兽用抗菌药物耐药性风险评估-9-5课件

兽用抗菌药物耐药性风险评估沈建忠吴聪明中国农业大学动物医学院2007年9月甘肃兰州报告内容一、开展耐药性风险评估的必要性二、耐药性风险评估程序和方法三、国外耐药性风险评估开展情况四、我国耐药性风险评估开展情况及未来工作建议养殖业的持续开展离不开抗菌药物!但广泛使用抗菌药物不仅带来了兽药残留问题，也带来了耐药性问题，严重威胁食品平安及人类健康。抗菌药物残留耐药菌耐药基因毒性作用微生物影响?转移扩散风险?一、开展耐药性风险评估的必要性耐药菌和耐药基因的生态网络(WolfgangWitte，Science,vol279，1998)

食品动物住院病人社区居民肉产品粪便动物饲料种植作物粪便选择压力主要宿主污水地表水泥浆食品促生长预防治疗用抗生素预防治疗用抗生素

阿伏帕星在1974被欧盟批准用于促生长剂后，导致猪、鸡体内广泛流行携带vanA基因的耐万古霉素肠球菌，而且耐药肠球菌可通过接触感染养殖人员及屠宰加工人员，也可通过肉品污染传递给社区健康人群。丹麦和英国90年代爆发的耐氟喹诺酮类沙门氏菌DT104感染，调查说明耐药菌分别来源于猪场和奶牛场。Kassenborg等调查美国的氟喹诺酮类耐药弯曲杆菌感染，发现感染者多食用过鸡肉或火鸡肉，且这些鸡场都有使用恩诺沙星的经历。台湾2002年采用分子亚型方法调查人耐氟喹诺酮沙门氏菌感染，发现猪是感染源。进一步调查证明，猪用氟喹诺酮后，其体内病原菌产生了对氟喹诺酮的耐药性。美国Donabedian等2003年从人和超市鸡肉别离到PFGE图谱完全一致的庆大霉素耐药肠球菌，说明耐药菌可通过食物链传递到人。WHO、OIE等国际组织高度关注动物使用抗菌药物对食品平安和人类健康的影响，屡次召开专家讨论会，制定了“关于控制食用动物抗生素耐药性的全球导那么〞、“动物源耐药菌对公共卫生潜在影响的风险评估方法〞等系列文件和指南，倡导对食品动物谨慎使用抗菌药物，建议成员国开展动物源病原菌耐药性监测，开展风险评估。TheMedicalImpactofAntimicrobialUseinFoodAnimals.ReportofaWHOMeeting(Berlin,Germany,13-17October1997)UseofQuinolonesinFoodAnimalsandPotentialImpactonHumanHealth.ReportofaWHOMeeting(Geneva,Switzerland2-5June1998)WHOGlobalPrinciplesfortheContainmentofAntimicrobialResistanceinAnimalsIntendedforFood〔Geneva,Switzerland5-9June2000〕Monitoringantimicrobialusageinfoodanimalsfortheprotectionofhumanhealth.ReportofaWHOconsultation(Oslo,Norway10-13September2001)JointFirstFAO/OIE/WHOExpertWorkshoponNon-humanAntimicrobialUsageandAntimicrobialResistance:Scientificassessment(Geneva,Switzerland1-5December2003)SecondJointFAO/OIE/WHOExpertWorkshoponNon-HumanAntimicrobialUsageandAntimicrobialResistance:Managementoptions(Oslo,Norway15–18March2004)基于预防原那么，欧盟自2006年1月1日起，全面禁止食品动物使用抗生素促生长剂。美国虽不主张食品动物全面禁用抗菌药物添加剂，但也加强了食品动物使用抗菌药物对食品平安和人类健康的风险评估。其对养禽业使用恩诺沙星引起人氟喹诺酮类耐药弯曲杆菌感染的高风评价结果，促使FDA于2000年撤消了恩诺沙星的使用。欧盟、美国、澳大利亚、加拿大、日本等已建立了动物源病原菌耐药性监测国家系统，获得了大量科学数据并进行风险评估。2003-2005年国家食品污染监测网数据显示：我国动物性产品中沙门氏菌耐药率已高达58%，多重耐药达33%，耐10种以上药物的菌株达5.6%。严重威胁人体健康。2005年鸡源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物耐药率已超过80%。近年来人医和兽医耐药性调查结果说明，我国已成为世界上耐药性最严重的国家之一。严重的耐药性局面是否与我国养殖业长期广泛应用抗菌药物尤其是亚治疗剂量抗菌促生长剂有关？动物源耐药菌/耐药基因的广泛流行是否给食品平安和人类健康带来风险？这些问题，均需通过耐药性的广泛调查研究及风险评估来答复。但至今我国尚缺乏完善的动物源病原菌耐药性监测网，没有充分、可靠的数据支撑耐药性风险评估的开展。抗菌药物是我国规模化养殖不可或缺的物质。在缺乏充分风险评估的前题下，我们不可能采取欧盟全面禁用的做法。加强耐药性根底研究，完善监测网络调查动物源病原菌抗菌药物耐药性，建立规程开展兽用抗菌药物风险评估，成为了目前亟待解决的问题。开展耐药性风险评估，权衡风险和利益，科学管理和使用兽用抗菌药物。不仅可促进畜牧业的持续健康开展，而且可保障食品平安和人类健康。二、耐药性风险评估程序和方法风险分析是当前广泛应用的食品平安和公共卫生平安宏观管理方法。风险分析RiskAnalysis风险评估RiskAssessment风险管理RiskManagement风险交流RiskCommunication释放评估ReleaseAssessment暴露评估ExposureAssessment后果评估ConsequenceAssessment兽用抗菌药物耐药性风险评估是利用风险分析技术和原理，对养殖业使用抗菌药物产生耐药性/耐药基因通过食物链暴露于人产生负面影响和潜在不良作用的科学评价。就兽用抗菌药物耐药性风险评估问题，WHO、CAC和OIE屡次召开专家讨论会，并制定了风险分析框架性文件。JointFAO/OIE/WHOExpertWorkshoponNon-HumanAntimicrobialUsageandAntimicrobialResistance:Scientificassessment.Geneva,December1–5,2003

OIEInternationalStandardsonAntimicrobialResistance,2003.GuidelineonRiskAnalysisMethodologyforthePotentialImpactonPublicHealthofAntimicrobialResistantBacteriaofAnimalOrigin.释放评估描述动物应用抗菌药物导致耐药菌/耐药基因出现的概率暴露评估描述人体通过特定途径暴露于耐药菌/耐药基因的概率后果评估描述人体暴露于特定耐药菌/耐药基因后引起不良后果的概率综合风险估计释放、暴露和后果评估结果整合危害鉴定(特征描述)风险评价耐药性风险评估程序危害识别对动物应用特定抗菌药物诱导的耐药菌的识别。对动物应用特定抗菌药物产生耐药因子〔耐药基因及其载体〕的识别。危害识别必须考虑抗菌药物的类型以及病原菌的亚型和血清型。动物饲料肉直接接触医院人类屠宰加工厂加工食品动物羊奶牛猪家禽肉牛残渣伴侣动物植被,作物,水果污水养殖污水及粪便排放动物饮用水人饮用水海洋/湖泊游泳水产河流/溪水企业/家用抗菌药物其他家畜社区-城市-农村野生动物土壤烹饪制作消费储存耐药性流行病学释放暴露后果释放评估——描述动物应用抗菌药物导致耐药菌/耐药基因出现的概率暴露评估——描述人体通过特定途径暴露于耐药菌/耐药基因的概率后果评估——描述人体暴露于特定耐药菌/耐药基因后引起不良后果的概率耐药性给人类健康带来危害的途径及风险评估危害治疗无效抗菌药物治疗耐药菌感染抗菌药物用于动物筛选出耐药菌/耐药基因耐药菌/耐药基因扩散屠宰加工过程耐药菌污染零售食品中存在耐药菌耐药菌被人体摄入的概率释放评估应用抗菌药物的动物种类、数量及其地理分布；应用抗菌药物数量、给药途径和方法；抗菌药物药效学/药动学；应用抗菌药诱导的耐药菌种类；耐药性的产生机制及传递机制；和其他抗菌药的交叉耐药性和/或协同耐药性；对动物、动物性产品以及排泄物中是否存在耐药菌的监控；描述动物应用某种抗菌药物后向特定环境释放耐药性菌或耐药因子的生物学途径，并定性或定量评价全过程发生的概率。可能需要的资料包括：暴露评估描述人暴露于使用某兽用抗菌药物诱导产生的特定耐药菌或耐药因子的生物学途径，并用定性或定量方法对暴露发生的概率进行评估。可能需要的信息：人口学及包括传统和习俗在内的食物消费方式；被耐药菌污染的动物及其产品的流通；被耐药菌污染的动物饲料的流通；动物产品处理过程〔包括屠宰，加工，储存，运输和销售〕中耐药菌的存活能力及重新分布；被耐药菌污染食品中微生物的生长；对动物排泄物处理及人类暴露于排泄物中耐药菌或耐药因子的时机；耐药菌在人体肠道菌群中存活的能力；耐药菌在人与人之间的不自觉传播；耐药菌向其他共生菌转移耐药因子的能力；用于治疗人类疾病的抗菌药种类和数量；人类疾病治疗时间的长短及给药途径、剂量；药物(代谢)动力学因素〔新陈代谢、生物利用率、能否作用于肠丛菌〕。后果评估描述特定人群暴露于特定耐药菌或耐药因子及其暴露后果之间关系的，并对其发生的可能性进行评估。评估可以是定性的，也可以是定量的。

耐药菌/耐药因子及其危害之间的量-效关系；人群易感性的变化；由于抗菌药失效而导致的人体健康效应的变化和发生频率；由于抗菌药可信度的降低而导致了人类医药实践的改变；由于对食品信任度的丧失以及相关联的次要风险，人们的饮食方式发生的改变；与上述后果相关的各种消费；与人类经典抗菌药治疗发生的冲突；可预测的药物未来状况〔与时间相关〕；风险估计患病人数及感染耐药菌株的比例；感染疾病和严重性及病程；感染死亡数量〔每年死亡总数；每年的可能死亡数；随机人口的寿命或对耐药菌暴露较多的特定人群的寿命〕；靶微生物感染病理学的重要变化；在人体内观察到的耐药性水平；其他抗菌素治疗的缺乏情况；对于不同风险效应的权重加的某些随机的影响范围〔例如：疾病和就医〕；三、国外耐药性风险评估开展情况欧盟：Guidelineonpre-authorizationstudiestoassessthepotentialforresistanceresultingfromuseofantimicrobialveterinarymedicinalproductsEMEA/CVMP/244/01,EuropeanAgencyfortheEvaluationofMedicinalProducts日本：GuidelinefortheRiskAssessmentMethodologyfortheImpactonFoodSafetybytheAntimicrobialResistantOrganismsDerivedfromFoodAnimals.Japan,FoodSafetyCommission,September30th,2004

澳大利亚：Part10ofVeterinaryRequirementSeries:SubmissiontoWorkingPartyonAntibiotics,NationalRegistrationAuthorityforAgriculturalandVeterinaryChemicals.June2000美国：Guidanceforindustry#152EvaluatingtheSafetyofAntimicrobialNewAnimalDrugswithRegardtoTheirMicrobiologicalEffectsonBacteriaofHumanHealthConcern.U.S.DHHS,FDA,CVMOctober30,2003加拿大：GuidanceforIndustryPreparationofVeterinaryNewDrugSubmissions.VeterinaryDrugsDirectorateHealthCanada.March2007.已制定耐药性风险评估规程或指南的国家Guidance152CVMP644Part10FSCGuideline全球耐药性风险评估OIE已开展的针对特定病原菌耐药性风险评估的抗菌药物阿伏帕星〔avoparcin〕-肠球菌〔Enterococcus〕(欧盟，肯定性结果〕氟喹诺酮类〔fluoroquinolone〕-弯曲菌〔Campylobacter〕〔美国，肯定性结果〕链阳菌素类〔Streptogramin〕-屎肠球菌〔美国，否认性结果〕大环内酯类〔Macrolides〕-弯曲菌和肠球菌〔美国，否认性结果〕四、我国耐药性风险评估开展情况及未来工作建议兴旺国家兽用抗菌药物耐药性风险评估方兴未艾，国内这方面的研究刚刚起步。近几年在国家自然科学基金、国家科技攻关方案、国家科技支撑方案资助下，中国农业大学、中国兽药监察所、华南农业大学、解放军农牧大学、四川农业大学等多家单位在耐药分子机制、耐药菌/耐药基因流行病学等方面开展了广泛研究，为耐药性风险评估工作的开展奠定了一定的根底。不同年代动物源大肠杆菌耐药性的调查

70年代（63株）80年代（28株）90年代（69株）2000年（36株）青霉素类氨苄西林（AMP）19.0%25.0%60.9%52.8%阿莫西林（AMO）19.0%25.0%58.0%55.6%头孢菌素类头孢氨苄（CX）0.0%0.0%0.0%-头孢呋辛（CXM）0.0%0.0%0.0%-头孢曲松（CRO）0.0%0.0%0.0%0.0%头孢噻呋（EFT）0.0%0.0%2.9%13.9%四环素类四环素（TET）63.5%57.1%85.5%97.2%多西环素（DOX）61.9%57.1%66.7%-土霉素（OYX）63.5%57.1%88.4%-氨基糖苷类链霉素（STP）9.5%35.7%62.3%61.1%庆大霉素（GEM）0.0%21.4%36.2%19.4%卡那霉素（KAN）6.3%17.9%29.0%25.0%安普霉素（APR）0.0%0.0%0.0%-氯霉素类氯霉素（CHL）39.7%28.6%55.1%44.4%氟本尼考（FFN）0.0%0.0%1.4%2.8%氟喹诺酮类环丙沙星（CIP）0.0%0.0%7.2%44.4%诺氟沙星（NOR）0.0%0.0%7.2%41.7%氧氟沙星（OFL）0.0%0.0%10.1%44.4%磺胺类磺胺异恶唑（SMZ）57.1%50.0%81.2%77.8%甲氧苄啶（WD）11.1%14.3%75.4%-

不同年代大肠杆菌耐药率的变化趋势动物源病原菌耐药流行病学研究不同年代大肠杆菌多重耐药的变化趋势年份耐药谱菌株百分比%70年代TET15.9TETSMZ19.0TETSMZCHL11.1TETSMZCHLAMP9.5其它15.980年代TET10.7TETSMZ14.3TETSMZSTP7.1TETSMZCHLAMP7.1TETSMZCHLAMPGEN7.1其它28.590年代TET5.8TETSMZ10.1TETSMZSTP/CHL/AMP17.4AMPTETSMZSTP/CHL11.6AMPTETSMZSTPGEN/CHL23.8AMPTETSMZSTPCHLCIP5.8其它19.52000年TET5.6TETSMZ8.3TETSMZSTP/GEN11.1TETSMZSTPAMP16.7AMPTETSMZCIPSTP/CHL27.8AMPTETSMZSTPCHLGEN/CIP13.9AMPTETSMZSTPCHLGENCIP8.3其它5.6

不同年代大肠杆菌耐药谱CIP(环丙沙星)；NOR(诺氟沙星)；LMF(罗美沙星)；AMP(氨苄西林)；AMO(阿莫西林)；NAL(萘啶酸)；CEF(头孢噻吩)；TET(四环素)；CRO(头孢曲松)；STP(链霉素)；KAN(卡那霉素)；AMK(阿米卡星)；GEN(庆大霉素)；EFX(恩诺沙星)；CHL(氯霉素)；FFN(氟苯尼考)；OFL(氧氟沙星)；SXT(复方新诺明)；SMZ(磺胺异甲基恶唑)；DAN(达氟沙星)；DOX(多西环素)；LOM(洛美沙星)；CFZ(头孢唑林)；OXY(土霉素)；COL(多黏菌素)；SD(磺胺嘧啶)；SMD(磺胺对甲氧嘧啶)。我国局部地区别离动物源大肠杆菌的耐药性监测抗菌药物北京（42株）河南（108株）抗菌药物内蒙（58株）R%I%S%R%I%S%R%I%S%AMP11.97.181.075.02.822.2AMP77.593.4518.97AMO9.519.071.475.02.822.2AMO65.5210.3424.13AMK0.02.497.62.80.097.2AMK1.72098.28CHL7.10.090.549.18.342.6CHL22.411.7275.86CIP0.00.0100.023.15.671.3CIP22.413.4574.14CEF4.87.188.19.315.775.0CEF6.9093.1CRO0.016.783.34.63.791.7DAN22.41077.59EFX2.411.985.727.823.139.8DOX46.5512.0741.4FFN4.89.583.335.29.359.3FFN5.17—94.83GEN2.40.097.625.97.466.7GEN18.97081.03KAN4.814.381.030.68.361.1KAN17.24089.66LMF4.84.890.028.717.653.7LOM22.416.970.69NAL0.00.0100.059.320.420.4OXY55.178.6236.2NOR0.02.495.224.11.974.1NOR22.41077.59OFL0.00.0100.022.21.975.9OFL22.41077.59STP16.711.947.655.616.727.8STP48.28—51.27SMZ11.90.088.186.10.013.9CFZ56.913.7929.31SXT16.70.083.384.30.913.0COL1.72—98.28TET73.82.423.895.40.93.7SD100—0SMD100—0CIP(环丙沙星)；NOR(诺氟沙星)；LMF(罗美沙星)；AMP(氨苄西林)；AMO(阿莫西林)；NAL(萘啶酸)；CEF(头孢噻吩)；TET(四环素)；CRO(头孢曲松)；STP(链霉素)；KAN(卡那霉素)；AMK(阿米卡星)；GEN(庆大霉素)；EFX(恩诺沙星)；CHL(氯霉素)；FFN(氟苯尼考)；OFL(氧氟沙星)；SXT(复方新诺明)；SMZ(磺胺异甲基恶唑)；DAN(达氟沙星)；DOX(多西环素)；LOM(洛美沙星)；CFZ(头孢唑林)；OXY(土霉素)；COL(多黏菌素)；SD(磺胺嘧啶)；SMD(磺胺对甲氧嘧啶)。我国局部地区离大肠杆菌体外药敏试验结果北京、河南地区大肠杆菌多重耐药情况内蒙呼和浩特地区乳源大肠杆菌多重耐药情况抗菌药物SIR耐药率％抗菌药物SIR耐药率％青霉素G1015399.35克林霉素8047045.45氨苄西林00154100杆菌肽152200阿莫西林52010266.23庆大霉素11483220.78苯唑西林1390159.74卡那霉素10334831.17头孢唑啉13251711.04阿米卡星10744327.92头孢噻呋1355149.09磺胺嘧啶2015298.70恩诺沙星11833321.43甲氧苄啶00154100环丙沙星10783925.32氯霉素1232742.60氧氟沙星11743321.43氟苯尼考1143285.19诺氟沙星10064831.17土霉素13002415.58红霉素4314795.45多西环素143295.84替米考星8546542.21万古霉素154000林可霉素6098555.19内蒙呼和浩特地区154株乳源金葡菌的药敏试验结果

金黄色葡萄球菌流行病学调查研究内蒙古呼和浩特地区154株乳源金葡菌多药耐药情况

大肠杆菌耐药性分子流行病学调查研究

北京地区牛源大肠杆菌流行的Ⅰ型整合子及携带的耐药基因盒Ⅰ型整合子类型大小(bp)插入的耐药基因盒编码产物A1318dfrA1二氢叶酸还原酶orf功能未知B1740dfrA17二氢叶酸还原酶aadA5氨基糖-3'-腺苷酰基转移酶C3225aadB氨基糖-2''-腺苷酰基转移酶aadA1氨基糖腺苷酰基转移酶cmlA氯霉素泵D3075aadB氨基糖-2''-腺苷酰基转移酶orf功能未知cmlA氯霉素泵北京地区牛源大肠杆菌Ⅰ型整合子的各种流行形式

细菌分离株intI1PCR产物的大小插入的基因盒形式C260＋3.2kb,1.3kbA+CC261＋3.0kb,1.3kbA+DC262＋1.8kb,1.3kbA+BC286＋3.0kb,1.3kbA+DC287＋3.0kb,1.3kbA+DC288＋1.8kbBC207＋3.0kb,1.3kbA+DC209＋3.0kb,1.3kbA+DC306＋1.3kbAC307＋1.8kb,1.3kbA+BC312＋1.3kbAC914＋3.0kb,1.3kbA+DC916＋3.0kb,1.3kbA+D

牛源大肠杆菌中以A类Ⅰ型整合子最流行，占检出菌的92%，D类次之，占检出菌的54%。多数菌株存在两种Ⅰ型整合子共存同一宿主菌的情况，其中以A+D组合最多，占检出菌的54%。Ⅰ型整合子类型可变区大小（bps）基因盒A1088aadA21B1662dhfrIaadA1C1740dhfrA17aadA5D1991dhfrⅩⅡaadA2E2710sataadA2F4084blaP1aaadA2ereA该猪场大肠杆菌Ⅰ型整合子流行普遍，检出率达54.7%。其中以Ⅰ型整合子D最流行，检出率达42.8%。两种Ⅰ型整合子共存同一宿主菌的情况，以A+C组合最多，检出率达15.2%。华南地区某猪场大肠杆菌流行的各种Ⅰ型整合子及携带的耐药基因盒

华南地区某猪场大肠杆菌Ⅰ型整合子的8种流行组合1-4泳道：鸡别离大肠杆菌；5-9泳道：饲养员别离大肠杆菌；10-20泳道：环境别离大肠杆菌；Marker：LambdaladderDNAstandard华南地区某鸡场人源、鸡源及环境源多重耐药大肠杆菌的PFGE图谱分析鸡源株〔2〕、饲养员源株〔7、8、9〕和环境源株〔20〕属于同一PFGE分型的不同亚型，存在亲缘关系。说明养殖场动物、环境及饲养员之间存在多重耐药大肠杆菌的垂直传播。调查鸡源大肠杆菌耐药性过程中从120株菌中筛选出17株喹诺酮类耐药株，以qnr基因引物PCR扩增，获得3株阳性菌。序列测定结果显示3株菌的qnr基因同源性为100%，与GenBank注册qnr基因序列〔AY655485〕同源性为95.3%。3株qnr阳性菌对16～19种抗菌药物呈高水平多重耐药。我国鸡源大肠杆菌喹诺酮耐药株中qnr基因的发现qnr基因序列同源性比较大肠杆菌对氟苯尼考耐药机制的研究图a

HPLC法测定氟苯尼考在野生敏感菌和耐药菌内的聚集耐药菌株C260(▲)、C262(■)和敏感菌株C305(◆)、ATCC25922(●)对氟苯尼考的积聚量图b

HPLC法测定氟苯尼考在基因工程敏感菌和耐药菌内的聚集基因工程菌株JM109(○)和JM109-R(●)对氟苯尼考的积聚量动物源病原菌耐药机理的研究

抗体对细菌内药物蓄积量的影响鸡毒支原体大环内酯类抗生素耐药分子机理研究大肠杆菌GenBank登录号为J01695；*随机挑取的3株BG44T-EMr，2株的rrnA发生了A2058G突变，但rrnB未发生任何突变；1株的rrnA未发生任何突变，而rrnB发生了G2057A、A2059G突变。鸡毒支原体红霉素、替米考星、泰乐菌素诱导耐药株23SrRNA基因V域局部核苷酸序列分析比较鸡毒支原体MIC(µg/ml)23SrRNAV区域突变位点EMTLTMLMrrnArrnBS60.0320.0160.0084----S6-EMr256-＞5121-24-8＞512A2058Ga(3)

b--S6-TMr≥51216-32256＞512--A2058G

(3);A2503T

(3)S6-TLr1-20.125-0.250.125-0.2564-128----BG44T0.0630.0080.0048----BG44T-EMr2562-648-128＞512A2058G(2)G2057A(1);A2059G(1)BG44T-TMr＞51216-32256-512＞512--A2058G

(3);A2503T

(3)BG44T-TLr1-20.125-0.250.125-0.2564-128----

鸡毒支原体诱导耐药株MIC及其23SrRNA基因V域碱基突变

a按大肠杆菌23SrRNA核苷酸序列编号；b括号内数字为在该位置发生碱基替换突变的突变数。

检测FloR1蛋白的间接竞争ELISA标准曲线用间接竞争ELISA法建立检测FloR1蛋白的标准曲线，标准曲线在6.25ng/ml~200ng/ml之间，呈良好的线性相关，OD值与浓度〔LogC，母液为1mg/ml〕之间的线性回归方程为：y=-0.1744Ln(x)+1.1563，相关系数R2=0.9979。耐药性检测方法研究——大肠杆菌氟苯尼考耐药临床株间接竞争ELISA检测方法的建立临床氟苯尼考耐药大肠杆菌ELISA检测及细菌体内FloR1蛋白含量的测定E.colistrainMIC(μg/mL)floRgeneELISAFloR1concentrationUntreatedAntibodytreated

OD*(ng/mL)JM10922－1.147±0.0091.053±0.058T/JM10922－1.119±0.0411.238±0.324CVM1841>12832＋0.330±0.058113.983±45.381JM109-R6432＋0.419±0.02768.424±11.620C8326012864＋0.287±0.048145.854±45.762C8326122－1.166±0.0130.946±0.075C832623216＋0.641±0.04619.196±5.804C83286328＋0.557±0.05231.133±10.713C8328722－1.100±0.0661.348±0.635C8330244－0.973±0.0282.866±0.496C8330522－1.147±0.0341.055±0.131C8391412832＋0.433±0.02063.388±7.718C839166432＋0.499±0.04043.416±11.088图aMICs和FloR1蛋白量的线性关系图图bMICs和OD值的线性关系图通过数据分析得出，无FloR1蛋白抑制时平均OD值减去3倍标准偏差(OD=0.8879)或对应的蛋白浓度(3.04ng/mL)可作为临界点来筛选临床细菌是否含有floR基因以及是否对氟苯尼考耐药。该方法能在2-3小时内确定细菌是否耐药，与常规的药敏试验相比，能快速简便地对细菌耐药性进行监测。

发表的相关论文WuB,XiaC,DuX,CaoX,ShenJ.Influenceofanti-FloRantibodyonflorfenicolaccumulationinflorfenicol-resistantEscherichiacoliandenzyme-linkedimmunosorbentassayfordetectionofflorfenicol-resistantE.coliisolates.JClinMicrobiol.2006Feb;44(2):378-82.WangZ,ShenJ,SuoX,ZhaoS,CaoX.Experimentallyinducedmonensin-resistantEimeriatenellaandmembranefluidityofsporozoites.VetParasitol.2006Jun15;138