多花木蓝盐胁迫生理响应实验方案

多花木蓝盐胁迫的生理响应试验方案材料和样品：多花木兰种子、NaCl、完全培育液〔硝酸钙1克、磷酸二氢钾0.25克、硫酸镁0.250.250.25克、蒸馏水。溶液培育皿设置：设置5组不同培育条件，选择饱满、均匀、外观良好的种子，放入溶液培育皿中，每皿30粒，别离参加一样量的完全培育液及6mll〔浓度梯度：L、2L、4L、8L、2L，1、2、3、4、513将培育皿置于温室中培育，每天下午3时适当补充蒸发水分，以维持盐分浓度的稳固。培育一样时长，待多花木蓝长出幼苗后，别离测定5组多花木蓝幼苗的各项指标。一、多花木蓝幼苗生长特性指标测定高、茎粗、最大侧根长。材料、设备仪器及试剂〔一〕材料：水培的多花木蓝根系。〔二〕仪器设备：分光光度计；分析天平〔感量g；电子顶载天平〔感量g；温箱；研钵；三角瓶lll；刻度〔三〕1〕乙酸乙酯〔分析纯2〕次硫酸钠4，分析纯，粉100ml，历4〔l·1pH7l·1000ml；6〕0.4mol·L-14.72g，100ml三、试验步骤TTC标准曲线的制作：取0.4%TTC0.2ml10mlNa2S2O40.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml10ml、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。称取5组根尖样品各0.5g，每组取三次，别离编号11、12、13，21、22、23，31、32、33，41、42、43，51、52、5310ml0.4%TTC10ml，把根充分浸没在溶液内，37℃下暗保温1～3h，此后参加1mol·L-12ml〔与此5。3～4ml10ml，485nm比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出四氮唑复原量。四、结果计算四氮唑复原强度〔mg.g-1h-1〕＝四氮唑复原量〔mg〕/根重〔g〕×时刻〔h〕材料、仪器设备及试剂〔一〕材料：颖的多花木蓝叶片。〔二〕仪器设备〔g；4.棕色容量瓶；5.小漏斗；6.定量滤纸；7.吸水纸；8.擦境纸；9.滴管。〔三〕试剂6％乙醇〔0％丙酮三、试验步骤取颖多花木蓝叶片，擦净组织外表污物，剪碎〔去掉中脉，混匀。2～3ml95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，连续研磨至组织变白。静3～5min。1路倒入漏斗中。25ml，摇匀。1cm95％乙醇为空白，在波665nm、649nmCa=13.95A665－6.88A649Cb=24.96A649－7.32A665abb，二者之和为总叶绿素的浓度。最终依照下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量：干重。二、多花木蓝幼苗生理指标测定SOD(NBT)比色法材料、仪器设备及试剂〔一〕材料：多花木蓝幼苗的叶片〔二〕仪器设备：1.高速台式离心机；2.分光光度计；3.微量进样器；4.荧光灯〔x；试管或指形管数支。〔三〕试剂 .L磷酸缓冲液pH7.8.L甲硫氨酸tlL0.06133gNBT100ml，避光保存；4.1000ml试验步骤酶液提取 研钵中，1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为5ml。取1.5～2ml于1000rpm下离心20min，上清液即为SOD粗提液。显色反映 取5ml指形管〔要求透亮度好〕4支，2支为测定管，另2支为试剂〔酶〕试剂〔酶〕终浓度〔比色时〕0.05mol/L磷酸缓冲 1.5液130mmol/LMet0.313mmol/L750μmol/LNBT0.375μmol/L100μmol/LEDTA－Na20.310μmol/L20μmol/L核黄素0.32.0μmol/L酶液0.052蒸馏水0.25总体积3.014000Lx20min〔要求各管受光情形全都，温度高时刻缩短，低时延长。活性测定与计算 终止后，以不照光的比照管做空白，别离测定其它各管的吸光度。结果计算NBT50SODSOD＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt)式中：AckAEVl〕t〔l，Wmg／g材料、仪器设备及试剂20mL×4，离心机。试剂：55%硫代巴比妥酸〔5%三氯醋酸溶解定容；0.05mol·L–1pH7.8。试验步骤取小麦植株上不同叶位的叶片3~50.5cm段，混匀。0.32mL0.05mol·L-13mL0.05mol·L-15mL0.5%硫代巴比妥酸溶液，摇匀。将试管放入滚水浴中煮沸0〔时。到时刻后，当马上试管掏出并放入冷水浴中。待试管内溶液冷却后，3000×g15min，取上清液并量其体积。0.5532nm、600nm450nm处的消光3．计算含量MDmm-F=6.45D532

D600

0.559D450

VVVWtt：提取液整体积L：测定用提取液体积lW：样品鲜重。叶绿素含量测定:丙酮比色法叶片细胞电导率：将叶片样本在蒸馏水中浸泡8-10小时，再用电导率仪测定。材料、仪器设备及试剂〔一〕材料：小麦、女贞叶片;〔二〕6〕恒温水浴锅；7〕注射器。试剂：NaCl试验步骤NaCl0102040、60、80、100μg/ml的标准液，在20～25℃恒温下用电导仪测定，可读出电导度。选取小麦或其他植物在必定部位上生长叶龄相像的叶子假设干，剪下后，先2g。3〕一份插入小杯中放在40℃恒温箱内萎蔫0.5～1h，另一份插入水杯中放在m〔大小以够容电极为度，并用玻棒或干净尼龙网压住，在杯中准确参加蒸馏水20ml，浸没叶片。4〕放入真空枯燥器，用抽气机抽气7～8min以抽出细胞间隙中的空气；从头缓缓放入空气，水即被压入组织中而使叶下沉。片，在20～25℃恒温下，用电导仪测定溶液电导率。6〕测过电导率的以后，再，放入100℃滚水浴中15min10min20～25℃恒温下测其煮沸电导率。〔萎蔫处置与比照〕的叶片细胞透性的转变情形，记录结果，并加说明。/煮沸电导率可溶性糖含量:80%乙醇提取后用蒽酮比色法测定器材与试剂试验仪器 分光光度计，恒温水浴，电子天平，烘箱，刻度试管，漏斗试验试剂 活性炭，乙醇1000mlml100μg1g蒽酮，溶解于1000ml〔760ml1000ml〕溶液中，置于棕色瓶中，当日配置利用。试验材料 或种子试验步骤可溶性糖的提取110℃15min70℃留宿。干叶片磨碎后10ml4ml8080℃水40min2ml80210ml，过滤后取滤液测定。绘制标准曲线20ml10min〔水浴重沸后计时，掏出，当即用水冷却至室温，在m波长下，别离测量各管的光密度值，用0号管调零。以光密度为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。管号 0123456〔ml〕00.10.20.40.60.81.080%乙醇〔ml〕1.00.90.80.60.40.20〔μg〕010204060801003.测定nmOD0ml5mg酶(POD)活性测定:以愈创木酚作底物 ,721型可见分光光度计在720nm下测吸光值Cd7d试剂：L〔pH6.0，L〔pH7.0〕愈创木酚；H2O2。试验步骤2〔wgFW〕+pH7.05mL，研磨，离心n，上清液即为粗酶液。2、配制反映：1mol/L磷酸缓冲液〔pH6.0〕50ml+28uL+19uLH2O2(30%)。一样临用前配制，冰箱内短时间保存。3.酶反映：3mL+0.2mL3mLL0，010SOD>1.000计算酶活性OD以每分钟D值转变1作为1个过氧化物酶活力单位U。酶活力=活力单位(U)/ w(gFW)W=W〔gFW)*V(mL)/V游离脯氨酸(Proline)含量测定:茚三酮比色法一、原理上查出〔或用回归方程计算〕脯氨酸的含量。二、材料、仪器设备及试剂〔一〕材料：待测植物〔水稻、小麦、玉米、高粱、大豆等〕叶片。：17222.研钵；3100ml4.容量瓶；5.大试管；6.一般试管；7.移液管；8.注射器；9.水浴锅；10.漏斗；11.漏斗架；12.滤纸；13剪子。〔三〕1.酸性茚三酮溶液：将1.25g30ml20ml6mol/L〔70℃〕溶解，贮于冰箱中；23％磺基水杨酸：3g100ml；3.冰醋酸；4.甲苯。三、试验步骤标准曲线的绘制〔1〕在分析天平上精准称取25mg250ml0.5，1.0，1.5，2.0，2.53.0ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度别离为1，2，3，4，5及6μg/ml。〔3〕取6支2ml2ml2ml30min。〔4〕冷却后各试管准确参加4ml甲〔5〕用注射器轻轻吸取520nm〔Y〕〔X〕2ml含量〔μg/2ml〕。别离置大管中，然后向各管别离参加5ml3％的磺基水杨酸溶液，在滚水浴中提10min，〔提取进程中要常常摇动〕，冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。〔2〕2ml2ml2m