免疫质量管理

免疫质量管理第一页，共七十二页，2022年，8月28日定性检测的性能验证Nanchongcitycenterhospital李金明教授----卫生部临检中心第二页，共七十二页，2022年，8月28日

几个概念：

性能验证诊断试验临床敏感性筛查试验临床特异性确认试验临界点CUT-OFF

第三页，共七十二页，2022年，8月28日筛查试验临床上，筛查方法通常是用于检测整个人群（或人群中的特定部分）中特定指标的情况。如粪便隐血检测梅毒血清学试验（VDRL)等。一般来说，这类试验要求其敏感性要高，以确保真阳性的检出。第四页，共七十二页，2022年，8月28日5预测值

◈阳性预测值（positivepredictivevalue）是指筛检试验阳性者患目标疾病的可能性◈阴性预测值（negativepredictivevalue）

是指筛检试验阴性者不患目标疾病的可能性

第五页，共七十二页，2022年，8月28日6第六页，共七十二页，2022年，8月28日7灵敏度越高，阴性预测值越高特异度越高，阳性预测值越高与受检人群目标疾病患病率（P）密切相关

第七页，共七十二页，2022年，8月28日诊断试验通常用于临床怀疑某种特定疾病或状况是否存在的诊断定性试验。如细菌培养等。诊断试验应具有很好的敏感性和特异性。第八页，共七十二页，2022年，8月28日9

筛检试验

诊断试验

对象不同

健康人或无症状的病人

病人

目的不同

把病人及可疑病人与无病者区分开来

病人与可疑有病但实际无病的人区分开来

要求不同

快速、简便、高灵敏度

科学性、准确性

费用不同

简单、廉价

一般花费较贵

处理不同

阳性者须进一步作诊断试验以便确诊

结果阳性者要随之以治疗

筛检试验与诊断试验的区别第九页，共七十二页，2022年，8月28日确认试验确认试验用于验证筛查试验或者诊断试验结果。该试验必须具有较高的特异性以及高阳性预测值。如螺旋体抗体荧光吸附(FTA-ABS)梅毒血清学试验。第十页，共七十二页，2022年，8月28日临床敏感性在患有明确临床疾病的患者中，其测定阳性或超过正常范围的比率（即出现阳性结果和确定犯病）临床特异性在没有特定临床疾病的患者中，其测定引性或在正常范围的比率第十一页，共七十二页，2022年，8月28日临界点（CUT-OFF)指一个处于试剂检测临界点的样本浓度，同一份样本在多次重复实验中各有50%的几率获得阳性或阴性的结果时该分析物的浓度一旦确定是不变的。试剂或系统说明书提供。区别于试剂盒阳性反应判断值第十二页，共七十二页，2022年，8月28日有反应性（reactivity）无反应性（anergy）阳性（positive)、阴性(negative)是、不是（或有、没有）临床定性检测的报告方式第十三页，共七十二页，2022年，8月28日定性测定系统/试剂性能验证特异性敏感性测定下线重复性（包括CUT-OFF值的重复性）准确性抗干扰能力第十四页，共七十二页，2022年，8月28日性能验证的合格标准第十五页，共七十二页，2022年，8月28日什么时候需性能验证使用新的检测试剂或系统更换检测试剂或系统仪器大修或者搬迁后重新安装第十六页，共七十二页，2022年，8月28日性能验证前的准备熟悉待验证的试剂或系统必要的培训制定质量保证计划确定样本数量及强弱（重复性）确定比较的方法第十七页，共七十二页，2022年，8月28日重复性验证第十八页，共七十二页，2022年，8月28日特异性验证特定病原体以外感染性疾病患者的标本含有干扰物质的样本：RF阳性、异嗜性抗体、溶血、脂血、高胆红素样本结果判断：非特定病原体感染患者样本均为阴性；含一定浓度干扰物质的样本为阴性第十九页，共七十二页，2022年，8月28日准确性验证：方法比较另一种已验证的定性方法金标准方法某种定量方法或临床诊断要求：1.量要足够大；2.稳定3.两种方法同时使用4.持续10—20天第二十页，共七十二页，2022年，8月28日PCR试剂盒的质检(定性测定)性能质检采用血清（样本）盘（Panel）质检：PCR试剂血清（样本）盘由一定数量的原血清阴、阳性样本、2～3份纯化核酸（DNA或RNA或cDNA）样本以及3～5份系列稀释阳性样本所组成。样本总数可定在20份左右。原血清样本用于判断试剂盒对特定病原体核酸检出的特异性、灵敏度和符合率；纯化核酸样本用于判断DNA扩增或逆转录及DNA扩增的有效性；系列稀释阳性样本用于判断试剂的测定下限。第二十一页，共七十二页，2022年，8月28日试剂特异性、灵敏度和符合率计算公式第二十二页，共七十二页，2022年，8月28日试剂特异性、灵敏度和符合率计算公式灵敏度（％）＝(a/a+c)100%特异性（％）＝(d/b+d)100%符合率（％）＝(a+d/a+b+c+d)100%第二十三页，共七十二页，2022年，8月28日24⒈灵敏度与假阴性率◈灵敏度(sensitivity)(真阳性率)

即实际有病而按该筛检标准被正确地判为有病的百分率

◈假阴性率(falsenegativerate)(漏诊率、第二类错误)

即实际有病，但根据该筛检标准被定为非病者的百分率

第二十四页，共七十二页，2022年，8月28日25⒉特异度与假阳性率

◈特异度(specificity)(真阴性率)

实际无病按该诊断标准被正确地判为无病的百分率

◈假阳性率(falsepositiverate)(误诊率、第一类错误)

即实际无病，但根据该诊断标准被定为有病的百分率

第二十五页，共七十二页，2022年，8月28日26r＝1－（假阳性率＋假阴性率）

＝（灵敏度＋特异度）－1

r值范围在0--1之间。r越大，准确性越高，与实际越符合。3.正确诊断指数（约登指数Youden’sindex）第二十六页，共七十二页，2022年，8月28日274.符合率（agreement/consistencyrate）

又称一致率，是筛检试验判定的结果与标准诊断的结果相同的数占总受检人数的比例

第二十七页，共七十二页，2022年，8月28日人员比对持续10-20天测定20批判定：1.人员间阳性和阴性符合率2.人员间室内质控批内变异（弱阳性标本测20孔）3.批间变异第二十八页，共七十二页，2022年，8月28日ISO15189免疫评审体会

江苏省临检中心许斌第二十九页，共七十二页，2022年，8月28日现场评审的关注点检测系统人员能力室内质控实验室环境和设置室间质控检验报告溯源及测量不确定度安全现场试验第三十页，共七十二页，2022年，8月28日个人技术档案数量（足够的人力资源）科室授权及岗位职责清单（科室结构图）培训：1免疫手工项目的培训效果评价是否：人员比对；每半年进行岗位考核。2上岗培训：职业道德培训；基本技能培训；安全培训；实验室管理培训；检验流程培训；质量管理（室间室内质控）培训；咨询服务培训等

人力资源档案第三十一页，共七十二页，2022年，8月28日实验室环境和设置

第三十二页，共七十二页，2022年，8月28日

检验前程序观察申请表的完整性标本唯一标识标本类型量抗凝剂的影响让步检验项目的干扰评价（少血、溶血、抗凝不完全等）按未检、检毕分类储存标本第三十三页，共七十二页，2022年，8月28日检验报告及分析后程序定性项目的报告格式危急值报告（抗HIV)原始数据与LIS输出的一致性结果修改权限检毕常规标本保留方式时间为进一步检验的建议和临床诊断的一致性评价第三十四页，共七十二页，2022年，8月28日咨询服务于检验后程序岗位（检验医师岗位)职责（检验医师职责）内容核查记录第三十五页，共七十二页，2022年，8月28日检测仪器第三十六页，共七十二页，2022年，8月28日检测系统的性能评价定量项目参照临床生化要求定性项目的性能评价内容：

灵敏度、特异性、符合率和总精密度检测限COT-OFF值。

总精密度可以采用室内质控的RCV第三十七页，共七十二页，2022年，8月28日COT-OFF值选择的标准及应用考虑敏感性特异性预测值Galen和Gambino推荐标准阴性来源：X+3S阳性来源：X-3SCOT-OFF值用于：灰区的设定；质控图的控制限确定。第三十八页，共七十二页，2022年，8月28日室内质控室内质控相关SOP文件

（质控要求、失控处理等）质控物基质质控物稳定性质控物数量实验位置和频次浓度范围冰冻血清的融化和冻干品复溶自制品要求质控记录质控分析第三十九页，共七十二页，2022年，8月28日风湿免疫病相关自身抗体的临床应用四川省人民医院风湿免疫科周斌第四十页，共七十二页，2022年，8月28日

风湿性疾病

(Rheumaticdiseases)

是泛指影响骨、关节及其周围软组织、肌肉、滑囊、肌腱、筋膜等的一组疾病，不管其发病原因是感染性的、免疫性的、代谢性的、退化性的等等。近年来随着人们对疾病认识的深化和发展，风湿性疾病的分类日见完善。第四十一页，共七十二页，2022年，8月28日风湿病的病因感染：如莱姆病、淋球菌性关节炎。免疫：如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮。代谢：如痛风。内分泌：如指端肥大症、甲状旁腺功能亢进症。退化：如骨关节炎。地理环境：大骨节病、氟中毒。肿瘤:骨瘤、多发性骨髓瘤。……等。第四十二页，共七十二页，2022年，8月28日流行病学调查（以16岁以上人群为例）类风湿关节炎为0.32%~0.36%强直性脊柱炎约为0.25%系统性红斑狼疮约为0.07%原发性干燥综合征约为0·3%骨性关节炎在50岁以上者可达50%痛风性关节炎也日益增多第四十三页，共七十二页，2022年，8月28日

风湿性疾病与风湿性关节炎风湿性疾病：是指所有风湿性疾病的总称。风湿性关节炎：是指以关节炎为主要表现的风湿热。第四十四页，共七十二页，2022年，8月28日第四十五页，共七十二页，2022年，8月28日第四十六页，共七十二页，2022年，8月28日风湿性疾病的分类一、弥漫性结缔组织病二、与脊柱相关的关节炎三、骨关节炎四、感染所致的风湿性综合症五、伴有风湿性疾病的代谢或内分泌疾病六、肿瘤七、神经血管疾病八、骨及软骨疾病九、关节外疾病十、其它有关节表现的疾病第四十七页，共七十二页，2022年，8月28日弥漫性结缔组织病

1、类风湿关节炎2、幼年类风湿关节炎3、红斑狼疮4、硬皮病5、弥漫性筋膜炎、有或无嗜酸粒细胞血症6、多肌炎7、坏死性血管炎和其他血管病8、干燥综合症9、重叠综合征10、其他第四十八页，共七十二页，2022年，8月28日自身抗体的定义

由于某些不明原因造成免疫系统对自身成分的免疫耐受性减低或破坏，体内出现的针对自身组织成分（细胞内、表面和细胞外成分）为靶抗原的相应抗体；其对自身免疫病诊断及鉴别诊断以及判断疾病愈后具有重要价值。第四十九页，共七十二页，2022年，8月28日自身抗体的临床应用

目前，研究比较清楚的与自身抗体密切相关的疾病有：（1）风湿性疾病：系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合症（SS）、系统性硬化症（SSc）、多发性皮肌炎/肌炎（PM/DM）、混合性结缔组织病（MCTD）、ANCA相关性血管炎、类风湿关节炎（RA）、抗磷脂综合征(APS)等；（2）肾脏疾病：抗肾小球基底膜肾炎、快速进展性肾小球肾炎、肺出血-肾炎综合征等；（3）皮肤病：寻常天疱疮、大泡性类天疱疮、疱疹性皮炎；第五十页，共七十二页，2022年，8月28日自身抗体的临床应用（4）消化及呼吸系统疾病：溃疡性结肠炎、克罗恩病、萎缩性胃炎及恶性贫血、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、结节病、部分肺间质疾病；（5）内分泌病：Grave′s病、桥本氏甲状腺炎、I型糖尿病、自身免疫性Addison′s病、特发性甲状旁腺功能低下、自身免疫性多腺体综合征等；（6）神经肌肉疾病：重症肌无力(MG)、多发性硬化(MS)、格林巴利综合征(GBS)；第五十一页，共七十二页，2022年，8月28日自身抗体的临床应用（7）血液病：自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、免疫性血小板减少性紫癜（ITP）

(8)心脏疾病：风湿性心脏病、心肌病、心肌梗塞后综合征等（9）眼病:自身免疫性眼病（10）不孕症及某些恶性肿瘤等。第五十二页，共七十二页，2022年，8月28日自身抗体的分类针对细胞内抗原抗体：ANA、ds-DNA、ENA、组蛋白抗体、ANCA、AMA、抗核糖体抗体、SMA等针对细胞表面抗原抗体：

细胞表面抗原决定簇的抗体，如HLA-Ab、RBC-Ab、血小板抗体等针对细胞外抗原抗体：RF、TgAb、某些凝血因子抗体、内因子抗体等第五十三页，共七十二页，2022年，8月28日自身免疫病的标记ANA（抗核抗体）提示弥漫性结缔组织病ANCA（抗中性粒细胞胞浆抗体）提示小血管炎ACL（抗心磷脂抗体）提示磷脂抗体综合征第五十四页，共七十二页，2022年，8月28日抗核抗体抗核抗体包含：1抗DNA抗体：(anti-dsDNAanti-ssDNA)2抗组蛋白抗体：(histone:H1H2aH2bH3H4H2a-H2b复合物)抗非组蛋白抗体：抗ENA抗体抗ACA抗体抗核仁抗体：（RNA多聚酶U3RNP原纤维）抗其他细胞成分抗体：（线粒体高尔基体溶酶体细胞角蛋白等）第五十五页，共七十二页，2022年，8月28日特异性较强的自身抗体有助于CTD的诊断和鉴别诊断抗Sm（U族RNA+核蛋白）系统性红斑狼疮抗Scl-70（DNA拓扑异构酶）系统性硬化症抗SSA/SSB（Y族RNA+核蛋白）干燥综合征抗CCP（环瓜氨酸多肽）类风湿关节炎抗AKA（角蛋白微丝蛋白）类风湿关节炎抗Jo-1(组氨酸tRNA合成酶）多发性肌炎第五十六页，共七十二页，2022年，8月28日抗体滴度的高低有判断疾病活动性的作用抗双链DNA(ds-DNA) SLEcANCA（蛋白酶-3）Wegener肉芽肿ACL（含磷脂结构的抗原成分）SLE、抗磷脂抗体综合征

RF (变性IgG分子Fc片段）RASS第五十七页，共七十二页，2022年，8月28日预测疾病的预后及临床亚型抗Jo-1

(55Kd组氨酸tRNA合成酶） 皮肌炎合并肺间质病变抗Scl-70（DNA拓扑异构酶） 系统性硬化弥漫性病变抗rRNP（核糖体上的磷酸蛋白）狼疮脑病第五十八页，共七十二页，2022年，8月28日ANA谱及其临床意义ANA

弥漫性结缔组织病（CTD）抗组蛋白

多种CTD，以SLE及服异烟肼者双链DNA

活动的SLEAIH抗单链DNA无特异性抗核仁

SSc抗着丝点

SSc(CREST型)、pSS(原发性干燥综合征）抗ENA

见后第五十九页，共七十二页，2022年，8月28日抗ENA（盐水可提取核抗原）抗体谱

及其临床意义抗RNP（U1RNP)MCTD、SLE抗Sm(U1-6RNP) SLE抗SSA(Ro) pSS、SLE抗SSB(La) pSS、SLE抗rRNP SLE抗Scl-70 SSc抗Jo-1抗SRP抗Mi-2DM/PM第六十页，共七十二页，2022年，8月28日RA自身抗体谱及临床意义RF:60-70％RA中出现，量与RA活动性及严重性呈正相关。亦在其它CTD出现抗CCP

（抗环瓜氨酸抗体）:

在50％RA中出现关节畸形发生AKA（抗角蛋白抗体）:40％RA阳性APF（抗核周因子）:

在52％RA阳性抗RA33: RA阳性率为35％

以上抗体阳性有助于早期RA及不典型RA的诊断和早期开展治疗，改善预后。第六十一页，共七十二页，2022年，8月28日ANCA谱及其临床意义cANCA

靶抗原：PR-3(蛋白酶3〕pANCA

靶抗原：MPO(髓过氧化酶)

弹性蛋白酶乳铁蛋白其它Wegener肉芽肿其量提示病情活动

MPACSSPAN及其它血管炎炎性肠病等第六十二页，共七十二页，2022年，8月28日第六十三页，共七十二页，2022年，8月28日磷脂抗体谱及其临床意义ACL（抗心磷脂抗体）SLE，原发性磷脂综合征 感染、肿瘤抗2GP1(载脂蛋白) ACL与磷脂结合的辅助因子LAC（狼疮抗凝物） SLE、感染、肿瘤抗磷脂酰丝氨酸抗体抗磷脂酸抗体磷脂抗体是诊断磷脂抗体综合征的必备条件之一，但并非有磷脂抗体患者均属该综合征，必需同时有临床症状（血栓、血小板减少、反复自发性流产）第六十四页，共七十二页，2022年，8月28日其它自身抗体及临床意义AMA（抗线粒体抗体）原发性胆汁性肝硬化 发性干燥综合征抗Mi-2抗体 多发性肌炎皮肌炎SMA（抗平滑