土槿皮药材定量方法研究

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[收稿日期]2022-06-27

[通信]*陆颂规，高级工程师，主要从事中药研制工作，Tel：（020）81157722，E-mail：lsg0518@

[简介]陈丽斯，助理工程师，主要从事中药研制工作，TelE-mail：lingengxuan@

[摘要]土槿皮为桃金娘科植物水翁Cleistocalyxoperculatus的枯燥树皮，是外用杀菌止痒药复方土槿皮酊的原料药材。目前土槿皮药材质量标准收载于《广东省中药材标准》（第2册），但其质量标准中仅有薄层鉴别项而无含量测定项，未能更有效地监控土槿皮药材的质量。该文首次建立反相高效液相色谱法测定土槿皮药材中3，3′-二-O-甲基鞣花酸峰，并用外标法计算其含量，结果在确定的色谱条件下，目标成分峰与相邻杂质峰达成有效分开，3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品溶液质量浓度在1.00～25.0mg·L-1时峰面积呈良好线性关系，标准曲线为Y=77.33X+7.904，r=0.9995；平均回收率为101.0%，RSD为1.3%。采用高效液相色谱法测定土槿皮药材中3，3′-二-O-甲基鞣花酸的含量，所建立的方法操作步骤简朴，稳定性和重复性好，切实度高，稳当性强，能为更有效监控土槿皮药材质量供给了有力的技术支持。

[关键词]土槿皮；药材监控；3，3′-二-O-甲基鞣花酸

土槿皮为桃金娘科植物水翁Cleistocalyxoperculatus（Roxb.）Merr.etPerry的枯燥树皮。历代本草对其记载较少，可在《生草药性备要》、《本草求原》和《岭南采药录》找到其较早的记载，其入药首见于清·何克谏著的《生草药性备要》[1]。《中药大辞典》、《广东中药志》、《中华本草》均将其收录入药，味苦、辛，性凉，功能清热解毒、燥湿、杀虫，主治脚气湿烂、湿疹、疥癣，疳疮，肾囊痈，烧烫伤[2]。自清至今，土槿皮用于杀虫、治癣有近300年的应用历史[3]，并有研究对其抗菌化合物举行分开与鉴定。现代土槿皮药材标准收载于《广东省中药材标准》（第2册），由于其质量标准过于简朴，仅有薄层鉴别项而无含量测定项[4]，故本文制订一种测定土槿皮药材中3，3′-二-O-甲基鞣花酸含量的方法，旨在为土槿皮药材质量监控供给有效的技术支持。本次测验所用的含量测定指标性物质3，3′-二-O-甲基鞣花酸存在于土槿皮中，属于鞣花酸衍生物的一种，资料说明，鞣花酸具有抗氧化性、抗癌变、抗诱变[5]、抗突变作用，还兼备抗菌、抗病毒作用[6]，被广泛应用于食品、医药医疗和打扮品等领域[7]。

1材料

1.1仪器Agilent1260高效液相色谱系统（包括G1311C四元梯度泵、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱、G1315DDAD检测器和ChemStation色谱工作站）。

1.2药材与试剂3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品（含量98%，深圳市美荷生物科技有限公司）；土槿皮对照药材（中国食品药品检定研究院，批号1821-0301）；土槿皮药材（批号100602-2，110601-1，110601-2）产地为广西，取于广州白云山敬修堂药业股份有限公司，经广东药学院中药学院李书渊教授鉴定为桃金娘科植物水翁C.operculatus的枯燥树皮；含量测定用甲醇为色谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：PhenomenexSynergiFusion-RP80A（4.6mm×250mm，4μm）；滚动相甲醇-0.3%磷酸水溶液（50∶50）；检测波长250nm；流速1.0mL·min-1；进样量10μL；柱温30℃。

2.2对照品溶液的制备取3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品适量，细致称定，加甲醇制成每1mL含10μg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备细致称取土槿皮药材粉末（过3号筛）0.25g，细致参与70%乙醇50mL，称重，超声（功率360W，频率40kHz）处理45min，取出放冷，用70%乙醇补足失重，经微孔滤膜（0.45μm）滤过取续滤液即得。

2.4专属性试验分别细致吸取对照品溶液与供试品溶液，按照2.1项下条件进样测定，结果3，3′-二-O-甲基鞣花酸色谱峰与前后杂质峰分开度均大于1.5，峰纯度因子为999.945，理论塔板数大于5000。对照品溶液与供试品溶液色谱图见图1，2。

1.3，3′-二-O-甲基鞣花酸（图2同）。

图13，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品溶液HPLC图

Fig.13，3′-O-dimethylellagicacidstandardsolutionHPLCchromatography

图2供试品溶液HPLC图

Fig.2ThetestsolutionHPLCchromatography

2.5线性关系的考察细致称取3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品约10mg，置200mL量瓶，加甲醇溶解后定容至刻度得3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品储蓄液（约50mg·L-1）。切实量取储蓄液0.2，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL，分别置于7个10mL量瓶中，用甲醇配成3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品系列溶液，注入高效液相色谱仪。以质量浓度（mg·L-1）为横坐标，峰面积A为纵坐标