《禽流感病毒概述13000字》

1禽流感病毒的概述流感病毒是正粘病毒科的一员，其中禽流感病毒（AIV）属于A型流感病毒。它是一种从呼吸系统疾病到严重系统性败血症等多种症状的传染病。这是一种季节性流行病，每年都会发生，并可能伴随着全球流感大流行的爆发。A型流感病毒引起的疾病以不可预测的间隔出现。A型流感病毒每年都会引起重大呼吸道疾病。非特异性感染的免疫反应已被广泛研究。A型流感病毒可以引起流行病，因为它是由候鸟、猪、马和人传播的。因此，与季节性流感相比，发病率和死亡率都有所上升。根野生水禽A型流感病毒可分为H1-H16HA亚型和N1-N9NA亚型。A型流感病毒可以从其自然宿主传播到许多其他物种，主要是家禽、猪和人类。根据宿主的来源，A型流感病毒可分为禽流感、猪流感或其他类型的动物流感病毒。引起家禽小病的病毒称为低致病性禽流感病毒。流感病毒的爆发除了对人体健康造成影响外，还将给家禽业、养猪业和赛马业造成相当大的损失。2禽流感病毒的分子生物学特性2.1禽流感病毒的形态学结构（加结构图片）禽流感是一种单链负链RNA病毒，其包膜直径为80-120nm，通常呈球形。典型的禽流感病毒在电子显微镜下呈球形（见图1-1）。病毒的颗粒结构（见图1-2）可分为三层，最外层为双层类脂膜。禽流感基因可分为8个片段（张月娥，2013），包括PB2基因、PBI基因、PA基因、HA基因、NP基因、NA基因、M基因、NS基因（StephensonI2003）。这8个片段编码10种蛋白质，分别是血凝素、神经氨酸酶、核蛋白、非结构蛋白、基质蛋白和聚合酶复合物（RoizmanB2001）。聚合酶在病毒基因组复制和mRNA转录中起着重要作用，是病毒复制和转录的关键。目前，许多抗流感药物已将该蛋白设计为一个重要的靶点，因为它具有高度的保守性和不易突变性。NP和M的抗原性也是禽流感的分类标准之一。根据它们的不同，流感病毒可分为A型和B型，禽流感病毒属于A型，其中A型流感病毒传播范围广，传染性强，造成的损失最为严重。禽流感病毒对热敏感，可在100度2min或65度30min以上灭活。对乙醇、乙醚、丙酮、氯仿等有机溶剂非常敏感，但对酸不敏感。在强酸条件下仍有生存能力。当暴露在紫外线下时，它很快就失去了传染性，而且它还可以被阳光直射灭活40-4个小时（魏宝之，2013）。在自然条件下，粪便中的病毒具有很强的抵抗力，因为有机化合物能给病毒带来很好的保护（覃伦，2008）。已经证明H9N2可以在不经过中间宿主的情况下感染人。感染后，人们会有轻微的感冒症状，但不会致命。流感病毒一旦进入人体，就会在人体内大量复制，可能导致大规模流感病毒流行。流感病毒可能通过基因重排产生新的流感病毒亚型，严重威胁人类的生命健康。如H7N9可能是近两年流感病毒基因型重排和变异引起的，应引起广泛关注。因此，流感病毒基因的分析在公共卫生领域具有重要意义。图1-1流感病毒电镜下的图片图1-2禽流感病毒的粒子结构2.2禽流感病毒的理化性质流感病毒易受环境稳定性影响，对高温、紫外线和消毒剂敏感。在56℃下加热30分钟，60℃下加热10分钟，65-70℃下加热几分钟，在阳光直射下加热40-48小时可使其失去活性。紫外线照射可破坏禽流感病毒的传染性、神经氨酸酶活性和血凝素活性。病毒颗粒具有膜结构，对丙酮、乙醚、氯仿等有机溶剂高度敏感。普通消毒剂有效，能立即杀灭病毒。常用的消毒剂有复方止苏、福尔马林、季胺盐消毒剂、其他醛和重金属离子。当20%乙醚在4℃下处理2小时时，病毒被分解，缩合增加而不受影响。在自然环境中，特别是在低温潮湿的环境中，禽流感具有抵抗力，通过保护有机物可以长期存活。由于果汁具有蛋白质的保护作用，病毒感染鸡胚非常稳定。病毒可在四周内保存数周，但不影响病毒的传染性以及HA和NA的活性。在-70℃或冻干条件下，可保持其长期感染性。2.3禽流感病毒的基因编码蛋白及其功能2.3.1血凝素（HA）禽流感病毒是A型流感的一个亚型，是一种带有包膜片段的单负链RNA病毒（Husain，2014）。它以同质三聚体的形式存在于病毒表面，也是最为深入的蛋白质。HA蛋白通过蛋白水解酶的作用形成HA1和HA2分子（Filpula,2007;Langleyetal.,2009），这两种酶通过二硫键连接。在病毒感染过程中，HA蛋白被上述方法激活（Kennedyetal.,2004;Xuetal.,2004）。在血凝素裂解位点存在几个连续的碱性氨基酸是确定流感病毒致病性的重要分子标记（Belseretal.,2017）。HA蛋白的糖基化也影响其致病性。此外，HA1分子有决定抗原变异的氨基酸位点，暴露在分子表面。HA蛋白在受体结合、融合、包装结合和致病性方面发挥着重要作用（Bowesetal.,2004）。流感病毒表面的HA蛋白由头和茎组成。头部是流感病毒保护性免疫抗体的主要靶点，因此HA蛋白是疫苗研制的主要靶抗原（Edingeretal.,2014;Zhangetal.,2008）。HA蛋白与宿主细胞表面糖蛋白或糖脂分子末端的唾液酸受体结合，其受体结合位于HA的头部（Samji,2009）。在酸性条件下也可以诱导膜融合。HA蛋白在流感病毒与宿主细胞表面受体结合中起重要作用。在感染的第一步，它可以识别并结合宿主细胞表面的特异性受体分子唾液酸受体分子。通过受体介导的内吞作用，细胞将病毒嵌入内吞作用并进入细胞。在细胞内，由于ph值较低，形成酸性环境。在这种酸性环境中，ha蛋白的结构发生不可逆的变化，导致病毒膜融合并释放vRNP进入细胞。流感病毒感染的前提是，ha蛋白的前体分子ha0被宿主蛋白酶分解为两个亚单位HA1和HA2（Dundonetal.,2010）。因此，流感病毒HA蛋白对宿主细胞蛋白酶裂解的敏感性将对流感病毒的毒力产生重要影响。例如，HPAIV对宿主具有高度致病性（Savul-Al，2000），并且容易引起全身感染，因为HA蛋白裂解位点附近有多个连续的碱性氨基酸，其可被宿主中广泛存在的枯草杆菌蛋白酶样裂解。但在HA蛋白的裂解位点附近只有一种碱性氨基酸，只能被胞外胰蛋白酶识别和裂解。由于蛋白酶只能由宿主肠道和呼吸道细胞分泌，病毒的复制范围有限，只能在肠道和上呼吸道复制。HA蛋白裂解位点附近是否存在糖基化也会影响病毒的致病性。如果糖基化发生在HA蛋白的裂解位点附近，将阻止宿主蛋白酶接近裂解位点，降低蛋白酶对HA蛋白的裂解能力，从而影响致病性（Kawaokaetal.1984）。2.3.2神经氨酸酶（NA）Na蛋白位于病毒颗粒表面，是另一种重要的糖蛋白分子，唾液酸酶。Na蛋白在病毒感染、病毒颗粒萌发和释放过程中起着重要作用。在感染细胞的过程中，Na蛋白可以识别宿主细胞的唾液酸残基，帮助病毒进入细胞。在病毒出芽和释放过程中，Na蛋白能切割细胞和病毒颗粒表面的唾液酸，防止病毒在细胞表面积聚，从而促进病毒颗粒的出芽和释放(Lambetal.,1983)。神经氨酸酶是由茎面积、球形头部和糖蛋白组成的四聚体（Fouchieretal.,2005）。在感染后期，Na可以切割宿主细胞表面的唾液酸和病毒颗粒，使病毒释放并传播感染，但病毒颗粒不会聚集。一些菌株的毒力增加也与钠有关（Itoetal.,1998）。此外，Na的神经氨酸酶活性参与了复制的早期阶段（Kayaketal.,2004）。Na的氨基酸末端胞质区高度保守。缺乏氨基末端细胞质区域会影响病毒的包装、感染和致病性（Air，1981；Kobayashietal，199）。在大多数情况下，HA和Na的长度是相似的。然而，当Na短于HA时，病毒与受体的结合活性增加（Colmanetal.,1987）。此外，Na的长度与病毒复制和致病性密切相关（Hinshawetal.,1983）。发现Na蛋白是一种四聚体蛋白，其酶活性位于Na分子的头部。Na分子头部氨基酸的变化对病毒感染的酶活性和复制特性有重要影响。Na蛋白的茎长与致病性有关。卡斯特罗赫等人。已经证实，Na蛋白干长度的变化可以影响细胞和鸡胚中的病毒复制（castruccietal，1993）。Na基因部分位点氨基酸突变后，Na蛋白的唾液酸酶活性增强，增强了病毒对哺乳动物的适应性（maketal，2010）。此外，寡糖在Na蛋白的功能中起着重要作用。Na蛋白的糖基化可以提高Na蛋白的结构稳定性和酶活性，有助于提高病毒的致病性。在功能上，HA蛋白是识别和结合宿主细胞表面的唾液酸，Na蛋白是切割唾液酸。这两种功能是矛盾的。因此，维持HA和Na的活性平衡是十分必要的，这对病毒的致病性具有重要意义。2.3.3碱性聚合酶1（PB1）PBl基因含有2347个碱基，其中757个氨基酸由第25碱基编码到第2298碱基。PBl蛋白主要负责与宿主的5'端帽结构结合，促进vRNA和mRNA的合成。PB1是流感病毒所有结构蛋白中最保守的（Mostafa，A2016）。它有四个高度保守的基序，这是它的RNA聚合酶功能所必需的。进一步研究表明，306个天冬氨酸、406个甘氨酸、445个天冬氨酸和481个PBl蛋白的赖氨酸是其功能所必需的，突变型流感病毒不会被保存。一些研究人员发现，PBl基因也有一个开放的阅读框，在线粒体中编码PBl-F2蛋白。体外实验表明，该蛋白对流感病毒无必要，但可诱导细胞凋亡（Vidic，J2016）。PB1-f2的具体作用有待进一步研究。2.3.4碱性聚合酶2（PB2）流感病毒聚合酶蛋白由PB2、PB1和PA蛋白组成，分子量分别为96KD,87KD以及85KD。这三种蛋白在细胞质中合成，形成聚合物复合物并运输到细胞核，在核蛋白的帮助下催化病毒基因组RNA的合成。PB2基因含有2347个碱基，包括28-2307个编码区和757个氨基酸。PB2蛋白作为病毒RNA复制的前体，具有识别和切割宿主5'端帽的功能。此外，该蛋白是流感病毒毒力和宿主特异性的重要标志物（Zhang，Y.,Zhang,Q,2012）。例如，Mok等人发现H9N2株PB2蛋白D253N和Q591K突变能显著增强多聚酶活性，诱导人巨噬细胞分泌更多肿瘤坏死因子A（TNF-A），显著增强小鼠的致病性（Mok，C.K2014）。Wang等人还报道了H9N2株PB2蛋白产生M147L，E627K突变后病毒对小鼠的致病性增强（Wand，J2012）。在香港1997人感染H5N1禽流感病毒后，研究人员发现H5N1亚型禽流感病毒可分为两组，具有不同的毒力。基因序列分析表明，两组病毒PB2蛋白中含有627个氨基酸。强毒株627为赖氨酸，弱毒株627为谷氨酸（Hatta，M2001）。subbara等人还发现，人类流感病毒PB2蛋白中的627个氨基酸几乎都是赖氨酸，而禽流感病毒的大多数氨基酸是谷氨酸（subbarao，e.k,1993）。结果表明，PB2蛋白的627个氨基酸是宿主特异性的分子标记。2.3.5酸性聚合酶（PA）PA基因含有2233个碱基，其中716个氨基酸由第25碱基编码到第2175碱基。该蛋白是三种聚合酶亚单位中唯一的酸性蛋白。推测其主要功能是延长MRNA链（nieto）。1992年）。与PB2一样，PA蛋白中多个氨基酸位点的变化也会影响病毒的表型。陈华兰等报道，H5N1流感病毒PA蛋白S224P和N383D突变将显著增强病毒的毒力，PA蛋白224p位点增强H5N1病毒对鸭胚成纤维细胞的生长能力，383d位点增强其多聚酶活性（song，j,2015）。2.3.6核蛋白（NP）NP蛋白由头部、主体和尾部组成。它与RNA具有很强的结合能力（Gieseetal，2017）。NP蛋白在细胞内发生磷酸化修饰，影响病毒的转录和复制，抑制病毒的生长。NP蛋白在感染的不同阶段以不同的形式存在于细胞的不同位置。在早期，NP蛋白几乎存在于细胞核中，但在晚期，以VRNP复合物的形式存在于细胞质中。NP蛋白与蛋白质跨核膜转运有关。在病毒复制中，起着传播载体的作用。病毒感染早期，病毒基因组的转录和复制以VRNP复合物的形式启动。在复制后期，参与病毒的包装和萌芽释放。核蛋白NP可与VRNP复合物的重要组成部分PB2和PB1结合。它能在细胞中磷酸化并影响病毒基因组的转录和复制，从而抑制病毒的生长（HutchinsonE-Cetal，2012）。它在病毒复制过程中起着载体的作用。病毒感染早期，以VRNP复合物的形式进入核起始基因组进行转录和复制。在后期，病毒被输出到细胞质中进行进一步的包装和出芽释放。2.3.7基质蛋白（M）基质蛋白M是最丰富的病毒蛋白，含有252个氨基酸。它位于胶囊的下面，有一个杆状的结构。它主要参与VRNP复合物的核输出过程，在病毒复制中起重要作用。其次，它在病毒的形态发生和包装过程中起着重要的作用，是连接病毒核心蛋白和外壳蛋白的桥梁。通过与补体分子C1qA结合抑制补体信号途径的激活，病毒更容易从宿主免疫系统逃逸（董方元等，2015；刘波等，2013）。M1和M2是甲型流感病毒的两种基质蛋白。M1位于病毒颗粒包膜的下层，是病毒中最高的蛋白质（Kayaketal，2009）。M1在细胞内翻译合成后在细胞核和细胞质间穿梭，对流感病毒的复制有重要影响。M1蛋白作为一种重要的基质蛋白，与病毒的HA蛋白、NA蛋白、M2蛋白胞质区和vRNP复合物有直接的相互作用。利用M1蛋白桥，病毒的内部核心成分与外部包膜蛋白成分相连（Rossmanetal，2011）。M2蛋白是一种多功能蛋白分子，在病毒复制周期的许多方面发挥着重要作用。M2蛋白具有质子通道活性。病毒感染早期，在细胞内吞酸性环境中，质子通道活性被激活，质子进入病毒颗粒，pH值降低，促进了脱壳的发生。抗流感药物设计用于M2蛋白质子通道的功能，如金刚烷类药物，通过抑制M2蛋白质子通道的活性，阻断病毒脱壳的发生，抑制病毒的复制。M1蛋白含有252aa，是病毒蛋白中含量最高的。M1蛋白具有缩聚作用，因此在聚合物的两侧有正负氨基酸残基。M1蛋白与病毒复制、包装和形态发生密切相关（Liuetal，2018）。M1蛋白可在胞质和细胞核间穿梭，参与vRNP复合物的输出。M1蛋白与HA、NA、M2蛋白胞质区及vRNP复合物直接相互作用，在病毒核心组分与外膜蛋白的连接中起着不可或缺的作用。M1蛋白具有RNA结合活性，能与单链RNA结合。此外，它还可以与补体分子c1qa结合，使病毒逃离宿主免疫系统，具有抑制作用。M2蛋白为97AA，无信号皮肤，以同源四聚体形式存在（TakedaM.，2002）。在低pH条件下，M2蛋白的构象结构会发生变化，以保证质子的传导。M2蛋白只有97个氨基酸，但有的是质子通道，有的是质子选择性滤光片，有的是“门”。M2蛋白在病毒的有效复制中起着重要作用。尽管病毒可以在体外生长而不具有这种活性，但如果抑制质子通道的活性，就不会出现M1蛋白和vRNP复合物的分离和脱壳。同时，这种活性会增加反式高尔基体的pH值，使细胞内转运的HA蛋白构象正常。M2蛋白参与包装和芽接，乙酞化和胆固醇结合。2.3.8非结构蛋白（NS）NS蛋白又称干扰素拮抗剂，与病毒的致病性密切相关。它能通过不同的机制抑制干扰素的产生，并能结合自然免疫信号途径的一些关键因素对抗宿主的自然免疫。由于NS蛋白具有核输出信号和核定位信号，它可以在细胞核和细胞质之间运输（吴向伟，2018；黄荣，2014）。NS1蛋白长217-37AA，存在于细胞核中，但在感染后期进入细胞质（CookChampagne，2015）。NS1蛋白具有RNA结合域和效应器结合域，它们之间有一段连接皮肤（Adamsetal，2013）。突变会对细胞内定位和干扰素的产生产生一定的影响。不同亚型NS1蛋白的核信号不同。NS1蛋白最重要的功能是对抗宿主的自然免疫应答。此外，NS1蛋白对细胞凋亡有显著影响，与致病性密切相关（Fanetal，2013；Jianetal，2008）。在最早的阶段，人们对NS2蛋白的存在有错误的认识，认为成熟病毒粒子中没有NS2蛋白。但随着研究的深入，在成熟病毒颗粒中发现了NS2蛋白，但含量较少。在复制后期，可与M1蛋白配合，实现VRNP复合物的输出。NS2有两个核输出信号，其突变可抑制病毒生长，延缓VRNP复合物的输出。NS2蛋白影响病毒复制并调节感染期间mRNA、CRNA和VRNA的积累（Bullidoetal，2001）。NS1和NS2蛋白是流感病毒NS基因编码的非结构蛋白。NS1蛋白是流感病毒的非必需毒力因子，但在流感病毒感染过程中具有多种协同作用。有报道称，NS1蛋白在感染病毒时，通过NS1蛋白缺失或NS1蛋白截短，可诱导细胞产生大量干扰素，从而加速病毒清除（Egorovetal，1998）。结果表明，NS1蛋白通过抑制干扰素和干扰素诱导的蛋清而抑制宿主的免疫应答。近年来，NS1蛋白作为流感病毒毒力的分子决定因子被广泛研究。用NS片段置换法研究了可能导致小鼠死亡的WSN菌株。在1918的西班牙流感病毒NS片段替换后，在组织培养中生长良好，但其毒性在小鼠中减弱（Basteretal，2001），表明NS1蛋白在病毒的致病性中起重要作用。NS2蛋白在流感病毒中少量存在，有助于VRNP在病毒复制周期中从细胞核向细胞质转运，因此又称为核输出蛋白（Patersonetal，2012）。NS2蛋白含有核输出信号。它与CRM1相互作用，介导新一代病毒的VRNP过程。当NS2蛋白核输出信号突变时，会引起功能异常，抑制病毒的生长。此外，在病毒复制过程中，NS2可以调节聚合酶蛋白的酶活性，在禽流感病毒感染后哺乳动物的适应中发挥重要作用。2.4禽流感病毒的复制与遗传变异流感病毒在复制和传播过程中，主要依靠自身的功能蛋白，利用宿主细胞内的原材料合成自身的核酸和蛋白质，从而产生新的子代病毒。病毒是一种严格意义上的细胞内寄生虫，其生命周期需要在细胞内完成。一般来说，RNA病毒的复制可以在细胞质中完成。流感病毒虽然是RNA病毒，但其特点是其复制过程需要在宿主细胞核内进行。需要5’CAP寡核苷酸来指导流感病毒MRNA的转录。该引物来自细胞核中宿主MRNA前体的5'帽状结构（Fechteretal，2003）。流感病毒基因组为单链负链RNA。PB2蛋白能在宿主核内捕获宿主MRNA前体的5’CAP结构，并作为自身转录的启动子启动转录过程。转录的MRNA被输出到细胞质中，其自身的蛋白质在宿主翻译元件的帮助下被翻译。作为复制模板，病毒VRNA需要转录产生CRNA。在这个过程中，转录可以在没有引物的情况下开始，然后使用这个模板合成病毒后代的VRNA（hayetal，1982）。在转录和复制过程中，MRNA和新的VRNA主要在早期合成，然后与新合成的PB2、PB1、PA和NP蛋白结合进入细胞核，形成新的VRNP复合物（谭伟等，2015）。同时，nucleus被导出，并完成了复制的早期阶段。然后，在病毒蛋白的帮助下，它接近细胞膜并开始发芽（Elton，2001；Oneill，1995；Whittakeetal，1996）。在流感病毒的发生和释放过程中，还需要宿主蛋白。一些研究表明RAB11与流感病毒的产生和释放有关。当Rablll的表达减少时，病毒的萌发和释放过程减少（bruceetal，2010）。禽流感病毒的遗传变异是其遗传多样性的主要机制。禽流感病毒的遗传变异包括病原体突变和抗原突变等毒力突变，包括冷适应突变、宿主适应突变和条件毒力突变（李艳兵，2008）。抗原突变是禽流感病毒最常见的自然变化。抗原漂移是由病毒基因组中的点突变引起的。当HA和NA点突变累积时，病毒的氨基酸序列发生变化，只有突变的氨基酸改变抗原决定簇，从而导致抗原突变（MontoA.S，2005）。抗原性的变化可以避免自然感染或疫苗接种引起的免疫防御，也降低了疫苗应用的保护作用，这也是禽流感病毒疫苗需要定期更新的原因。抗原转化是由基因重组引起的。当两种不同的禽流感病毒同时感染宿主细胞时，两种病毒的基因片段可能相互交叉，导致新一代病毒颗粒基因重组，导致病毒抗原性发生很大变化。例如，自1996年发现HSN1的第一个AIV亚型以来，该亚型的NA基因重组产生了HSN2、HSN3、HSN6和HSN8亚型的新组合，导致新亚型的流行（Claesetal，2016）。病毒的毒力往往通过广泛的重组和突变显著增加（Marshalletal，2013年）。同时，将产生多种重组子和基因型，这将促进新病毒株的出现。病毒在不同宿主中的持续传播可能获得跨越物种屏障的能力，从而扩大病毒的宿主范围和物种（Dongetal，2011）。3H9N2亚型禽流感病毒的流行病学3.1H9N2亚型禽流感病毒的宿主范围以及致病性中间宿主在禽流感病毒的传播中起着重要作用。这些中间宿主包括候鸟和鸭子。其中，鸭是贵州省多年来禽流感暴发的主要中间宿主。它们携带流感病毒但不攻击，对禽流感的防控造成严重危害。低致病性禽流感的跨宿主传播一直是国内外研究的热点。研究表明，H9N2禽流感病毒可在人脐静脉内皮细胞中增殖（王伟，2015）。事实证明，鸭H9N2禽流感病毒能在SPF小鼠的肺和气管内自由复制，并能导致部分小鼠死亡（朱光建，2012）。结果表明，H9N2禽流感病毒在气管内的复制和致病性强于在肺内。（许丹文，2016）。从野生水禽中可以分离出大量的病毒血清型。H9N2可能是人禽流感病毒的孵化器。此外，HA和NA基因也有一些变异，可能会感染猪和人（赵东民等人，2016；韩庆功，2006）。孔兴田等，也有研究表明，鸡H9禽流感可直接感染小鼠而无需适应（孔兴田等，2017）。低致病性禽流感病毒正在突破物种之间的屏障，并在鸟类以外的动物中传播。随着H9N2禽流感病毒感染谱的扩大，该病毒不仅感染哺乳动物，也感染人类。禽流感病毒不同株系间基因重组和突变频率很高。抗原漂移和转化可引起抗原变异。病毒表面抗原蛋白的结构易在单一位点发生突变，不仅改变了病毒的免疫特性，而且产生了新的抗原变异。H7N9是我国长江三角洲地区的一种新型重组病毒。2个基因片段来自禽H7N9病毒，6个基因片段来自禽H9N2病毒（刘颖，2016）。当不同的病毒感染同一宿主时，它们之间发生基因重排、互补和表型混合。如果形成这种变异，其传染性和致病性也会发生变化。然而，这种变化往往导致病毒株的出现，从而导致禽流感的爆发。一般来说，禽流感只在鸟类之间传播，不会直接感染哺乳动物和人类。当病毒基因重组或突变后，将获得感染哺乳动物和人类的能力（蒋辉等，2017）。受体结合特性和蛋白质关键位点变异是禽流感最常见的变异模式。2013年以来，我国H7N9禽流感疫情呈现明显的季节性高发态势。发现H9N2禽流感病毒为H10N8和H7N9禽流感病毒感染人类提供了一些内部基因（曾志丽等，2017）。黄平等。利用分子钟和MCMC模型估计H7N9基因结构区的进化速度，我们发现H7N9禽流感病毒进化迅速（TakahashiH，2017）。来自不同宿主源的H9N2禽流感病毒可感染番鸭，对番鸭造成免疫抑制和不同程度的肺病理损伤（张凯，2016）。流感病毒H9N2亚型受体结合特征的关键氨基酸是N158糖基化缺失和Q226L突变（王敏，2016）。禽流感病毒结合受体的变化趋势决定了感染宿主的范围和致病性。一般认为，低致病性禽流感病毒对SAa2,6Ga1受体具有亲和力，表明其感染宿主范围广，毒力强。近年来，研究表明，H9N2亚型禽流感病毒也有这种变异，尽管它不如高致病性HS禽流感病毒明显（TanLiugang，2016）。禽流感病毒与细胞表面特异性受体结合，这只是第一步。它还需要克服核膜屏障，向细胞核输送病毒核酸，并利用宿主细胞进行高效转录和复制（LiuSulietal，2017）。H9N2禽流感病毒通过HA受体结合位点的氨基酸适应性进化，逐渐转移到a-2,6唾液酸受体，使其感染更多的动物。研究发现，不同糖链的有效结合也会使禽流感H9N2株更容易与哺乳动物体内普遍存在的α，2，6-唾液酸受体结合（钟磊，2014）。大多数H9N2亚型禽流感病毒具有改变结合方式的趋势，表明H9N2亚型禽流感病毒已获得人受体的结合能力（王敏，2016）。这一趋势仍在增加（Meietal，2018年，这意味着H9N2禽流感增加了感染哺乳动物或人类的能力，并可能通过基因突变或重新排列引起新的流感大流行。3.2H9N2亚型禽流感病毒在我国的流行情况1999例H9N2感染病例在香港首次报道。1999）近年来，长沙市（刘晓磊，2016），四川省（王明连，2016），云南省（罗春瑞，2017）等地区报告了首例H9N2感染病例。这些报告中的主要症状是发烧、咳嗽、喉咙痛、扁桃体炎等，大多数伴有继发性或混合性肺部感染。这些感染者一般都有与禽类接触史，这也说明低致病性H9N2禽流感可以直接感染人。有研究者报道，我国职业接触人群H9N2禽流感病毒血清阳性率为0.41（Xinlietal，2015），但H9N2报告阳性率普遍较高，特别是在一些沿海地区，H9N2的阳性率高达30%（张梅英等，2009；梁青等，2003），表明H9N2亚型禽流感已在一些地方流行。2013年3月底，中国国家卫生和计划生育委员会宣布在上海和安徽发现一种新型H7N9流感病毒。该病毒在家禽中无症状且致病性较低（TakedaM，2002）。它开始敲响警钟（Chen，2013）。2017年初，通过监测发现H7N9流感病毒有新变化。在HA裂解位点插入多种碱性氨基酸，病毒的致病性也发生变化，成为高致病性H7N9流感病毒（TongS.,ZhuX，2013）。在湖南、河北、河南、天津、陕西、内蒙古等中国地区，高致病性H7N9禽流感暴发给中国水产养殖业造成了巨大的经济损失（高达，2013）。H7N9流感病毒引起了5波人类感染，第5波报告的人类感染人数几乎占人类病例总数的一半。令人担忧的是，第六波中可能会出现更多的人类感染。与H7低致病性禽流感病毒相比，H7高致病性禽流感病毒可导致家禽100%死亡（Cuietal，2016）。短时间内病例的迅速增加令人担忧，并引发了对大流行可能性的担忧（VallirsG.E.，2018）。然而，影响流感病毒流行潜力的主要因素有三个：引起鸟类疾病的能力：鸟类对病毒的免疫力；以及病毒的传播潜力（ZhengW.，2013）。流感的发生与流感病毒的活动周期密切相关。大多数季节性流感发生在一年的冬季和春季。这个季节的气候大多寒冷干燥，有利于病毒的生存和传播。因此，在H7N9流感病毒发生后的几年里，每年都有人报告H7N9禽流感病毒感染人并导致死亡。2016年底至2017年初，是由H7N9引起的第五个流感流行阶段。与前4次流感爆发相比，流感爆发导致更多的感染和死亡，情况更为严重（林丹等，2017）。H7N9流感病毒对哺乳动物有很高的易感性，在哺乳动物体内复制和产生变化。每年流感都会感染H7N9流感病毒。禽流感病毒可能导致下一次流感大流行。首次分离到的H7N9流感病毒在HA裂解位点附近只有一个碱性氨基酸，但在2017年被分离到H7N9流感病毒（Shi，2017），在HA裂解位点附近有多个碱性氨基酸。这是HPAIV的一个分子特征，表明该病毒随着时间的推移对宿主表现出较高的致病性。3.3H9N2亚型禽流感病毒的公共卫生学意义H7N9继续感染人类，在中国经历了五次大流行，构成大流行威胁。H7N9的存活、繁殖、传播甚至变异与LPM密切相关。目前，我国对H7N9病毒的防控主要是通过加强低分子量病毒的规范化管理，定期封市、清洗消毒，限制活禽或跨地区贸易，杀灭活禽，努力阻断H7N9病毒在我国的传播。来源。钟良宁、杨泽峰、吕华坤、钱来曼等研究人员发现，定期关闭市场，清除LPM，可以有效降低人类感染H7N9病毒的风险，适当延长关闭市场的效果更好。疫苗接种和抗流感药物是预防禽流感的快速有效的方法。在我国第一波H7N9流行后，研制了H7N9疫苗，并获得了H7N9灭活疫苗。但其免疫原性和安全性有待进一步鉴定。由于H7N9疫苗抗原性差，需要强免疫或联合佐剂发挥免疫保护作用。然而，目前还没有预防H7N9感染的商用疫苗。支持药物和神经氨酸酶抑制剂仍然是AIV的主要治疗策略。由于低致病性H7N9向高致病性H7N9的进化以及NA中E115V和R289K的突变，人群对NAIs具有抗性。流感病毒抗原同一亚型或多亚型与广谱反应性抗体的反应是目前研究的热点。目前抗H7N9的单克隆抗体主要集中在胶体金试纸和免疫组织化学方面，而具有阻断治疗作用的单克隆抗体相对较少，主要针对HA，关于NA抗体的报道较少。MemoliMJ.等人指出抗NA抗体对降低流感的临床症状和病毒复制时间有显著作用。NA抗体被认为是最有潜力的抗流感单克隆抗体。目前，国内研究者如陈思、尹颖、余岳阳等主要集中在H7N9-NA抗体的诊断上，但国内尚无治疗性NA抗体的报道。JasonR.Wilson等人发现抗H7N9-NA单克隆抗体3C10-3。国外可保护小鼠免受H7N9病毒的致命攻击，降低感染小鼠的发病率和死亡率。3c10-3也是第一株具有治疗活性的N9单克隆抗体(Monoclonalantibody,MAb。随后MarynaC.Eichelberger等人也发现了1E8,2F6,10F4、和11B2四株预防H7N9感染的NA单抗，具有一定的治疗潜能。4H9N2亚型禽流感病毒的研究现状禽流感病毒有多种亚型，其致病性有很大差异。为了解流感病毒株的致病性，通过对8周龄新感染鸡的ICPI,ELDSO,MDT,IVPI的测定，介绍了NDV致病性的检测方法。H9N2亚型禽流感病毒被鉴定为低致病性禽流感病毒（WilsonJR，2000）。H9N2禽流感病毒感染不会造成家禽大规模死亡，但具有发病突然、感染率高、分布广泛等特点。在继发性细菌中，H9N2亚型AIV感染引起严重的呼吸道症状，死亡率为20%～60%。同时，实验数据表明，H9N2亚型禽流感病毒感染可导致肉鸡死亡。免疫抑制对我国养鸡业的发展造成了严重的危害。H9N2亚型禽流感病毒感染降低了产蛋率、受精率和孵化率。如果细菌或其他病毒的第二次感染发生在病毒感染过程中，就会造成一定程度的死亡。应用反向遗传技术对H9N2亚型AIV的HA裂解位点进行突变，经气囊传代10代。结果表明，KSoda的毒力增强，75%的鸡死亡。可以推断，如果H9N2流感病毒在自然条件下分解，可能成为高致病性AIV（wu，etal.2015）。此外，据报道，在实验室条件下，H9N2亚型禽流感病毒对鸭的致病性较低，不会导致鸭死亡（DoyleTM，2017）。尽管鸡细胞中缺乏rig-i，但鸡MAD-5受体也参与了IFN-p的产生，这可以弥补RIG-I在IFN-p产生中的作用（linetal，2012）。结果表明，感染H9N2亚型禽流感病毒的鸡和鸭的细胞免疫功能存在差异（Uddin,S，2017)。低致病性禽流感病毒的死亡率相对较低，但禽流感病例每年都在家禽中发生，并带来严重的经济损失（Grochel，1999）。H9N2亚型禽流感病毒感染率高，死亡率低。但由于该病传播范围广，传播速度快，因此加强对该病的监测十分重要。自1966年以来，在威斯康星州的土耳其发现并报告了一种H9N2亚型禽流感病毒。1994年，广东省首次分为H9N2亚型禽流感病毒。H9N2亚型禽流感病毒在我国其他省份发现（Tarendeau,F，2002）。H9N2亚型禽流感病毒遍布世界各地，其宿主包括多种家禽、野生鸟类和鸟类。第一株H9N2亚型禽流感病毒在美国的土耳其被发现，随后，卡沃卡等研究人员发现H9N2亚型禽流感病毒可以从海鸟中分离出来。它也从加拿大阿尔伯塔省的H9N2亚型禽流感病毒中分离出来。此外，一些研究人员从各种鸟类中分离出H9N2亚型禽流感病毒。例如，熊、麻雀、燕子和白鹭（BullidoR，2001）。据报道，发现有毒鸟类超过90只。其中，火鸡、鸡、鸭是自然条件下最易感染的鸟类。2013年，太阳从狗身上分离出H9N2亚型禽流感病毒，进一步补充了H9N2亚型禽流感病毒的宿主范围。在禽流感病毒的生态系统中，猪被认为是“基因混合容器”。全球流感大流行病毒株是禽流感病毒和猪流感病毒基因重组的结果。1998，从香港猪中分离到两株禽流感病毒，并被证明为H9N2亚型。这是第一次。从哺乳动物中分离出H9N2亚型AIV，并将其分为H9N2亚型AIV。随后，李开彦从福建省猪群中分离出一组H9N2亚型禽流感病毒（李开彦，2004）。这些研究表明H9N2亚型禽流感病毒感染猪。猪与其他亚型禽流感病毒适应或重组后，会发生基因突变，新的禽流感病毒在人体内有效复制，可能引起人类流感。H9N2亚型禽流感病毒广泛存在于水禽中。临床研究表明，H9N2亚型禽流感病毒可从大多数水禽中分离，但部分水禽是无症状隐性感染，但其粪便中所含病毒会污染水体和污染部位。钱仲明等。感染H9N2亚型禽流感病毒。中国东部禽流感爆发地区的家鸭。根据流行病学研究，从1603年的外套膜中分离到126株致病性禽流感病毒（钱仲明，2004），水禽与H9N2亚型AIV之间存在相对稳定的寄生关系。H9N2亚型禽流感病毒可感染多种水禽，在10-15天内很容易发生。鸭、鹅和鸡都可能感染。如果你在病毒感染后继发呼吸道感染，发病率和死亡率会增加。一般来说，治疗慢性呼吸系统疾病的药物对缓解气道没有明显的作用。病程可维持2-4周左右，一般为轻度，死亡高峰，死亡率2%-0%。H9N2亚型禽流感病毒感染水禽或野生禽类后，感染的禽类成为长期携带和灭活病毒的有毒宿主（路易·艾尔，2003年）。H9N2亚型禽流感病毒预计在中国大陆的商品鸡和水禽之间双向传播（BowesV.A，2004）。也就是说，禽流感病毒的宿主谱增加，对人类的威胁也在增加。禽流感病毒的流行病学监测可以追踪禽流感病毒的来源，有助于为禽流感病毒和人类感染的防治提供指导。

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