兽医流行病学刘血清流行病学

兽医流行病学刘血清流行病学第1页/共35页第十一章血清流行病学

用血清学（免疫学）的方法进行流行病学调查分析，以阐明疾病在群体中的分布和原因，检验疾病防制措施的效果。第2页/共35页血清可测量物质及疾病相关指标：矿物质、微量元素、酶和激素、特异抗体

第一节概述第3页/共35页二、用途

1、阐明疾病的分布规律特异抗体可以提供畜群是否暴露于传染病病原体的证据。以隐性感染为主的疾病，除了进行发病分布研究外，同时检测相应抗体或抗原进行分析研究。第4页/共35页2、寻找与病因相关的因素追溯诊断：收集发病早期和康复期双份血清，抗体效价升高4倍以上。在肝癌病人血清中HBsAg和抗HBe的检出率明显高于对照组。血脂、胆固醇与冠心病的关系。高水平免疫球蛋白与慢性病的关系。

第5页/共35页3、评价防制措施的效果评价生物制品接种效果。4、疾病监测和疫情预报了解动物群体对某病易感和免疫水平的动态变化。群体中易感动物比例越大，流行强度越大。第6页/共35页三、方法（一）调查方法

1、短期调查确定是否存在疾病。

2、长期调查监测抗体水平和疾病流行的动态变化。第7页/共35页（二）检测方法凝集试验(HA)、血球凝集抑制试验(HI)、葡萄球菌A蛋白(SPA)协同凝集试验、间接血球凝集试验(IHA)、琼脂扩散沉淀试验(AGP)、补体结合试验(CF)、免疫荧光试验(IF)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫试验(RIA)第8页/共35页（三）分析方法筛检（screening）试验：快速简便、早期发现可能有病动物。筛检出的可疑或阳性病畜均需进一步确诊。

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第二节血清抗体的测定一、抗体量的表示法滴度—产生试验反应的血清最高稀释度（阳性、阴性、阳转）滴度的对数转换（适合于正态分布检验）

对数平均滴度几何平均滴度第10页/共35页第11页/共35页二、抗体测定单系列稀释测定每一稀释度测一次，抗体滴度是区间滴度

多系列稀释测定每个稀释度测定几次，50%终点测定抗体滴度：50%试验组成员产生特定后果的血清稀释度，用半数有效量(ED50)表示第12页/共35页血清稀释度Log10稀释度细胞病变单层数完整单层数阳性比例（P)1-P1/10.0051.000.001/2-0.3051.000.001/4-0.6051.000.001/8-0.9140.800.201/16-1.2140.800.201/32-1.5320.400.601/64-1.8410.200.801/128-2.1500.001.00血清抗体50%终点测定第13页/共35页Spearman-Kärber法log10ED50=L-d(Σp-0.5)L=显示全部阳性结果的最高稀释度对数d=稀释系数的对数∑p=从显示全部阳性结果的最高稀释度开始的各稀释度试验阳性比例总和

L=-0.6d=log102=0.3Σp=1.00+0.80+0.80+0.40+0.20=3.20ED50=1/25.1即0.1ml血清含有25.1个ED50，则1ml血清含有251个ED50。第14页/共35页

标准误（e.s.e）

e.s.e(log10ED50)=n为每一组中的试验重复数。

log10e.s.e

=0.3 =0.13因此，滴度可以表示为每0.1ml含101.4±0.13ED50，或每毫升含102.4±0.13ED50。

第15页/共35页三、畜群中血清抗体水平的估计和比较1、检测抗体的存在对畜群作抽样调查2、抗体水平的比较不同畜群的比较根据抗体存在与否比较两个畜群，可用卡方检验比较两群体中抗体的频率分布，可用参数检验同一畜群不同估计值的比较第16页/共35页第三节血清学试验的解释一、精密性不同的流行菌株、毒株存在抗原差异。随着单克隆抗体的出现，检测病原体细微抗原差异的能力已大大提高，有助于感染起源和流行范围的确定。第17页/共35页二、准确性阳性结果

真阳性—确定遭受该病病原体的感染

交叉反应，同一群病原体或相关病原体之间的交叉反应假阳性双重感染，而其中只有一种是临床发病的病原体

非特异性反应，非特异抑制剂、非特异凝集素技术误差第18页/共35页阴性结果真阴性—确定未遭受该病病原体的感染

标本采集时间不当试验选用不当假阴性抗生素诱导的抗体产生受到抑制不完全或封闭抗体存在自然或诱发的免疫耐受技术误差

第19页/共35页三、敏感性和特异性敏感性：实际感染而按诊断标准被判定为感染的百分率。特异性：实际未感染而按诊断标准被判定为未感染的百分率。第20页/共35页敏感性和特异性的关系第21页/共35页检测抗原和抗体的试验的相对敏感性方法近似敏感性(每dl)用双缩或折射仪测定血清总蛋白质100mg血清蛋白质电泳(区带电泳)100mg分析性超速离心100mg免疫电泳5～10mg免疫结合5～10mg单向辐射扩散<1～2mg琼脂双扩散<1mg电泳免疫扩散(火箭电泳)<0.5mg一维双电泳免疫扩散(对流免疫电泳)<0.1mg浊度计0.1mg补体结合试验1μg凝集试验1μg酶免疫测定（ELISA）<1μg定量免疫荧光<1pg放射免疫测定<1pg第22页/共35页

平行（并联）试验当漏掉一个病例后果严重或再进行筛检比较困难时，要尽量减少漏诊率。试验1试验2判断结果++++-+-++---几个指标中有一个阳性即诊断为阳性。灵敏度提高，但特异度降低。第23页/共35页例如流产奶牛布鲁氏菌病检查阴道拭子细菌培养、血清的虎红平板试验和乳汁环状试验，任一试验阳性就认为感染。在发生疫情要求迅速作出判定时，常常采用平行试验。

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系列（串联）试验当误诊会造成严重后果时，几个指标均为阳性才能诊断。提高了特异度，可以减少误诊率，但却增加了漏诊率。试验1试验2判断结果++++---+----第25页/共35页疾病根除计划常采用系列试验从群体中淘汰阳性动物。最初筛检试验是有病的动物，再经进一步试验加以证实，从而排除假阳性。第26页/共35页四、预测值PT=真阳性+假阳性=P×敏感性+（1-P）×（1-特异性）

假定P=0.01，敏感性=0.99，特异性=0.99则：PT=0.01×0.99+(1-0.01)×(1-0.99)=0.02

实际患病率是0.01，而估计的患病率是0.02。第27页/共35页如果知道试验的敏感性和特异性，则可以通过下式得到真正患病率P的正确估计值：

P=第28页/共35页阳性预测值—试验阳性动物实际也是阳性的概率阴性预测值—试验阴性动物实际也是阴性的概率阳性预测值=a/a+b=

阴性预测值=d/c+d=第29页/共35页阳性预测值低—试验阳性，但难以作出有病诊断；阴性预测值低—试验阴性，但难以排除无病。一种筛检方法应用于不同患病率的畜群，阳性（或阴性）结果所表示的意义不同。判断筛检方法的诊断价值，需要参考畜群的患病率。预测值的意义第30页/共35页不同患病率水平牛群阳性结果预测值

（布鲁氏菌病试管凝集试验敏感性62%