黄瓜绿斑驳花叶病毒发生概况、检测鉴定及防治

黄瓜绿斑驳花叶病毒发生概况、检测鉴定及防治纽内姆（北京）种子有限公司齐中举（病理助理）1.黄瓜绿斑驳花叶病毒病概况黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumbergreenmottlemosaicvirus,CGMMV）,为烟草花叶病毒属，是西瓜、黄瓜、南瓜等葫芦科作物上的一种毁灭性病害，具有危害严重，致病性强，防止难度大等特点。1.1危害症状：CGMMV侵染许多葫芦科作物，引起植物叶片斑驳、系统性花叶及果肉恶化等症状。在黄瓜上,最初新叶上出现黄色小斑点,随后逐渐发展为花叶、斑驳和浓绿泡状突起等症状,叶脉间褪色呈绿带状。在西瓜上，初期茎端幼叶呈现淡黄色花叶，随后出现浓绿凹凸斑，随叶片老化症状减轻；果实表现有浓绿圆斑，中央有坏死点，种子周围的果肉呈赤紫色水渍状，成熟时变为暗褐色且出现空洞。在甜瓜上，受害的新叶上出现黄斑，随叶片老化症状减轻；成株侧枝的叶片呈现不定形或星状黄化叶，生长后期顶部叶片有时产生大型黄色轮斑；幼果受害后有绿色花纹，后期为绿色斑，或在绿色斑中央出现灰白色斑。在黄瓜叶片上引起色斑、水泡及变形，使植株矮化、结果延时，果实大部分黄化或变白并产生黑绿色水疱状的坏死斑，产量损失达15%；可延缓黄瓜植株的生长发育，甚至导致不孕。1.2发生分布：黄瓜绿斑驳花叶病毒病20世纪30年代在欧洲国家发生，60年代因黄、西瓜和瓠瓜而传入印度和日本，80年代传入台湾。2002年中国从日本引进种苗中截获，2004年厦门从日本进口的南瓜种子上检测到CGMMV，2005年中国辽宁省盖州市感染CGMMV在我国辽宁盖州地区造成西瓜大面积毁灭，受害面积达333hm2,约13hm2绝收，CGMMV现在中国部分地区已造成西瓜毁灭性的损失。农业部发布的第788号公告，郑重宣布将CGMMV确定为全国农业植物检疫性有害生物，属国家三类检疫性病害。目前，CGMMV在中国主要分布于辽宁、河北、湖北、广东和山东，发生率达80%，河南、四川、江西、上海、新疆、陕西及宁夏等省份还未发现。1.3传播方式：该病毒主要侵染甜瓜、西瓜、黄瓜及瓠瓜等多种葫芦科作物，主要通过种子、土壤、机械摩擦、田间农事操作、植物间接触、叶片接触、啮齿动物（如兔子、小白鼠等）的粪便、栽培营养液、河水、灌溉水、被污染的包装容器、用作肥料的牛粪、菟丝子等方式进行传播，另外，有学者认为苋色藜、马齿苋等杂草寄主也为病毒的定殖提供了可能。黄瓜叶甲是可能的传播介体;但桃蚜和棉蚜不传毒,被侵染葫芦、瓠子的根际土壤中未发现介体真菌。根据目前关于种子带毒的研究，西瓜的种子带毒率有24%~100%不等，可能是由于CGMMV感染西瓜时期不同导致种子感染病毒的程度不同，也可能是CGMMV毒株的致病力不同引起的，或者和种子材料的新鲜程度也有关系，传毒率2.25%，甜瓜带毒率为93.85%，传毒率2.83%，黄瓜种子收获后一个月检测种传率为8%，保存5个月后种传率降低到0.1%。土壤带毒率为0~3.5%。种子传播是该病毒远距离传播的主要方式。为防止CGMMV通过种子贸易和远距离调运而扩散，加强种子带毒检测，从源头控制该病害的蔓延，对保护西瓜、甜瓜产业的安全生产具有重要意义。CGMMV不同株系体外生物学特性有差异，钝化温度为一般90OC~100OC，稀释限点为106~107,常温下病毒侵染力可保持数月，在土壤中至少存活10个月，在0OC则可保持数年。2．黄瓜绿斑驳花叶病毒病的检测鉴定2.1试剂条检测：现在有Agdia公司生产的试剂条可以对叶片上的病毒进行初步检测2.2电子显微镜检测：电子显微镜可检测在土壤及营养液中生长的植物中的CGMMV。2.3血清学方法检测：DAS-ELISA及快速免疫滤纸显色法，multi-RIPA检测，multi-RIPA检测纯化CGMMV的最低量为50ng/ml,琼脂凝胶沉淀法(Precipitationinagar)和单抗检测法，modifiedELISA(M-ELISA)检测黄瓜种子，结果比标准ELISA更灵敏，其灵敏度相当于检测到800粒健康种子中的1粒病种子。就目前的经济条件及操作条件，国内的一般研究单位采用的是DAS-ELISA检测方法。2.4PCR检测:cDNA杂交检测,6碱基随机引物或oligod(T)16进行RT-PCR检测，免疫诱捕RT-PCR(ImmunocaptureRT-PCR,IC-RT-PCR)检测方法，该方法比DAS-ELISA灵敏105倍，比F(ab，)2ELISA灵敏102倍,高密度乳胶微粒凝集试验(Highdensitylatexparticleagglutinationtest,HDLPAT)、ELISA、RT-PCR及生物测定(使用Chenopodiumamaranticolor)检测。国内的一般研究单位采用的是IC-RT-PCR随机检测方法。只有生物测定可用于检测干热处理的种子。对未处理的种子,RT-PCR则是一种灵敏的方法，综合考虑样品制备、检测费用及检测时间等因素,HDLPAT则是一种快速检测未处理种子的实用方法。3．黄瓜绿斑驳花叶病毒病的防治对CGMMV的防治同其他病害一样,最根本的要使用无侵染的种苗;在农事操作中尽量避免病毒经器械等传播,加强栽培管理,及时拔除初侵染病株,销毁病株残体。3.1种子处理：根据国内对带毒砧木进行药剂消毒、干热处理、干热处理结合药剂消毒、温汤浸种、温汤浸种结合药剂消毒等五种种子处理方法的研究：其中干热处理结合药剂消毒的防效最好,为100%,发芽率85.2%,明显优于其他处理及对照;其次是干热处理（40OC、24h后72OC、72h），防效为93.46%,发芽率85.6%；温汤浸种结合药剂消毒，防效为80.47%，发芽率87.8%；药剂消毒（10%磷酸三钠溶液浸泡20~30min），防效为73.93%,发芽率90.3%；温汤浸种（55OC,1