血液检测技术 ABO血型鉴定

临床输血检验技术ABO血型鉴定教学培训课件学习目标1、常用红细胞悬液的制备方法2、血型鉴定卡式法、试管法原理、结果判断及质量控制。卡式法1现推荐方法，灵敏度高、重复性好、可自动化操作，但成本较高试管法2传统方法，操作简便、设备简单、成本低廉，但影响因素多、灵敏度低ABO血型鉴定试管法包括盐水凝集试验、低离子强度盐水试验、酶试验、凝聚胺试验、抗人球蛋白试验等，本课以盐水凝集试验为例。现目前两种方法均在临床使用中，故均需掌握。一、红细胞悬液制备常用浓度：1%、2%、5%、10%。方法：①抗凝血移去上层血浆待测②洗涤：剩余的红细胞中加5MLNS，混匀，洗涤，弃上清，此步骤重复3次，最后一次上清应清亮并全部弃去。③配制悬液。（根据要求浓度）如5%：洗涤后压积红细胞1滴+19滴NS，混匀3000r/min5min3000r/min5min二、试管法血型鉴定正定型原理：用特异性血型抗体检测被检RBC,在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检RBC膜上有无与特异性血型抗体相对应的抗原，进一步判定血型。正定型方法：加标准血清1滴（-A-B）加红细胞悬液1滴（5%）混匀，离心观察结果-A-B1000r/min1min二、试管法血型鉴定正定型结果判定：试管法：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC浮起，观察有无凝集或溶血，如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为凝集（＋）；如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。注意：若上层为清亮的樱红色，考虑是否溶血二、试管法血型鉴定抗A抗B结果＋—A—＋B＋＋AB——O正定型结果判定：二、试管法血型鉴定二、试管法血型鉴定反定型原理：原理：用标准红细胞检测被检血清（血浆）,在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检血清（血浆）中有无与标准红细胞相对应的抗体，进一步判定血型。二、试管法血型鉴定反定型方法：加待测血清2滴（-A-B）加标准红细胞悬液2滴（5%）混匀，离心观察结果-A-B1000r/min1min（方法同正定型）二、试管法血型鉴定抗A抗B结果＋—A—＋B＋＋AB——O正定型结果判定：结果判定：A(RBC)B(RBC)结果＋—B—＋A＋＋O——AB反定型结果判定：二、试管法血型鉴定注意：1、正反定型一致才能确定结果；2、所用器材必须清洁干净，避免溶血，专型专用；3、控制离心速度和时间，防止假阳性和假阴性；4、抗原抗体比例要适当；5、溶血时，注意结果的判定；6、正反定型结果不一致时，不可轻易判定，需查明原因，可能有技术问题也可能有标本问题。二、试管法血型鉴定检测原理：正定型原理：在事先包被好抗A与抗B的凝胶介质中，加入待测的红细胞悬液，抗原与抗体结合，经低速离心，未与抗体结合的红细胞沉于凝胶底部，而已经结合的凝集的红细胞，位于凝胶上部或悬浮与凝胶中。反定型原理：采用中性微柱凝胶，加入待测的血清与标准红细胞悬液，其余同正定型。三、卡式法血型鉴定卡的结构：凝胶微柱：试管上端（反应池）、柱体（分离池）过滤介质：颗粒直径26-103nm的葡聚糖100凝胶，凝胶间缝隙只允许游离红细胞通过缓冲液：LISS（加或不加抗血清）三、卡式法血型鉴定卡式法方法：正定：将待测红细胞悬液加在凝胶上部反应，离心后观察反定：将待测血清和标准红细胞加在凝胶上部反应，离心后观察阳性：凝集的红细胞，被阻挡在小柱中凝胶的上部或中央阴性：游离的红细胞，被挤过装有过滤介质的小柱，而到达小柱的底部三、卡式法血型鉴定结果判读模式：三、卡式法血型鉴定结果判读模式：三、卡式法血型鉴定卡式微柱凝胶试验就是利用实验中红细胞在凝胶微柱中的移动，来指示肉眼所不能见的红细胞