临床免疫学技术第二十二章-过敏原检测

第二十二章过敏原检测1一、超敏反应相关理论知识2基本概念

超敏反应:机体接受某些抗原刺激时，出现生理功能紊乱或组织细胞损伤等异常性免疫应答。3Ⅰ型速发型Ⅱ型细胞溶解型Ⅲ型免疫复合物型Ⅳ型迟发型超敏反应的分型4Ⅰ型超敏反应

5（一）I型超敏反应特点：1.反应发生快,消退也快。2.通常使机体出现功能紊乱,很少发生组织细胞损伤。3.由特异性IgE介导，没有补体参与。4.具有明显个体差异和遗传倾向（多基因遗传病）。6（二）Ⅰ型超敏反应的发生机制（一）致敏阶段:变应原进入机体→产生IgE→和肥大细胞/嗜碱粒细胞表面FｃεRI结合→机体处于致敏状态（二）激发阶段:变应原再次进入机体→与致敏细胞表面IgEFab特异性结合→(受体交联)脱颗粒→释放生物活性介质（三）效应阶段:生物活性介质作用于效应组织和器官局部或全身发生过敏反应7IgEFceRI变应原脱颗粒

炎症反应致敏亲细胞抗体89致敏阶段激发阶段肥大细胞变应原初次进入变应原再次进入B细胞（二）I型超敏反应发生的机制1011（三）IgE介导的过敏性疾病过敏性鼻炎（allergicrhinitis，hayfever）过敏性哮喘（asthma）食物过敏（foodallergy）特应性皮炎（atopicdermatitis）特应性湿疹（eczema）特应症（atopy）特应症:血清IgE的水平高100－1000倍以上，多有家族史。双亲均为患者：后代50%以上，单亲为患者的后代30%左右，而且他们对环境中常见的多种变应原过敏。12过敏性休克

药物过敏性休克血清过敏性休克呼吸道过敏反应过敏性鼻炎过敏性哮喘消化道过敏反应食物过敏皮肤过敏反应特应性皮炎荨麻疹血管性水肿

（三）I型超敏反应常见疾病1314药物食入性变应原15（四）变应原:能选择性诱导机体产生特异性IgE抗体引起过敏反应的抗原性物质。分类:药物：青霉素/磺胺/普鲁卡因/有机碘化物吸入和叮咬注入性:花粉/真菌/尘螨/霉菌/昆虫毒液/动物皮毛和分泌物/装饰材料.食物:蛋白类；坚果类;蔬菜;水果类;食品添加剂和防腐剂.某些酶类物质：半胱氨酸蛋白酶/枯草杆菌蛋白酶16（五）变态反应--症状皮肤：荨麻疹,湿疹，神经性皮炎呼吸系统：支气管哮喘，过敏性鼻炎消化系统：恶心，呕吐，腹痛,腹泻系统性反应:发热,头痛,疲劳,抑郁,昏晕,脉搏加速,极度焦虑,定向障碍严重可导致过敏性休克(血液循环障碍)

17（六）变态反应影响因素接触变应原(早期接触变应原)婴儿:非母乳喂养,被动吸烟，感染空气污染(氧化氮和臭氧，而非烟尘和二氧化硫)健康状况:慢性病,急性病生活状况:温暖潮湿的空气利于屋尘螨和霉菌孢子的生长遗传倾向:直系亲属中有患变态反应的人更易患此病（特应性变态反应）食物:以前未食入的食物和食物添加剂过多的药品消费社会文化方面:例如：工作和生活压力18（七）变态反应--发病率10-20%的德国人曾患一种变态反应，其中最常见的变应原为:草,桦树,艾属植物,屋尘螨,猫发美国每年有3500万人（人群17%）发病，常见的变应原为花粉、螨虫、猫毛、霉菌据世界卫生组织估计，全球约有1亿5千万人患有哮喘，其中50%以上的成人及至少80%的儿童患者均由过敏因素诱发，每年有180，000多人死于哮喘。

19（八）交叉变态反应

(花粉相关的食物性变态反应)草（广），杂草（较少），树（最少）种属之内；不同种属之间交叉反应桦树花粉与其他树花粉(榛子,桤树),水果（苹果，胡萝卜土豆）,坚果艾属与

其他草类，

芹菜，胡萝卜，马铃薯，

香料等乳胶类与香蕉,鳄梨,猕猴桃,马铃薯,栗子豚草与香蕉及瓜类交叉变态反应的原因是花粉和植物性食物有相似的蛋白质成分

20（九）由生物胺引起的伪变态反应

低分子量的复合物（如：组胺）能直接引起变态反应症状

含有组织胺的食物:红酒金枪鱼乳酪Sauerkraut（一种德国泡菜）草莓鳄梨,香蕉,菠萝ASS(阿斯匹林)

21（十）变态反应的诊断非特异性诊断病史，症状，体征，实验室非特异性诊断（嗜酸计数，总IgE）特异性诊断体内实验：皮试点刺试验,划痕试验,斑贴试验等体外:SIgE等22（十一）体外检测的临床适应症皮肤划痕症或者患有严重皮炎,不能做皮试者用抗组胺类或激素类治疗而不能停药者高度过敏患者，做皮试有危险的人对食物过敏的患者，效应器官不在皮肤用于研究一般由IgE参与的疾病和寄生虫病23二、过敏原检测免疫印迹法欧蒙试剂公司24（一）过敏原检测实验原理25筛检测膜条上平行包被了20种吸入性和食入性过敏原。经缓冲液预处理的检测膜条与患者样本进行第一步温育。如果样本阳性，IgE类特异性抗体与相应的过敏原结合。为检测结合的抗体，加入酶标单克隆的抗人IgE抗体（酶结合物）进行第二步温育，然后加入酶底物，发生颜色反应。

免疫印迹试验原理26筛检测时直接将膜条放于特制的长条凹槽反应盘中与标本（一抗）和酶标二抗温育和洗涤，经过底物染色后，根据显色区域可判定抗体的有无及类型。免疫印迹试验原理27（二）过敏原检测操作流程28预处理膜条置温育槽，加入1.0ml缓冲液，室温5分钟血清温育第一次在温育槽中加入1.0ml样本，在摇床上温育60分钟（未稀释）或过夜（1:11稀释，最少12小时）清洗手动，吸去每个温育槽内液体，在摇床上洗涤3次，每次5分钟（1.0ml通用缓冲液）酶结合物温育第二次加入酶结合物1.0ml，摇床60分钟清洗同3底物温育第三次加入底物1.0ml，摇床10分钟终止反应吸去槽内液体，用蒸馏水洗涤3次，每次1分钟结果判定将膜条置模板中，风干后判断结果。

操作流程29（三）过敏原检测结果判定30

类别结果条带特性0阴性，无临床意义未出现条带+低浓度抗过敏原IgE抗体部分临床意义弱条带++中等浓度抗过敏原IgE抗体通常具有临床意义清晰的条带+++高浓度抗过敏原IgE抗体许多病例出现临床症状染色很深的条带31类别（采用软件判定结果浓度：略）结果0未检出特异性抗体1弱特异性抗体无症状2弱特异性抗体有症状3特异性抗体浓度明显，通常出现症状4高浓度特异性抗体，总是出现症状5特异性抗体浓度很高6特异性抗体浓度很高32试验参数

膜上包被有20种不同的变应原

使用未稀释的血清温育1小时或使用1:11稀释的血清过夜温育

试剂可直接使用

从2002年起可用欧蒙公司开发的LINESCAN软件自动判断结果欧蒙印迹法检测吸入性变应原33欧蒙印迹法检测食物性变态反应

食物性变应反应34（四）变态反应的治疗避免接触变应原药物治疗抗组胺药物(抑制组胺结合H1受体)肥大细胞稳定剂(Chromoglicinacid,皮质甾类)可的松复合物(防止炎症造成的损伤)接种抗IgE抗体(抗IgE抗体在IgE结合肥大细胞之前将其中和)免疫疗法(脱敏治疗)

患者接种变应原2-3年，其间接种量逐渐增大。风险：能引起系统性反应

35（五）血清总IgE检测1.检测方法（1）免疫比浊（2）化学发光免疫试验（3）酶联免疫吸附试验362.临床意义---单纯tIgE升高不能作为疾病诊断依据，也不能说明患者属于过敏体质个体。---单纯tIgE正常不排除变态反应疾病。---对于年龄较小的儿童排除寄生虫感染等疾病，tIgE越高，患变态反应疾病可能性越大。（五）血清总IgE检测373.应用评价--免疫比浊敏感性高、特异性强、稳定性好、测定自动化、时间短。--ELISA方便、实用，特异性敏感性均好，无需特殊仪器。--tIgE含量受多种因素影响，分析结果时须建立当地人群的参考区间。（五）血清总IgE检测38（六）特异性IgE检测检测方法（1）放射免疫吸附试验（2）免疫印迹