菌种保藏技术

微生物发酵技术-菌种保藏原理及方法主讲人:XXX菌种保藏原理及方法菌种保藏原理02菌种保藏方法03菌种保藏意义01菌种保藏原理及方法菌种保藏意义：首先是使菌种不致死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转化。菌种保藏原理及方法菌种保藏原理：1.

低营养2.

干燥3.隔氧4.低温降低代谢速率或使细胞处于休眠状态菌种保藏原理及方法菌种保藏方法：1.斜面冰箱保藏法短期、过渡的保藏方法，方法简便，用新鲜斜面接种后，置最适条件下培养到菌体或孢子生长丰满后，放在4℃冰箱保存。原理：低温。保存期：三个月到六个月。适用：普遍适用于各类菌种的传代保藏。菌种保藏原理及方法菌种保藏方法：2.沙土管保藏法国内常采用的一种方法。先将沙与土洗净烘干过筛后，按沙与土的比例为(l－2)∶l混合均匀，分装于小试管中，装料高度约为1厘米左右，121°C间歇灭菌三次，灭菌试验合格后烘干备用。一般沙用80目过筛，土用30－100目过筛。其次，将斜面孢子制成孢子悬浮液接入沙土管中或将斜面孢子刮下直接与沙土混合，于干燥器中用真空泵抽干，放在冰箱内保存，简便有效。原理：低温、干燥、无营养。保存期：约为1-10年。适用：产孢子或芽孢的微生物，如：霉菌、放线菌。菌种保藏原理及方法菌种保藏方法：3.菌丝速冻法通常可采用甘油菌丝速冻法。先配百分之五十甘油溶液，121℃灭菌，再配菌体悬浮液，等体积混合。保藏温度为-20℃，为避免微生物受损致死，需用甘油作为保护剂。原理：低温。保存期：约10年。适用：不产孢子或芽孢的微生物。菌种保藏原理及方法菌种保藏方法：4.石蜡油封存法向培养成熟的菌种斜面上，倒入一层灭过菌的石蜡油，用量要高出斜面一厘米，然后保存在冰箱中。原理：低温、缺氧。保存期：一到两年左右。适用：可通用于不能利用石蜡油作碳源的细菌、霉菌、酵母等微生物的保存。菌种保藏原理及方法菌种保藏方法：5.真空冷冻干燥保藏法基本操作：先将微生物制成悬浮液，再与保护剂混合，然后放在特制的安瓿管内，用低温酒精或干冰，使其迅速冻结，在低温下用真空泵抽干，最后将安瓿管真空熔封，并低温保藏。保护剂一般采用脱脂牛奶或血清。菌种保藏原理及方法菌种保藏方法：5.真空冷冻干燥保藏法原理：在较低的温度下（-15℃），快速将细胞冻结，并且保持细胞完整，然后在真空中使水分升华。微生物的生长和代谢都暂时停止，不易发生变异。保存期：一般5年左右。适用：对各种微生物都适用这种方法虽然需要一定的设备，要求亦比较严格，但由于该方法保藏效果好，所以国内外都已较普遍地应用。菌种保藏原理及方法菌种保藏方法：6.液氮超低温保藏法（1）安瓿管要求加棉塞后灭菌，烘干后备用。（2）菌种准备及分装常用的保护剂为10％甘油。一般安瓿管的装量为0.2-1mL。（3）冻结先把微生物从常温降温到0℃，再以每分钟降低1℃的速度，一直降低到-38℃，然后才把装有菌液的安瓿管放入液氮罐。（4）重新培养室温或35-40℃水浴中迅速解冻，当升温至0℃时即可打开安瓿管。菌种保藏原理及方法菌种保藏方法：6.液氮超低温保藏法原理：超低温。-196℃，菌种的代谢活动已停止，化学作用亦随之消失。保存期：最长，5-15年，甚至大于15年。适用：适用于所有微生物、动物和植物细胞的保存。适用范围最广的保藏法。尤其是一些不产孢子的菌丝体，用其它保藏方法不理想，可用液氮保臧法。菌种保藏原理及方法菌种保藏方法：7.活体保藏法即寄主保藏法。适用于一些难于用常规方法保藏的动植物病原体和病毒。米孢子保存：密封，4℃冰箱3-6个月；真空抽干后密封，保藏6-12个月。适用于霉菌的保藏。思考题