相对于胁迫0h都升高了,但热激锻炼的Pro升高幅度大于对照(图3。脯氨酸与构成蛋白质的其它氨基酸不同,它含有亚氨基。游离脯氨酸能促进蛋白质水合作用,可维持细胞结构、细胞运输和调节渗透压。较高的Pro含量间接降低了热胁迫下细胞电解质的大量外渗,减缓了高温对植物体的伤害,在一定程度上提高了菊花的耐热性。3讨论本实验结果表明,热激锻炼对热胁迫下菊花生理代谢产生了影响,使叶片相对电导率相对较小,MDA含量也相对少,而且保持了较高的可溶性蛋白质和Pro含量及POD和SOD活性,在一定程度上提高了菊花幼苗的耐热性。经过热激锻炼的菊花幼苗在热胁迫4h时细胞膜透性仅相当于对照在热胁迫1.5h时的水平，显著低于对照在热胁迫4h时的细胞膜透性（p<0.05）（图1），并且在热胁迫过程中经过热激锻炼的菊花幼苗膜透性变化比对照平稳，这可能与热胁迫过程中热激锻炼的菊花幼苗维持了较高的SOD和POD活性有关。因为SOD是抗氧化酶系的核心酶，能有效清除超氧阴离子对质膜的攻击；POD能马上清除植物体内积累的H2O2，避免了H2O2形成氧化能力极强的·OH，而·被认为是膜脂过氧化的启动者[10]。较高的SOD和POD活性对细胞起OH到了保护作用，这些可能是热激锻炼提高菊花幼苗耐热性的重要原因。本研究结果与耶兴元[1]等对猕猴桃的研究结果一致，热激锻炼维持了较高的SOD和POD活性。但是，吴国胜等研究大白菜（Brassicacampestrisssp.pekinensis）时发现热激后POD活性下降，SOD活性[11]先提高后下降，与本研究的结果不十分一致。由此可见，不同植物对于热激锻炼的反应有一定差异。热激锻炼处理相对于对照使菊花幼苗在热胁迫过程中维持了较高的可溶性蛋白含量（图3），可能是热激锻炼诱导植物体合成了热激蛋白的结果。有研究表明热激蛋白与细胞的抗热性有关，而细胞抗热与生物膜热稳定性有关，产生的热激蛋白富积到细胞膜组分中，有可能起到了防止生物膜受热破碎的作用[12]。而热激锻炼维持了较高的可溶性蛋白含量，在阻止细胞电解质外渗方面可能起到了更加积极的作用，从而提高了菊花幼苗的耐热性。本研究中热激处理菊花幼苗的可溶性蛋白含量在高温胁迫1h后急剧上升，之后基本没有下降（p>0.05），呈现出比较稳定的状态（图3），这与前人研究的其他植物中无论经过热激锻炼，还是未经热激锻炼的高温胁迫下蛋白质含量均出现先升后降的现象有所不同[2,13,14]。因此，今后热激锻炼对菊花热激蛋白表达的影响有待于进一步研究。参考文献：[1]耶兴元,范宏伟,仝胜利,马锋旺.热激锻炼诱导猕猴桃耐热性研究J.果树学报.2005,22(6:630-633.[2]何亚丽,刘友良,陈权,卞爱华.水杨酸和热锻炼诱导的高羊茅幼苗的耐热性与抗氧化的关系J.植物生理与分子生物学报,2002,28(2:89-95.[3]周人纲,樊志和,李晓芝,王占武,韩炜.热锻炼对小麦叶片细胞膜及有关酶活性的影响J.作物学报,1995,21(5:568-572.[4]RyyppöA,RepoT,VapaavuoriE.DevelopmentoffreezingtoleranceinrootsandshootsofScotspineseedlingsatnonfreezingtemperaturesJ.CanJForRes,1998,28:557-565.[5]张宪政.植物生理学实验技术M.沈阳:辽宁科学技术出版社,1989,310-312.[6]李柏林,梅慧生.燕麦叶片衰老和活性氧代谢的关系J.植物生理学报,1989,15(1:6-12.[7]李合生.植物生理生化实验原理与技术M.北京:高等教育出版社.2000.6[8]WhithamS,Dinesh-kumarSP,ChoiD,HehlR,CoorC,.BakerB.TheproductofthetobaccomosaicvirusresistancegeneN:similaritytotollandtheinterleukin-1receptorJ.Cell,1994,78:1101-1115.[9]薛应龙.植物生理学实验手册M.上海:上海科学技术出版社.1985.[10]蒋明义,荆家海.植物体内羟自由基的产生及其与脂质过氧化作用启动的关系J.植物生理学通讯,1993,29(4:300-305.[11]吴国胜,曹婉红,王永健.细胞膜热稳定性及保护酶和大白菜耐热性关系J.园艺学报,1995,22(4:352-358.[12]刘箭,杨晓贺,吴显荣.菜豆热激蛋白在生物膜上的定位J.植物学报,1995,37(2:87-90.[13]陈培松，郁松林，詹妍妮.茉莉酸和高温锻炼对葡萄幼苗耐热性及其抗氧化酶的影响J.生命科学研究,2006.10（3）238-243.[14]KratschHA,WiseRR.TheultrastructureofchillingstressJ.PlantCellEnviron,2000,23:337-350.本文创新点：热锻炼提高植物耐热性在许多植物上有报道，而未见过热锻炼对菊花耐热性影响的研究报道。本试验以菊花幼苗为研究对象，在热激锻炼后对其进行50℃胁迫，通过对热激锻炼后菊花幼苗在热胁迫下生理活性变化规律的研究，将有助于采取相应措施减轻高温对菊花的危害，并通过揭示热激锻炼下菊花生理变化特点及特异性表现，为热激锻炼提高植物抗逆性提供理论依据，并为菊花的耐热鉴定提供科学简捷的方法。7简报第４６卷第２３期２００１卑１２月讲学屯矗一氧化氮对盐胁迫下小麦叶片氧化损伤的保护效应阮海华沈文飚４叶茂炳徐朗莱南京农业大学理学院．南京２１００９５４联系＾．Ｅｍａｉｌ：ｗｂｓｈｅｎｈ＠ｓｏｈｕｃｏｍ）姗日摘要从叶绿素、ＭＤＡ和质膜相对透性３个方面的受化证实了０ｌ和ＩｍｍｏｌＫＬ的一氧化氪（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ，ＮＯ）供体硝普铀（ｓｏｄｉｕｍｎｉｔｒｏｐｍｓｓｉｄｅ，ＳＮＰ）分别对１５０和３００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣＩ胁迫下的小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖａｒｎＬｊ叶片氧化损伤有明显的缓解燕应ＮＯ能够显著诱导盐胁迫下小麦叶片ＳＯＤ和ＣＡＴ活力的上升，延缇ｏ；一和Ｈ２０２的积累，同时促进抗氧化物质脯氧酸的含量上升，从而减轻盐胁迫下小麦叶片的氧化损伤关键词小麦盐胁迫一氧化氮氧化损伤保护我国有２．００Ｉ×１０７ｈａ盐荒地和６．６７×１０。ｈａ盐渍化耕地．约占可耕地面积的２５％…盐害是目前制约作物产量的主要逆境因素之一，因此提高植物的耐盐性是植物抗逆研究的重要课题已知盐逆境胁迫条件下植物细胞叶绿体和线粒体电子传递中泄露的电子增加．活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）大量产生，并导致细胞内的氧化损伤，引起叶绿素降解、膜结构损伤、蛋白质变性、核酸断裂，甚至细胞死、Ｌ【！Ｉ一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ，ＮＯ）是生物体中一种重要的氧化还原信号分子和毒性分子，也是一种活性氮（ｒｅａｃｔｉｖｅｎｉ”ｏｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＮＳ）在植物体内主要通过一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ．ＮＯＳ．ＥＣ１．１４１３．３９）和硝酸还原酶（ｎｉｔｒａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ．ＮＲ，ＥＣ１．６．６．１／２）催化台成‘１…．以动物为材料的研究表明，ＮＯ对生物体的作用具有双重性一方面，低浓度ＮＯ能迅速清除超氧阴离子（ｏｉ）和脂质自由基（Ｒ‘），阻断包括脂质过氧化在内的ＲＯＳ参与的各种伤害效应，而且能诱导抗氧化酶基因的表达，从而具有保护作用”“；另一方面，高浓度ＮＯ与Ｏ：相互作用生成大量的过氧亚硝酸阴离子（一ＯＯＮＯ），后者质子化再形成具有强氧化性的过氧亚硝酸（ＨＯＯＮＯ），破坏生物大分子的结构与功能，最终具有生物毒性∞Ｊ．Ｂｅｌｉｇｎｉ等人【７１提出ＮＯ对植物体也同样具有双重性，且与植物细胞的生理条件和ＮＯ浓度有关，并进一步证实了外源ＮＯ能缓解马铃薯因喷施敌草快（ｄｉｑｕａｔ）和百草枯（ｐａｒａｑｕａｔ）两种除草剂而引起的ＲＯＳ介导的氧化伤害“１最近．Ｍａｔａ等人”１还发现ＮＯ能够通过诱导小麦的气孔关闭来提高其抗旱性本文报道了外源ＮＯ对盐胁迫下ｗｗｗ．ｓｃ｜ｃｈ｜ｎａ．ｃｏｒｎ小麦叶片氧化损伤的保护作用，并初步研究了相关机理．１材料与方法（ｉ）材料培养与处理小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ）品种为扬麦１５８种子经０．１％ＨｇＣｌ２消毒，２５℃浸种，催芽挑选露白一致的种子用Ｈｏａｇｌａｎｄ溶液进行水培，自然光照，至小麦幼苗长至两叶一心期进行处理处理方式如下：０．Ｈｏａｇｌａｎｄ溶液：１含１５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的Ｈｏａｇｌａｎｄ溶液：２含】５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ及０．１ｍｍｏｌ／ＬＳＮＰ的Ｈｏａｇｌａｎｄ溶液：３．含０Ｉｍｍｏ｜／ＬＳＮＰ的Ｈｏａｇｌａｎｄ溶液；４．含３００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣＩ的Ｈｏａｇｌａｎｄ溶液：５．含３００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ及１ｍｍｏｌ／ＬＳＮＰ的Ｈｏａｇｌａｎｄ溶液；６．含ｌｍｍｏｌ／ＬＳＮＰ的Ｈｏａｇｌａｎｄ溶液．每个处理设３个重复，每天更换１次处理液．在处理后的第０，２，４．６，８天时取叶片进行相关测定（ｉｉ）测定方法．叶绿素、ＭＤＡ和质膜相对透性的测定分别参照Ｂｅｌｉｇｎｉ等人¨０］、许长成等人…’和刘宁等人”２１的方法ＣＡＴ和ＳＯＤ活力测定：０．５ｇ叶片按ｌ：５（质量体积比）加入酶提取液（０．０５ｍｏｌ／ＬｐＨ７．８的磷酸缓冲液．含２％的ＰＶＰ），冰浴研磨匀浆，４℃冷冻离心（１００００ｘｇ，３０ｍｉｎ），上清液即为粗酶液．ＣＡＴ活力测定参照Ｄｕｒｎｅｒ等人［｜”的方法并加以改进，３ｍＬ的反应体系中吉００５ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（ｐＨ７．Ｏ）和１０ｕＬ３０％的Ｈ１０２，最后加入适量的酶液启动反应，反应开始后迅速测定Ａ“ｏ。。值的变化ＳＯＤ活性测定按照Ｆｒｉｄｏｖｉｃｈ等人【１４ｌ的ＮＢＴ光化还原法，以抑制氮蓝四唑（ＮＢＴ）光化还原５０％的酶量为一个酶活力单位（ｕ）．Ｈ２０２含量的测定：参照刘俊等人【１“的Ｔｉ—ＰＡＲ丙９９３万方数据褂掌丘扛第４６卷第２３期２００１年１２，Ｅｌ简ｔｉｔ酮莘取浊测定ＰＯＤ活力的测定：０．５ｇ叶片按ｌ：５（质量体积比）的比例加人酶提取液（００５ｍｏ／／ＬｐＨ８．７的硼酸缓冲液，含２ｍｍｏｌ／Ｌ的亚硫酸氢钠），冰浴研瞎匀浆．４℃冷冻离心【１００００。ｇ．３０ｒａｉｎ）．活力测定咀Ｈａｍｍｅｒｓｃｈｍｉｄ！等人¨“的方法稍加政进，反应体系以愈创木酚（Ｏ．２５％ｊ平口过氧化氢（Ｏ７５％ｊ为底物，适量酶液启动反应．测定４６０１１１１１吸光值的｝升．０：一产生速率测定：参照王爱国等人““的方法．５ｇ叶片加１０ｍＬ０．０６５ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液．研磨匀浆，４１１冷冻离，Ｃ，（５０００ｏｇ．１０ｍｉｎ）１ｍＬ上清液加入０．１ｍＬ１０ｍｍｏｌ／Ｌ羟胺，１５气保温２０ｒａｉｎ后再加入１ｍＬ１７ｍｍｏｌ／Ｌ对氨基苯磺酸和１ｍＬ７ｍｍｏｉ／ＬⅡ一萘酚，２５屯保温２０ｒａｉｎ，正丁醇萃取，测定５３０ＤＥ光吸收．脯氨酸及蛋白质含量测定参照张殿忠等人ｆＪ“和Ｂｒａｄｆｏｒｄ【１９］的方法．２结果与分析２．１ＮＯ对盐胁迫下小麦叶片氧化损伤的保护作用叶绿素含量的变化如图１（ａ）所示结果表明，在正常生长条件下的小麦叶片叶绿素含量变化不大，２４６８ｉ熬圈１ＮＯ对盐胁迫下小麦叶片叶绿素ｆａ）和ＭＤＡ（ｂ）含量变化的影响０。６见材料与方法ｌｉ）９９４０．１和ｌｍｍｏｌ／Ｌ的ＮＯ供体ＳＮＰ也没自明显影响叶绿索的含量．在盐逆境条件下．随着不同浓度ＮａＣＩ处理时间的延长，小志叶片叶绿素含量均表现逐渐下降：而ＮＯ处理能够明显延缓盐胁迫下叶绿素的降解，例如０１和１ｍｍｏｌ／Ｌ的ＮＯ供体ＳＮＰ处理８ｄ时分别将对应盐胁迫处理下的叶绿索含量提高了５６％和９８％与对照相比．ＭＤＡ含量随盐胁迫强度的升高和处理时间的延长而上升，其中在胁迫第８天时．３００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ处理的小麦叶片ＭＤＡ含量比ｌ５０ｍｍｏｔ／ＬＮａＣＩ处理增加了４３％．同时０Ｉ和ｌｍｍｏＩ／ＬＳＮＰ处理对ＭＤＡ含量变化的影响不大．但明显分别缓解了盐胁迫下小麦ＩＩ｝片ＭＤＡ的积累（图１『ｂ）），表明ＮＯ可以减轻由于盐胁迫而造成的膜脂过氧化作用质膜相对透性的变化（图２）基本上也与ＭＤＡ的结果相一致．正常生长条件和不同浓度ＳＮＰ处理对质膜相对透性的影响也不大．而盐胁迫明显提高了质膜相对透性，例如１５０和３００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣＩ处理第２天时使小麦叶片质膜相对透性从１５％ｒ升到３０％和４Ｉ％，到第８天时，质膜相对透性又增加到４８％和９０％：而相应的０ｌ和ｌｍｍｏｌ／ＬＳＮＰ处理！和８ｄ时，则分别将质膜相对透性降低至２１％和３５％以及４０％和５７％．说明ＮＯ处理后使小麦叶片细胞膜的离子渗漏减少，进一步证明了ＮＯ对细胞膜结构的保护作用图２ＮＯ对盐胁迫下小麦叶片质膜相对透性变化的影响Ｏ一６吣材料与方法ｃ１）２．２ＮＯ对盐胁迫下小麦叶片活性氧清除能力的调节ｏ；一产生速率的测定结果表明，正常爿・长条件的小麦叶片的ｏ；一产生速率变化很小，不同浓度ＳＮＰ处理则略为降低了ｏ：的产生相反，盐胁迫处理明ｗ．ｗｉｗｓｃｉｃｈｉｎａ．ＣＯｒｎ莲掣蛔矗掣型蜓如Ｍ如”㈨¨ｏ万方数据简报第４６卷第２３期２００１年１２月讲学屯扛显提高了ｏ：一的产生速率，并在处理的第２天达到最大．而０．１和ｌｍｍｏｌ／ＬＳＮＰ则显著降低了盐胁迫处理下Ｏ：的产生，例如处理２ｄ时的０：一产生速率分别降低了３８％和４５％：以后随着处理时间的延长，ＳＮＰ处理株ｏ：产生速率仍低于相对应的盐胁迫处理（图３ｆａ））．图３（ｂＪ的结果表明，１５０和３００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣＩ胁迫下小麦叶片ＳＯＤ的变化是不同的．１５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ胁迫使小麦叶片ＳＯＤ活力上升，而３００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ则导致ＳＯＤ活力的迅速下降经ＮＯ处理后均明显提高了两种盐胁迫下的ＳＯＤ活力，其中在处理第２天时．０１和ＩｍｍｏｌＪＬＳＮＰ分别将ＳＯＤ的活力提高了２６％和６３％．另一方面，０ｌ和ｌｍｍｏｌ／ＬＳＮＰ也能够略为提高正常生长条件下小麦叶片的ＳＯＤ的活力，例如处理８ｄ时ＳＯＤ活力分别增加了５４％和７－８％．Ｈ：Ｏ：含量的测定结果见图４（ａ）．在正常生长条件下，０１和１ｍｍｏｌ／ＬＳＮＰ对小麦叶片Ｈ２０２的影响相对较小而不同盐浓度处理舌Ｈ：０２的含量随着胁图３ＮＯ对盐胁迫下小麦叶片ｏ：产生速率（ａ）和ＳＯＤ活力（ｂ）变化的影响０－６见材料与方法ｆｉ１Ｗｗｗ．ｓｃＩｃｈｌｎａ．ｃｏｒｎ迫时间和强度的增加而增加，ＳＮＰ处理则明湿缓解丁Ｈ２０！的累积其中Ｉ５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣＩ胁迫处理８ｄ时Ｈ２０２含量从处理开始的６．７Ｕ．ｍｏｌ／ｇＦｗｒ升到２１１ｌ－ｔｍｏｌｌｇＦＷ；而用０】ｍｍｏｌ／ＬＳＮＰ处理则将Ｈ！０２的含量下降到１０．２ｇｍｏｌ／ｇＦＷ；同样１ｍｍｏｌ／ＬＳＮＰ处理８ｄ将３００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣＩ胁迫下的Ｈ！０２含量降低了７２％．弘Ｅ３盱托Ｃｉｉ蜀只姆８天数０２４ｂ王打图４ＮＯ对盐胁迫下小麦叶片Ｈ２０２含量Ｉａ，．ＣＡＴ活力（ｂ）和ＰＯＤ活力（ｃ）变化的影响０～＾见村料与力；圭（ｉ９９５卧０擅。～＾。酊廛。酋．，．曩擅一矗：ｍ霜ｍ㈦单＂如”如”Ⅶ；万方数据讲学屯盘第４６卷第２３期２００１年１２月简报图４的结果还表明，正常生长条件下的小麦叶片Ｃ．町和ＰＯＤ活力均有一定程度的上升．０．】和ＩｍｍｏＬ＂ＬＳＮＰ分别处理６ｄ内ＣＡＴ活力呈下降趋势．以后又开始恢复：而不同浓度的ＳＮＰ对小麦叶片ＰＯＤ活力的影响则相对不大．另一方面，在小麦盐胁迫过程中，ＣＡＴ和ＰＯＤ活力的变化也是不同的．ＣＡＴ活力在两种盐浓度胁迫条件下均随时间的延长呈下降趋势，ＳＮＰ处理则明显提高了ＣＡＴ的活力（图４（ｂ）），例如０．１ｍｍｏｌ／ＬＳＮＰ处理１５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣＩ胁迫下的小麦叶片２ｄ时，将其ＣＡＴ活力提高了５２％：而ｌｍｍｏｌ／ＬＳＮＰ处理使３００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣＩ浓度下的ＣＡＴ活力从１５７６卜升到２】】４Ａ４２帅。。・ｒａｉｎ・ｍｇ叫Ｐｒ．圈４ｆｃ）的结果则表明．从处理开始到第４天时两种盐浓度的ＰＯＤ活力均略为下降，以后又有所上升，而ＳＮＰ处理对其也无明显影响上述结果表明，ＮＯ处理明显提高盐胁迫下Ｈ：０２的清除能力主要是通过对ＣＡＴ活力的调节来实现的．２．３ＮＯ对盐胁迫下小麦叶片脯氨酸含量的影响脯氨酸是一种重要的渗透调节物和抗氧化物质，其含量的变化如表１所示结果发现正常生长条件的小麦叶片脯氨酸含量基本上呈平稳状态．另一方面，小麦叶片的脯氨酸含量在盐胁迫下的累积，随胁迫强度的增加和处理时间的延长而加剧，而ＮＯ能够起进一步的促进作用．例如０．１和１ｍｍｏｌ／ＬＳＮＰ处理分别将１５０和３００ｍｍｏｌ／ｔＮａＣＩ胁迫８ｄ时的脯氨酸含量提高了８５％和１ｌ３％；而在正常的生长条件下，０．１和Ｉｍｍｏ／ｓ＇ＬＳＮＰ略为提高脯氮酸含量，分别为１２％和５％３讨论ＳＮＰ是一种重要的ＮＯ供体，Ｄｅｌｌｅｄｏｎｎｅ等人”…证明０．５ｍｍｏｌ／Ｌ的ＳＮＰ约能产生２．０Ｕｍｏｌ／Ｌ的ＮＯ我们从叶绿素、ＭＤＡ和质膜相对透性３个方面的变化，证实了外琢低浓度ＮＯ对小麦盐胁迫具有明显的缓解作用例如０．１和１ｍｍｏｌ／Ｌ的ＳＮＰ处理明显缓解了盐胁迫下小麦叶片的叶绿素降解，降低了，ＭＤＡ含量累积及质膜相对透性的上升（图ｌ和２）蒋明义等人”“已经证实渗透胁迫下叶绿素的降解主要与活性氧的氧化损伤有关．水分胁迫下活性氧的大量产生还会加剧ＭＤＡ的积累１２２］而质膜相对透性的增加则与脂质过氧化作用呈显著正相关””．因此推测低浓度ＮＯ对小麦叶片盐胁迫氧化损伤的缓解作用可能与其对活性氧代谢的影响有关．我们发现在正常生长条件下．ＮＯ略为降低Ｊ’Ｏ：的产生速率，而盐胁迫下ＮＯ则明显降低了小麦叶片的ｏ：的生成，诱导ＳＯＤ话力的上升，而且Ｏ：含量的变化也基本与ＳＯＤ活力的变化相对应（图３Ｊｒ述结果同以动物为材料的研究也是基本相一致的””Ｃｌａｒｋ等人ⅢＩ推测ＮＯ可Ｌｌ通过直接与血红素铁结合形成铁离子一亚硝酰基复合物来可逆抑制烟草叶片ＣＡＴ的活力；我们也发现在正常生长条件下，ＮＯ处理后小麦叶片ＣＡＴ活力先呈下降趋势，以后又开始恢复．上述研究结果的差异可能与不同植物材料和分布于不同部位的ＣＡＴ同工酶对ＮＯ敏感性差异有关，也不排除ＮＯ作为信号分子诱导小麦叶片中某些ＣＡＴ同工酶基因在一定条件下表达的可能性进一步的研究还表明，盐胁迫下ＮＯ明显延缓小麦叶片Ｈ：Ｏ：的累积主要与其可以提高ＣＡＴ的活力有关（网４）已经知道０：一与Ｈ，０２及ＣＡＴ形成复合物ｌ或与ＣＡＴ直接形成复合物Ⅱ和Ⅲ．而这些ＣＡＴ的钝化形式可以抑制ＣＡＴ的活力Ｊ２５１因此ＮＯ延缓盐胁迫下小麦叶片Ｏ：一的积累对于维持较高的ＣＡＴ活力也是有利的（图３）・ＯＨ是导致叶绿素降解和脂质过氧化的主要因素，而０：和Ｈ，０２可以通过Ｈａｂｅｒ—Ｗｅｉｓｓ和Ｆｅｎｔｏｎ反应导致・ＯＨ的产生，推测ＮＯ通过延缓盐胁迫下小麦叶片０７和Ｈ２０：的积累来降低・ＯＨ的生成．表ｌＮＯ对盐胁迫下小麦叶片晡氨酸（腱・ｇ“）积累的影响”１９９６ａＩ表中数值为３浓重复的平均值ｗｗｗ．ｓｃｌｅｈｌｎａ．ｃｏｍ万方数据简报第４６卷第２３期２００１年１２月讲譬血矗从向缓解小麦叶片盐胁迫的氧化损伤；此外，ＮＯ对植物细胞铁离子水平的调节也会影响Ｆｅｎｔｏｎ反应＂…盐胁迫下植物体内大量积累的脯氨酸除作为渗透调节物质外．还包括在清除ＲＯＳ、提高抗氧化能力、稳定大分子结构、降低细胞酸性以及解除氨毒等方面起重要作用．宗会等人１２７１报道了晡氨酸参与缓解稻苗干旱、盐胁迫的过程与ｃａ“信号系统有关，而ＮＯ信号转导途径也涉及了ｃａ。信使系统口…．我们的实验结果还表明，ＮＯ对小麦盐聃迫氧化损伤所具有的缓解作用也可能与其对脯氨酸的调节有关（表１）由于ＮＯ是植物体内正常代谢的副产物，如果能从调节体内ＮＯＳ和ＮＲ等ＮＯ合成酶的活性人手．适当提高内源ＮＯ的水平，对于有救缓解盐胁迫的氧化伤害将更具有实践意义．参考文献Ｉ王宝山邹琦ＮａＣＩ胁迫对高粱根、叶鞘和叶片液泡膜ＡＴＰ酶和焦磷酸酶括性的髟响植物生理学报，２０００，２６（３）：１８Ｉ—１８８２ＳｃａｎｄａＩｉｏｓＪＧＯｘｙｇｅｎｓｔｒｅｓｓａｎｄｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅｓＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，１９９３，１０１ｆｌｌ：７～１２３ＷｅａｄｅｈｅｎｎｅＤ，ＰｕｇｉｎＡ，ＫｌｅｓｓｉｇＤＦＮｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎａｎｉｍａｌａｎｄｐｌａｎｔｃｅＬＬｓＴｒｅｎｄｓＰｌａｎｔＳｃｉ．２００１６１４）：】７７－ｌ８３４ＹａｍａｓａｋｉＨ，ＳｈａｎｉｏｈｉＳｕＴａｋａｈａｓｈｉＳＡｎａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｐａｈｗａｙｆｏｒｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｐｌａｎｔ：ｎｅｗｆｅａｔｕｒｅｏｆａｎｏｌｄｅｎｚｙｍｅＴｒｅｎｄｓＰｌａｎｔＳｃｉ．１９９９．４（４）：】２８一Ｉ２９５ＫｅｌｍＭ，ＤａｈｍａｎｎＲ，ＷｉｎｋＤＴｈｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｌｓｕｐｅｒｏｘｉｄｃａｓｓａｙｉｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆｔｈｅＮＯ／０；ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎＪＢｉｏｌＣｈｅｍ１９９７．２７２（１５１９９２２—９９３２６ＦｒａｎｋｇＫａｍｐｆｅｒＨＰｏｄｄａＩｖｌｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｏｐｐｅｒ／ｚｉｎｃｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅａｓａｉｉｉｒｒｉｃｏｘｉｄｅ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄｇｅｎｅｉｎｈｕｍａｎｔＨａＣａＴ）ｈｅｒａｉｎｏｃｙｔｅｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｐｒｏｌｉｆｅｍｄｏｎＢｉｏｃｈｅｍＪ２０００３４６（３）：７１９—７２８７ＢｅｌｉｇｎｉＭＶＬａｍａｔｔｉｎａＬＩｓｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｔｏｘｉｃｏｒｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ？ｎｅｎｄｓＰｌａｎｔＳｃｉ，１９９９．４ｆ８Ｊ２９９－３００８ＢｅｌｉｇｎｉＭＶ．ＬａｍａｔｔｉｎａＬＮｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｃｅｌｌｕｌａｒｄａｍａｇｅｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｍｅｔｈｙ］ｖｉｏｌｏｇｅｎｈｅｒｂｉｃｉｄｅｓｉｎｐｏｔａｔｏｐｌａｎｔｓＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅ，１９９９．３（３Ｊ１９９—２０８９ＭａｌｅＣＧ．ＬａｍａｔｔｌｎａＬＮｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｉｎｄｕｃｅｓｓｔｏｍａｔａｌｃｌｏｓｕｒｅａｎｄｅｎｈａｎｃｅｓｔｈｅａｄａｐｔｉｖｅｐｌａｎｔｒｅｓｐｏｎｓｅ，ａｇａｉｎｓｔｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓＰＩＨｎｌＰｈｙｓｉｏｔ、２００Ｉ．１２６｛３ｌ：【１９６－１２０４ｎＢｅｌｉｇｎｉＭＶＬａｍａｒｔｉｎｅＬＮｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｃｏｕｎｔｅｒａｃｔｓｃｙｔｏｔｏｘｉｃｐｒｏｃｅｓｓｅ，ｒｅｅｄｉａｔｅｄｂｙｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅ＾ｉｎｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｓＰｌａｎｔａ．１９９９，２０８（３）＂７—３４４许最成，赵世杰邹琦植物膜脂过氧化水平硫代巴比妥酸铡ｗｗｗ．ｓｃｉｃｈｌｎａ．ｃｏｒｎ定方法中的十扰因素植物４理学通讯．ｉ９９８２９１５｝｛＾Ｉ～｛ｂ３１２刘宁．高乇蘼．良彩霞渗透胁迫下多北黑釜草叶ｒ勺吐辑化物酶恬性和脯氨酸台量【Ｉ砭质膜相对透ｌ生的变化植物７｝理学通讯．２０００、３６（】１：｜Ｉ～１４Ｉ３ＤｕｒｎｅｒＪＫｌｅｓｓｘｇＤＦｇｅｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄｌ＾ａｍｏｄｕｌａｌｏｔｎｌｔｏｂａｃｃｏａｎｄｍａｍｍａｌｉａｎｃａｔａｌｕＫｅＨＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．】９９６．２７ＩＩ，ｔ５Ｉ２８４９２－２８５０２１４ＦｒｉｄｏｖｉｃｈＩＢｅａｕｃｈａｍｐＣＳｕｐｅｍｘｉｄｅｄｉ…［ａｓｅｉｍｐｒ，ｌｖｅｄａｓｓａｙｓａｎｄａ¨ａｓｓａｙａｐｐｌｉｃａｂｌｅｌｏａｃＤｌａｍｉｄｅｇｅｌ、＾ｎａｌＢｌｏｃｈｅｍ１９７｜Ｌ４４ｆ２１：２７６～２８７１５刘俊吕波．豫朗莱一种改进的铡定叶片中Ｈ．Ｏ？禽量的方往生物化学与生物物岬研究进展２０００，２７（５Ｊ：５４８～５５１）１６ＨａｍｍｅｒｓｃｈｍｉｄｔＲＮｕｃｋｌｅｓＥＭＫｕｃＪＡｓ５４）ｔｑａ［ｉｏｎ¨ｒｅｎｈａｎｃｅｄｐｅｒｏｘｉｄａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｎｌｌｈｉｎｄｕｃｅｄｓｙｓｔｅｍｉｃｒｅ‘＿１Ｉ、ｔａｌｔｃｅ¨ｒｃｕｃｕｔｕｂｅｒｔｏｃｏｌｌｅｔｏｔｒｃｈｕｍｌａｇｅｎａｒｉｕｍＰｈｙｓｉｏｌＰ］ａｎｔＰａｔｈ（）１．１９８２２０：７３—８２１７王爱国，罗广华植物的超氧物自由基与羟特厦直的定量关系植物生理学通讯．Ｉ９９１１．（６１５５—５７ｌｇ张殿忠．饪沛洪．赵会贤测定小麦叶片游离晡氡酸的方法植物生理半通讯．１９９０．（４１６２—６５】９ＢｒａｄｆｏｒｄＭＷＡｒａｐｉｄａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏｇｒａｍｑｕａｎｔｉｔｉｅ、ｐｒｏｔｅｉｎｕｓｉｎｇｔｈｅｐｒｍｔｉｐｌｅｏｆｐｒｏｔｅｉｎ‘ｄｙｅｂｉｎｄｉｎｇＡｎａｌＢｉｏｃｈｅｍ、１９１６，７２（Ｉ－２）：２４８～２５９２０ＤｅｌｉｅｄｏｎｎｅＭＸｉａＹＪＤｉ．ｘ．ｏｎＲＡｅｔａ】Ｎｉｌｒｉｃ¨、ｌｄｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｘａｓｉｇｎａｌｉｎｐｌａｎｔｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＮａｔｕｒｅ１９０８３９４１６６９３）。５８５￣５８８２ｌ蒋明义，扬文英徐汀渗透轿迫下水稻幼旧中叶绿素降解的插性氧损伤作用植物学报，２２蒋明殳水丹胁迫下植物体内物学报，１９９９．４】佃１２２９～２３４９９４３６（４）：２８０～２９，ＯＨ的产生与细胞的皇【化损伤植２３羹明．丁忠诫，贺于义．等盐胁迫下太壶和小麦叶叶脂质过氧化伤害与趋微结构变化的黑系植物学ｆ＆１９８９，３１１１ＩＩ．８４１～８４６２４ＣｌａｒｋＤＤｕｍｅｒ』．Ｎ．ＩｖⅢＤＡ，ｅｔａｌＮｌｔｉｌＣｏｘｉｄｅｉｎｈｉｂｉｌｉｏｎＬ、ｆｔｏｂａｃｃｏｃａｔａｌａｓｅａｎｄａｓｃｏｒｂａｔｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔ，ＭｉｃｒｏｂｅＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ、２０００ｌ３『｜２ｉ３８０一【３８４２５ＨｅｒｒｗｉｇＢＳｌｒｅｂＰＦｅｉｅｒａｂｅｎｄＪＬｉｇｈｔｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅｏｆｃａｔａｌａｓｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｉｎｌｅａｖｅｓａｎｄｔｈｅｌ¨ｆｌｕｅｎｃｅｏｆｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇｓｔｒｅｓｓｃｕｎｄｉｔｉｏｎｓＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，１９９２．Ｉｔｉｌｂ４１：１５４７～Ｉ５５３２６ＮａｖａｒｒｅＤＡＷｅｎｄｅｈｅｎｎｅＤＤｕｒｎｅｒＪｅｌⅡｌＮｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｍｏｄｕｔａｔｅｓｔｈｅａｃｔｉｖｉｔ～ｏｒ＂ｔｏｂａｃｃｏａｃｏｎｌｔａｓｅＰｌａｍＰｈｙｓｌｏｌ２０００．１２２（２）５７３—５８２２７宗会．刘蛾娥，郭振Ｅ．等十牛、盐胁迫｝ｌ。ａ【、ｌ手Ｌ｜ＣＰＺ对韬苗脯氨酸累积的影响作物学报２００１．２７（２・ｌ？３～Ｉ７７２８ＤｕｒｎｅｒＪ、ＷｅｎｄｅｈｅｎｎｃＤ．ＫｌｅｓｓｉｇＤＦＤｅｆｅｎｓｅｇｏｎｅｒｅｄｕｃｔｉｏｎｉｎｔｏｂａｃｃｏｂｙｎｉｔｒｉｃ㈨ｉｄｅｃｙｃｌｉｃＧＭＦ，ａｎｄｃｙｃｌｉ。ＡＤＰ－ｒｉｂｏ、ｒＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ１９９８９５『Ｉ７ｌ：１０３２８—１０３ｊ１（２００１０７．２６收稿２０Ｐ１．１０２４收修改稿Ｊ９９７万方数据一氧化氮对盐胁迫下小麦叶片氧化损伤的保护效应阮海华，沈文飚，叶茂炳，徐朗莱作者单位：南京农业大学理学院,刊名：科学通报英文刊名：CHINESESCIENCEBULLETIN年，卷(期：2001,46(23被引用次数：144次参考文献(28条1.王宝山;邹琦NaCl胁迫对高粱根、叶鞘和叶片液泡膜ATP酶和焦磷酸酶活性的影响[期刊论文]-植物生理学报2000(032.ScandaliosJGOxygenstressandsuperoxidedismutases1993(013.WendehenneD;PuginA;KlessigDFNitricoxide:comparativesynthesisandsignalinginanimalandplantcells2001(044.YamasakiH;ShaniohiSY;TakahashiSAnalternativepathwayfornitricoxideproductioninplant:newfeatureofanoldenzyme[外文期刊]1999(045.KelmM;DahmannR;WinkDThenitricoxide/superoxideassay19976.FrankS;K鋗pferH;PoddaMIdentificationofcopper/zincsuperoxidedismutaseasanitricoxide-regulatedgeneinhuman(HaCaTkeratinocytes:implicationsforkeratinocyteproliferation2000(037.BeligniMV;LamattinaLIsnitricoxidetoxicorprotective?[外文期刊]1999(088.BeligniMV;LamattinaLNitricoxideprotectsagainstcellulardamageproducedbymethylviologenherbicidesinpotatoplants1999(039.MataCG;LamattinaLNitricoxideinducesstomatalclosureandenhancestheadaptiveplantresponsesagainstdroughtstress[外文期刊]200110.BeligniMV;LamattinaLNitricoxidecounteractscytotoxicprocessesmediatedbyreactiveoxygenspeciesinplanttissues[外文期刊]1999(311.许长成;赵世杰;邹琦植物膜脂过氧化水平硫代巴比妥酸测定法中的干扰因素1993(0512.刘宁;高玉葆;贾彩霞渗透胁迫下多花黑麦草叶内过氧化物酶活性和脯氨酸含量以及质膜相对透性的变化[期刊论文]-植物生理学通讯2000(0113.DurnerJ;KlessigDFSalicylicacidisamodulatoroftobaccoandmammaliancatalases[外文期刊]1996(4514.FridovichI;BeauchampCSuperoxidedismutase:improvedassaysandanassayapplicabletoacrylamidegels[外文期刊]1971(0215.刘俊;吕波;徐朗莱一种改进的测定叶片中H2O2含量的方法2000(0516.HammerschmidtR;NucklesEM;KucJAssociationofenhancedperoxidaseactivitywithinducedsystemicresistanceofcucumbertocolletotrchumlagenarium[外文期刊]198217.王爱国;罗广华植物的超氧物自由基与羟胺反应的定量关系1990(0618.张殿忠;汪沛洪;赵会贤测定小麦叶片游离脯氨酸的方法1990(0419.BRADFORDMWArapidandsensitivemethodforthequantitationofmicrogramquantitiesproteinusingtheprincipleofprotein-dyebinding1976(1-220.DelledonneM;XiaYJ;DixonRANitricoxidefunctionasasignal