病原学诊疗和防治专家讲座

第八章病原学诊疗与防治

第一节细菌学诊疗包含；细菌学诊疗——检测病原菌及其抗原，产物或核酸血清学诊疗——检测患者血清中特异性抗体病原学诊疗和防治第1页一、病原菌检测标本采集时应注意无菌操作，尽可能防止杂菌污染。依据致病菌在不一样病期体内分布和排出部位，采取不一样标本。应在使用抗菌药品前采集标本，不然在培养时应加入拮抗剂。尽可能采集病变显著部位材料。标本必须新鲜，采集后尽快送检。送检过程中要采取适当保留方式。标本做好标识，详细填写化验单，确保各步骤准确无误。标本采集与送检标准病原学诊疗和防治第2页致病菌检验程序标本直接涂片染色镜检分离培养与判定病原菌抗原检测其它检测形态、结构、染色性涂片镜检菌落特征生化反应药敏试验血清学反应沉淀反应协同凝集免疫荧光对流免疫电泳酶免疫测定免疫印迹细菌代谢产物（气相色谱）细菌核酸（PCR）噬菌体分离细菌素测定分子生物学技术动物试验病原学诊疗和防治第3页人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）升高。所以，用已知细菌或其特异性抗原检测患者体液中有没有对应特异抗体和其效价动态改变，可作为一些传染病辅助诊疗。普通采取病人血清进行试验，故称为血清学诊疗(serologicaldiagnosis)。血清学诊疗试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。惯用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。第二节血清学诊疗病原学诊疗和防治第4页第二节病毒学诊疗

一标本采集与送检（principleofcollectionspecimen）1早期（前驱期、急性期、发病前1~2天）2依据不一样病毒感染，采集不一样部位标本3病毒易被灭活（细胞内寄生，怕热不怕冷），低温保留，快速送检4标本无菌采集与处理（加抗生素，除菌并预防污染）5血清学试验检验抗体（双分血清）病原学诊疗和防治第5页二病毒分离培养与判定（virusisolationanddetermination）

（一）病毒分离方法动物接种选择易感动物及接种部位，观察发病情况鸡胚培养不一样病毒选择不一样接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最惯用。细胞培养：分离病毒最惯用方法（1）原代细胞—起源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对各种病毒敏感，但只能传2-3代。（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目标单层细胞。（3）传代细胞—能在体外无限传代细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。病原学诊疗和防治第6页病毒在培养细胞中增殖指标细胞改变（1）出现细胞病变效应（CPE）：即一些病毒在细胞内增殖引发特有细胞病变（细胞变圆、聚集、坏死、脱落等）（2）形成细胞融合（多巨核细胞）（3）形成包涵体：一些病毒在细胞浆或核内增殖后形成嗜酸或嗜碱性团块状结构。（病毒增殖场所）红细胞吸附干扰现象细胞代谢改变（pH）病原学诊疗和防治第7页正常细胞病变细胞病原学诊疗和防治第8页（二）病毒数量与感染性测定（三）新分离病毒判定核酸类型、理化性状、形态、血清学判定、基因测序和生物对比。病原学诊疗和防治第9页三、病毒感染血清学诊疗用已知病毒抗原检测病人血清中对应抗体以诊疗病毒性疾病（中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验、凝胶免疫扩散等）病原学诊疗和防治第10页

四、病毒感染快速诊疗

(一)

形态学

电镜和免疫电镜——直接观察病毒光镜——大病毒和包涵体病原学诊疗和防治第11页病原学诊疗和防治第12页病原学诊疗和防治第13页病原学诊疗和防治第14页病原学诊疗和防治第15页病原学诊疗和防治第16页病原学诊疗和防治第17页（二）检测病毒蛋白抗原用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、敏感、特异）惯用方法：免疫荧光技术（IF）

固相放射免疫测定（SPRIT）

酶免疫技术（EIA）等。病原学诊疗和防治第18页（三）检测病毒特异性IgM抗体

检测病毒特异性IgM抗体可诊疗急性感染或证实病毒复制。病原学诊疗和防治第19页（四）检测病毒核酸

1核酸杂交

斑点杂交（dothybridization）

原位杂交（insitehybridization）

DNA印迹杂交（Southernblot）

RNA印迹杂交（northernblot）

2

核酸扩增聚合酶链反应

（polymerasechainreaction，PCRDNA）连接酶链反应（ligasechainreaction，LCR）反转录PCR（ReversetranscrptasePCR，RT—PCR(RNA)

3

基因芯片技术（genechip）

病原学诊疗和防治第20页第三节真菌学诊疗标本直接镜检深部标本染色标本G染色G+圆形大小不均有芽生孢子分离培养沙氏培养基菌落观察角质标本不染色标本10%KOH观察菌丝、孢子类型大小颜色皱摺判定动物试验（致病性真菌）接种观察发病情况死亡后取标本深入判定皮肤超敏反应快速诊疗血清学试验核酸检测真菌毒素检测病原学诊疗和防治第21页死疫苗活疫苗类毒素新型活疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗第四节特异性预防与治疗一、人工主动免疫(artificialactiveimmunity)：将疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体产生取得性免疫力一个防治微生物感染办法，主要用于预防。合成疫苗亚单位疫苗DNA疫苗转基因植物疫苗治疗性疫苗病原学诊疗和防治第22页抗毒素抗菌血清胎盘球蛋白、丙种球蛋白细胞免疫制剂二、人工被动免疫人工被动免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特异性抗体免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻取得特异性免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人自己产生，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。病原学诊疗和防治第23页两种人工免疫比较区分关键点人工主动免疫人工被动免疫免疫物质抗原抗体或细胞因子等接种次数1-3次1次免疫出现时间慢（注射后2-4W）快（注射后立刻出现）免疫维持时间长（数月~多年）短（2-3W）用途多用于预防多用于治疗或应急预防病原学诊疗和防治第24页三、细菌感染治疗抗菌药品种类（抗生素及人工合成化学制剂）主要作用机制影响细胞壁合成影响细胞膜功效影响细菌蛋白合成影响细菌核酸合成病原学诊疗和防治第25页四、病毒感染治疗药品治疗核苷类药品——抑制病毒基因复制——抑制病毒基因转录蛋白