吉林省长春市2023届高考生物总复习基础知识记忆清单14

PAGEPAGE1根底知识记忆清单〔14〕微生物的实验室培养〔一〕培养基的根本知识微生物的实验室培养1．培养基的营养成分营养物质定义作用主要来源及所涉及的微生物碳源但凡能提供微生物所需碳元素的物质构成生物细胞、生物体及细胞代谢产物，有些能为异养生物提供能源无机化合物：C02、NaHC03等(自养生物)有机化合物：糖类、脂质、花生粉饼、石油等(异养生物)氮源但凡能提供微生物所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物，也可为异养微生物提供能源无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐，自养生物有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等，异养生物水分生物体内含量最高的组成成分，分为结合水和自由水良好的溶剂、细胞生活及生化反响的介质、参与物质运输及参与生化反响的反响物培养基、大气、代谢产物无机盐为微生物提供大量除C、H、0以外的各种元素细胞组成成分，生命调节物质，自养菌的能源或其他营养来源，酶的激活剂培养基、大气等环境生长因子微生物正常生长繁殖，必不可少的微量有机物可作为酶与核酸等的组成成分维生素、氨基酸、碱基等高考警示钟自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同(1)自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。(2)含氮无机物不但能给自养微生物提供氮源，也能作为能源物质，提供能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。2．培养基的配制原那么(1)目的明确。要根据微生物的种类、培养目的等选择原料、配制培养基。(2)营养要协调。各种营养物质要保证适当的浓度和比例。营养物质比例过低，不能满足微生物生长；浓度过高那么会抑制微生物的正常生长。营养物质的浓度比(如C/N)还会直接影响某些微生物的代谢产物，如谷氨酸生产，C/N=4∶1时，菌体大量繁殖，谷氨酸产量少；而C/N=3∶1时，菌体繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大。(3)pH要适当。不同微生物生长所需pH不同。如细菌pH保持在6.5～7.5之间；放线菌保持在7.5～8.5之间；真菌应保持在5.0～6.0之间。3．培养基的分类及作用：培养基种类很多，作用也不同。根据不同的分类标准，可将培养基分为不同种类。划分标准培养基种类特点用途及实例物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如：琼脂观察微生物的运动、分类鉴定、保藏菌种固体培养基微生物别离、鉴定、活菌计数、化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成清楚确(用化学成分的化学物质配成)分类、鉴定用途选择培养基培养基中参加某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养、别离出特定微生物(如：培养酵母茵或霉菌，可在培养基中参加青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中参加高浓度食盐)鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中参加某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如可用伊红一美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(假设有，茵落呈深紫色，并带有金属光泽)〔二〕灭菌技术1．无菌技术的概念在微生物培养中，获得纯洁培养物的关键是防止外来杂菌入侵，其主要技术是无菌操作。无菌技术是指通过一定物理、化学的手段，防止实验室培养物被外来微生物污染。无菌技术主要围绕如何防止杂菌污染展开的。2．消毒、灭菌的方法工程概念常用方法应用范围消毒使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体外表或内部一局部对人体等有害的微生物(不包括孢子和芽孢)巴氏消毒法：70～75℃水中煮30min或在80℃一些不耐高温的物体如牛奶煮沸消毒法：在100℃一般物品化学药剂消毒法：用乙醇、氯气、漂白粉、KMnO4等药剂来杀死或抑制细菌生长或繁殖可用来对环境、双手和衣物等消毒紫外线消毒法：30W紫外灯照射30min接种室灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法：酒精灯火焰接种工具如接种环、接种针等干热灭菌法：在160～170℃加热1～2h如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具高压蒸汽灭菌：压力为100kPa，温度为12l℃的条件下，维持15～30min培养基及容器的灭菌注意：〔三〕微生物的纯化培养技术1．常用细菌培养基——蛋白胨培养基配制流程：计算计算称量溶化灭菌注意：据配方计算配制一定体积培养基时各成分的用量注意：①倒平板时，烧杯口要通过酒精灯火焰灭菌。②平板冷凝后要将平板倒置，以确保拿放方便，同时防止水分蒸发，以利微生物生长，也可防止皿盖上凝结的水滴滴入培养基，影响pH；其次防止细菌透过皿底、皿盖的缝隙，落在培养基上。③倒平板时，不能将培养基溅在皿底与皿盖之间，以防止杂菌滋生，污染培养基〔调PH〕倒平板注意：①牛肉膏较粘稠，应玻棒挑取，在称量纸上称量②牛肉膏蛋白胨易吸潮，动作要迅速注意：①溶化琼脂时要控制火力的大小并不断搅拌，以免培养基溢出或烧焦；②加热过程中局部水分蒸发，待琼脂完全溶化后应补加蒸馏水，以保持溶液的浓度注意：由于不同微生物适宜的pH不同，因此在熔化后，必须用NaOH或HCl来调节pH装瓶注意：分装至试管时培养基的高度不要超过试管高度的1/5注意：①可用高压蒸汽灭菌法②用干热灭菌法时温度160～170℃(不能超过180℃，否那么易引起报纸等燃烧③一般是培养基先灭菌再倒平板，也可先倒平板,再灭菌2．纯化大肠杆菌Ⅰ．原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。Ⅱ．微生物接种方法：(1)平板划线法：平板划线法中细胞的别离和稀释过程发生在接种环在固体平板外表上的划线和移动过程中。在线的开始局部，微生