实验一 紫外吸收光谱法测定双组分混合物

实验一紫外吸收光谱法测定双组分混合物实验目的：1.学会用解联立方程组的方法，定量测定吸收曲线相互重叠的二元混合物。2.熟悉紫外光谱仪的操作。二、方法原理：根据郎伯—比耳定律紫外可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区有吸收的单一成分。由两种组分混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度采用相对应的方法来定量测定如当两组分部分重叠时选择适当的波长仍可按测定单一组分的方法处理当两组分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长等方法进行测定。解联立方程组的方法是以郎伯—比耳定律及吸光度的加和性为基础时测定吸收光谱曲线相互重叠的二元组分的一种方法。三、仪器和试剂1．TU-1901紫外-可见吸收光谱仪2．0.020mol/LKMnO4溶液（其中含H2SO40.5mol/L,含KIO42.0g/L3．0.020mol/LK2CrO7溶液（其中含H2SO40.5mol/L,含KIO42.0g/L四、实验步骤1.的0.020mol/LKMnO4置为、0.0008mol/L、0.0012mol/L、0.0016mol/L标准系列溶液（其中的浓度为0.25mol/L2.分别取一定量的0.020mol/LK2CrO7溶液配置成浓度为0.0004mol/L、0.0008mol/L、0.0012mol/L、0.0016mol/L标准系列溶液（其中的浓度为0.25mol/L3.在分光光度计上利用“光谱测量”功能，以1cm英吸收池，绘制上述溶液在700nm～400nm吸收光谱。条件为：狭缝间隔1.0nm，扫描速度中速（操作见“用TU—1901分光光度计进行光谱扫描”4.在TU——1901光光度计上“光度测量”功能“用TU—1901分光光度计进行光度测量”测定上述溶液在两个吸收峰处的吸光度。5.将未知样品溶液稀释10（其中H2SO4的浓度为定未知样品在两个吸收峰处的吸光度。五、结果计算1.由实验步骤4所得吸光度别求得KMnO4和在两个最大吸收峰处的四个摩耳吸收系数。2.由实验步骤4所得吸光度，列出二元一次方程组，求得未知样品KMnO4和K2CrO7的浓度。六、问题与讨论1.今有一光谱曲线相互重叠的三元混合体系，能否用解联立方程式的方法来进行测定？如何测定？实验二有机化合物的紫外吸收曲线的绘制及溶剂效应一、试验目的：1．熟悉利用紫外光谱仪对有机化合物紫外吸收曲线的绘制方法。2．了解溶剂环境对化合物紫外吸收曲线的影响。二、实验原理：每种具有不饱和结构的有机物的紫外吸收曲线各有不同，据此可以进行定性分

析。紫外可见吸收光谱法主要研究的分子跃迁类型为n-π*及π-π*对应的吸收带为R带及K带（共轭双键含苯环结构的物质还具有特有的B带精细结构及E吸收带有机化合物的吸收曲线的影响因素有助色团的影响溶剂的极性，溶液的pH值等，他们会使得曲线的最大吸收峰发生红移或蓝移。三、仪器及试剂：1．仪器：具有扫描功能的紫外可见分光广度计2．样品：丙酮、苯酚3．其他溶剂及药品：纯水、乙醇、正己烷、环己烷、甲醇，氢氧化钠四、实验步骤：1．溶剂对丙酮（n-π*）紫外吸收光谱的影响。在三个25ml具塞比色管中，分别加0.10mL丙酮，分别用水、乙醇、正己烷稀释至刻度，摇匀。1cm英吸收池（加盖）盛装溶液，各自的溶剂做参比，在紫外区做波长扫描得到丙酮在三种溶剂中的紫外吸收光谱观察随着溶剂极性的增强，丙酮的λmax有何变化。2．溶剂极性和pH值对苯酚紫外吸收光谱的影响在四个25ml具塞比色管中，分别加入苯酚的环己烷、甲醇、纯水0.1mol/L氢氧化钠溶液各（浓度均为0.468mol/L用对应溶剂稀释至刻度匀。用1cm石英吸收（加盖装溶液各自的溶剂做参比在紫外区做波长扫描。得到苯酚在四种溶剂中的紫外吸收光谱计算4管λmax处的摩尔吸光系数。五、实验结果将上述两个实验得到的吸收曲线分别打印，并在曲线图上标出各自代表的溶剂。六、问题与讨论：1．当溶剂从非极性转变为极性时，丙酮和苯酚的紫外吸收光谱有何变化？为什么？2．苯酚的紫外吸收曲线在纯水和0.1mol/L氢氧化钠溶液中有什么变化？为什么？3通过以上的实验操作总结在进行紫外-可见光谱法测定时应注意哪些问题？实验三气-质联用仪的结构及使用一、实验目的了解质谱仪的基本结构，熟悉各个组成部分功能二、实验原理质谱数据实际是三维数据保留时间质量数和丰度如果把某一时刻所有离子丰度相加，将得到总离子流图（TIC三、实验试剂和仪器安捷伦GC6890N-5973N型气-质联用仪HP-5MS交联石英柱（30m×250μm×0.25μm）待测化合物样品10μL微量注射器四、实验步骤1．观察质谱仪结构：真空泵、电子电离源、四极杆质量分析器和电子倍增器。2．设定参数：柱温：120℃→270℃；

进样口：250℃；Aux：285℃载气（氦气1mL/min；3．数据采集：用微量注射器准确吸取1.0uL被测样品注入后进样口样品内不同组分经色谱柱分离后进入质谱仪并且进行数据采集。4．数据分析（1）峰纯度检测PeakPurity：（2）信噪比测定SignaltoNoise：五、实验结果请将检测结果添入表中峰号保留时间（）信噪比峰纯度1#2#3#六、思考题1.质谱仪为什么要求真空状态？如何达到真空状态的？实验四全扫描数据采集及定性分析一、实验目的练习并掌握全扫描数据的定性分析二、实验原理全扫描数据采集（SCAN是对所定义的整个质量范围进行采集，主要用于未知样品的分析。三、实验试剂和仪器安捷伦GC6890N-5973N型气-质联用仪HP-5MS交联石英柱（30m×250μm×0.25μm）待测化合物样品10μL微量注射器四、实验步骤1设定SCAN参数：SolventDelay：3min；扫描质量范围：30-350；阈值：60采样点：3；扫描速度：2.33scans/sec；电离电压：70eV2数据采集：用微量注射器准确吸取1.0uL被测样品注入后进样口样品内不同组分经色谱柱分离后进入质谱仪并且进行数据采集。3定性分析：⑴本底扣除：BSB⑵谱库检索：LibraryResearch五、实验结果

请将全扫描采集数据的结果填入表中峰号保留时间（min）名称或结构式1#2#3#六、思考题1.全扫描数据采集原理及适用性。实验五选择离子数据采集及定量分析一、实验目的学习选择离子数据采集方法的建立掌握选择离子数据的定量分析二、实验原理选择离子数据采集（SIM）是指仅监测含有所需要信息的荷质比。由于它只对产生这些质量碎片的化合物进行检测每个离子检测时间相对要长可提高检测灵敏度改善峰型和精密度法广泛应用于痕量分析杂基质和常规定量分析。三、实验试剂和仪器安捷伦GC6890N-5973N型气-质联用仪HP-5MS交联石英柱（30m×250um×0.25um）有机化合物标准溶液（ug/ml）待测有机化合物样品10ul微量进样注射器四、实验步骤1．建立SIM原始数据使用集的数据来确定SIM数据采集实验中要检测的峰并将相关数据填入下表中。化合物名称保留时间分子离子基峰其他离子2．建立SIM数据采集方法⑴设定GC参数柱温：120℃→230℃；进样口：250℃；载气（氦气；Aux：285℃⑵设定SIM参数：分组、选择离子数目3．定量分析⑴设定定量积分参数：⑵建立校正方法：分别用微量注射器准确吸取1.0uL各标准溶液注入进样口进行数据采集建立多浓度水平校正数据库。⑶样品数据采集：用微量注射器准确吸取1.0uL被测样品注入后进样口样品内不同组分经色谱

柱分离后进入质谱仪并且进行数据采集。⑷待测样品定量计算。五、实验结果1将数据结果填入表中。化合物名称定量离子定性离子12样品定量分析结果化合物名称校正曲线方程

定性离子2样品含量（ug/ml）六、思考题1什么是选择离子数据采集？2比较选择离子数据采集与全扫描数据采集异同点。实验六质谱法测定食品样品中农药含量一、实验目的1．掌握离子阱型质谱仪的仪器结构和基本操作；2．掌握利用质谱方法对样品进行定性定量分析的方法。二、实验原理电离后的粒子在一个交变的电磁场中会不断的运动过改变频率和电压可以使不同质荷比的粒子依次通过质谱仪的检测器测器再把其响应信号传输至记录仪上得到质谱图，利用质谱图对某种组分做定性和定量分析。三、仪器结构四、仪器与试剂1．仪器AgilentSL离子阱质谱仪；KDSietific流动注射仪；SGE微量注射器（1000uL2．试剂液氮；磺胺二甲嘧啶标准品；甲醇（色谱纯五、实验步骤质谱条件：离子源电喷射电离源（ESI负离子模式；目标物质荷比m/z=278；帘气40psi；干燥气8L/min；干燥气温度350；进样速度300uL/h。1．定性分析：

在上述色谱条件下，将样品直接进样，得到其对应总离子流图TIC）和质谱图。使用（多反应监测）模式检测农药粒子，观察其强度104以上则可判断样品中含有该种农药。2．定量分析：使用MRM模式将配制好的浓度分别为0.100.2