水生实验动物质量监测

水生实验动物质量监测第一页，共七十二页，2022年，8月28日实验动物是指经人工培育、遗传背景清楚、对其质量实行控制、用于科学试验及产品生产的动物。区别于实验用动物。第二页，共七十二页，2022年，8月28日第三页，共七十二页，2022年，8月28日与实验动物相关标准实验动物遗传（3）实验动物哺乳类实验动物的遗传质量控制GB14923实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法GB/T14927.1实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法GB/T14927.2第四页，共七十二页，2022年，8月28日近交系、封闭群、杂交群近交系：至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成，品系内所有个体都可以追溯到起源20代或以后代数的一对祖先。近交系数应大于99%。封闭群：以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群，在不从外界引入新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上。杂交群：由不同品系或种群之间杂交产生的后代。第五页，共七十二页，2022年，8月28日遗传监测重要性保障品系的遗传特性防止发生遗传突变和遗传污染第六页，共七十二页，2022年，8月28日实验动物寄生虫学等级及检测GB14922.1实验动物微生物学等级及检测GB14922.2

实验动物微生物学检测方法（3）GB/T14926.50-14926.55实验动物质量（8）实验动物检测方法（4）GB/T14926.18-14926.32GB/T14926.56-14926.64SPF鸡微生物学监测总则GB/T17998

第七页，共七十二页，2022年，8月28日普通级动物（ConventionalAnimal,CV）（基础级动物）清洁级动物（CleanAnimal,CL）无特定病原体级动物（SpecificPathogenFreeAnimal,SPF）无菌级动物（GermFreeAnimal,GF）GB14922.1GB14922.2实验动物第八页，共七十二页，2022年，8月28日类别病原菌病毒寄生虫动物种类小鼠、大鼠豚鼠、兔犬、猴小鼠、大鼠豚鼠、兔犬、猴小鼠、大鼠豚鼠、兔犬、猴项目沙门菌、支原体、泰泽病原体等沙门菌、多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌等志贺菌、结核杆菌等鼠痘病毒、汉坦病毒、仙台病毒和小鼠肝炎病毒等兔瘟、仙台病毒等B病毒、逆转录病毒等体外寄生虫、弓形体等弓形体、兔脑原虫、球虫等弓形体、溶组织阿米巴等数量（项）161491489765SPF级动物监测项目我国实验动物质量要求的最低标准，其它行业、地方标准不能低于国家标准要求。第九页，共七十二页，2022年，8月28日保证实验研究的顺利进行和工作人员的身体健康。确保实验数据的准确性和可重复性。质量监测意义实验动物的微生物学、寄生虫学质量监测第十页，共七十二页，2022年，8月28日

实验动物环境设施（2）实验动物环境与设施GB14925实验动物设施建筑技术规范GB50447第十一页，共七十二页，2022年，8月28日日常性监督指标

温度、日温差、相对湿度、压差；监督性检测指标沉降菌、氨气浓度、噪声、照度；必要时检测指标空气洁净度、换气次数、气流速度、昼夜明暗交替时间。第十二页，共七十二页，2022年，8月28日实验动物营养和饲料（12）实验动物配合饲料通用质量标准GB14924.1

实验动物配合饲料卫生标准GB14924.2实验动物小鼠、大鼠配合饲料GB14924.3实验动物兔配合饲料GB14924.4实验动物豚鼠配合饲料GB14924.5实验动物地鼠配合饲料GB14924.6实验动物犬配合饲料GB14924.7实验动物猴配合饲料GB14924.8实验动物配合饲料常规营养成分的测定GB/T14924.9实验动物配合饲料氨基酸的测定GB/T14924.10实验动物配合饲料矿物质和微量元素的测定GB/T14924.12实验动物配合饲料维生素的测定GB/T14924.11第十三页，共七十二页，2022年，8月28日笼具（地方标准）塑料笼箱；隔离器；代谢笼；笼架；层流架；饮水瓶；IVC第十四页，共七十二页，2022年，8月28日动物编号外观检查麻醉皮肤取样取血无菌解剖检测检测报告真菌检查

分离血清，检查病毒抗体或其他病原抗体

气管分泌物、肠内容物、脏器分离细菌采用抽样检测。检测程序包括监测项目的选定、采样、检测。第十五页，共七十二页，2022年，8月28日采样要求方法成年动物

哨兵动物法（CD1小鼠）群体大小（只）取样数量1）〈100不少于5只100-500不少于10只〉500不少于20只1）每个隔离器检测2只。繁殖单元随机抽样法（例如四角和中央）第十六页，共七十二页，2022年，8月28日检测频率普通级动物：每三个月至少检测动物一次。清洁级动物：每三个月至少检测动物一次。无特定病原体动物：每三个月至少检测动物一次。

无菌动物：每年检测动物一次。每2-4周检查一次动物的生活环境标本和粪便标本。第十七页，共七十二页，2022年，8月28日监测方法细菌检测病毒检测寄生虫检测病原检测（细菌、真菌）检测抗体方法病原检测分离培养血清学检测（ELISA、IEA、IFA、HI）镜检（直接涂片法、饱和盐水漂浮法或沉淀法、透明胶纸肛门周围粘取法、组织或器官剖面压印法、病变组织切片或压片法、尿液的离心法）GB/T18448.1-18448.10第十八页，共七十二页，2022年，8月28日水生实验动物的质量控制水生生物终生生活在水中，绝大部分体外受精、体外发育，在许多领域得到广泛应用，是毒性试验、环境监测、发育生物学、生理学、生态学、遗传学等研究常用的实验材料。目前还没有质量监测标准，来保障实验用水生生物的质量。第十九页，共七十二页，2022年，8月28日国际斑马鱼研究中心提供974种斑马鱼，主要包括野生型和转基因和基因突变动物。第二十页，共七十二页，2022年，8月28日检测类别水体质量问题

一般检查和剖检

细菌疾病

寄生虫疾病（原生虫疾病、多细胞寄生虫）非感染性和先天性疾病

肿瘤疾病

第二十一页，共七十二页，2022年，8月28日

国内外斑马鱼环境控制指标一览表监测指标国内国外水温20-30℃，28.5℃最佳27-29℃pH6.5-86.3-7.3硬度6-8dGH无要求光照300-500lx无要求光/暗12h/12h无要求氧含量无要求5.5mg/l氨含量无要求0ppm氯含量无要求0ppm盐度无要求0.003电导率无要求93ms/m;500微米/s亚硝酸盐无要求0.1mg/L以下水置换率/流速无要求10%/天0.1m/s铜无要求无统一值气体饱和度无要求无统一值第二十二页，共七十二页，2022年，8月28日水体质量问题（WaterQualityProblems）

铜毒性

氯毒性

氨毒性

亚硝酸盐毒性

气泡病（GasBubbleDisease）

第二十三页，共七十二页，2022年，8月28日铜毒性表现：咳嗽反射、换气次数和氧消耗增加、部分鱼嗜睡或不协调；发育迟缓、畸胎。显微观察：鳃和侧线损伤，肝细胞可能出现空泡。氯毒性鱼对氯很敏感，引起急慢性死亡。表现：鱼鳃严重急性坏死，呼吸困难，头周围出现斑点。显微观察：鱼鳃严重坏死。第二十四页，共七十二页，2022年，8月28日氨毒性表现：行为异常（兴奋过度、厌食、生长迟缓，对病原敏感），换气减少。显微观察：鱼鳃上皮增生。亚硝酸盐毒性表现：组织缺氧。第二十五页，共七十二页，2022年，8月28日气泡病气体饱和度超过当时温度、盐度和压力条件下的最大值。表现：皮肤、鱼鳍或鳃出现肉眼可见泡沫，眼球后组织也可见明显泡沫，眼球突出。显微观察：组织切片可见泡沫。第二十六页，共七十二页，2022年，8月28日一般检查和剖检（GeneralDiagnosticsandNecropsyProtocols

）行为体表检查

鱼腮

剖检

触片（imprints）

组织学

第二十七页，共七十二页，2022年，8月28日行为摩擦寄生虫反常的呼吸模式腮损伤旋转或盘旋游泳神经损伤另一些疾病迹象（绝食、精神萎靡、待在不正常部位）第二十八页，共七十二页，2022年，8月28日体表检查：立体解剖显微镜异常：鱼鳍磨损、眼球混浊、溃疡、褪色、体表寄生虫和肿瘤等制作湿片（Preparewetmounts）：观察寄生虫和其它病原体第二十九页，共七十二页，2022年，8月28日鱼腮颜色解剖镜下检查：寄生虫、囊肿、粘液过多和出血等制作湿片：寄生虫、真菌和细菌第三十页，共七十二页，2022年，8月28日剖检：体腔：腹水、出血或其它异常肾脏：肿大、褪色心脏：是否正常内脏器官：白色的囊肿可能感染分支杆菌组织压片：寄生虫、真菌或肉芽肿触片：常用Giemsa或Diff-Quik染色对肾脏或其它感染脏器检查原虫和细菌第三十一页，共七十二页，2022年，8月28日组织诊断鱼的整体（通常纵切）或有代表性的脏器进行固定，固定液Dietrich’s或Davidson，进行切片，染色镜检。第三十二页，共七十二页，2022年，8月28日细菌疾病（BacterialDiseases）

分支杆菌病（Mycobacteriosis）

滑动细菌（GlidingBacteria）

细菌性喉囊炎（Bacterialaerocystitis）—鱼鳔细菌感染

第三十三页，共七十二页，2022年，8月28日分支杆菌病病原：海分支杆菌、脓肿分支杆菌、龟分支杆菌、偶发分支杆菌、草分支杆菌和嗜血分支杆菌等。临床症状和病变：溃疡、出血、头部周围充血、鱼鳞凸起、鱼鳍磨损、皮肤或鳃苍白等。内脏器官白色结节。显微观察：肉芽肿诊断：抗酸染色、PCR确诊。第三十四页，共七十二页，2022年，8月28日滑动细菌（细菌性鳃病、环境性鳃病）病原：黄杆菌属、屈桡杆菌等菌属；淡水鱼主要感染柱状黄杆菌和嗜鳃黄杆菌。临床症状和病变：呼吸困难，鱼鳍和鱼尾表现特征性鱼鳍腐蚀，白色。显微观察：上皮增生，次级鳃瓣融合，有的坏色，病变部位可见大量细菌。诊断：观察到细菌。第三十五页，共七十二页，2022年，8月28日细菌性喉囊炎病原：不能确定具体的细菌类型，免疫抑制鱼内脏细菌移植到鱼漂引起疾病。临床症状和病变：嗜睡，聚集鱼池底部。鱼鳍基部出现红斑。显微观察：鱼漂出现大范围损伤和严重慢性炎症。组织切片可见明显坏死，革兰氏染色可见大量细菌群落。诊断：组织切片观察到特征性损伤，多种染色证实细菌的存在。第三十六页，共七十二页，2022年，8月28日寄生虫病天鹅绒疾病（VelvetDisease）微孢子虫病（Microsporidiosis）Ich（白点病）

原生动物疾病（ProtozoanDiseases）第三十七页，共七十二页，2022年，8月28日原生动物疾病

天鹅绒疾病

病原：淡水天鹅绒（Piscinoodiniumpillulare

）——鞭毛虫纲，腰鞭毛虫目生活史：腰孢子虫阶段

滋养体分裂前体腰孢子虫临床症状：精神萎靡，浮于水体表面，呼吸困难显微观察：皮肤或鱼鳃湿片见滋养体组织切片：鳃感染上皮增生，皮肤感染上皮增生和坏死诊断：切片中见滋养体(卵形的、不透明、无运动能力)

第三十八页，共七十二页，2022年，8月28日微孢子虫病

病原：微孢子虫（Microsporidium）（微孢子门、微孢子目），特定种属名：Paeudolomaneurophilia；生活史：专性细胞内寄生，复杂生命周期，产生具有传染性和抵抗性的孢子，通过摄入具有传染性的孢子感染。临床症状：衰弱和脊柱弯曲症状显微观察：中枢神经系统（脊索和后脑）可见孢子诊断：观察到孢子（湿片或切片）第三十九页，共七十二页，2022年，8月28日A：衰弱；B：脊柱弯曲第四十页，共七十二页，2022年，8月28日Ich（白点病）

病原：多子小瓜虫(Ichthyophthiriusmultifiliis)（纤毛虫纲、膜口目、凹口科）临床症状和病变：粘液过多、呼吸困难和精神萎靡，皮肤凸起的白色节结白点显微观察：皮肤和鳃的湿片可见纤毛虫湿片，组织切片可见上皮增生、滋养体。诊断：湿片见纤毛虫，确诊见到滋养体，寄生部位发现虫体。第四十一页，共七十二页，2022年，8月28日体表白点（红大马哈鱼Sockeyesalmon

）第四十二页，共七十二页，2022年，8月28日腮的湿片（箭头为纤毛虫）第四十三页，共七十二页，2022年，8月28日多细胞寄生虫（MetazoanParasites）

毛细线虫病（Capillariasis）肾粘孢子虫病（RenalMyxosporidiosis）

第四十四页，共七十二页，2022年，8月28日毛细线虫病

病原：毛细线虫（蠕虫），Pseudocapillariatomentosa是第一个鉴别的感染斑马鱼的毛细线虫，具有广泛的宿主。临床症状和病变：发黑、衰弱、嗜睡、剖检肝肿大和贫血。显微观察：雌虫肠道湿片充满特殊虫卵湿片，组织切片见蠕虫位于肠壁，感染组织严重蜂窝织炎切片。诊断：椭圆形、具双极囊的卵存在；确诊还需观察到虫体。第四十五页，共七十二页，2022年，8月28日肠道湿片第四十六页，共七十二页，2022年，8月28日肠道切片第四十七页，共七十二页，2022年，8月28日肾粘孢子虫病

病原：粘原虫（粘原虫门，粘孢子虫纲），两极虫属（Myxidium）或楚克拉虫属（Zschokkella）生活史：滋养体阶段和多细胞的孢子阶段。鱼吞食孢子或粘附鳃和皮肤感染。临床症状和病变：一般无明显临床症状，可在多个器官中形成包囊。显微观察：病变组织切片见虫体；粘孢子具有特殊极囊（亚甲基兰和吉姆萨等特殊方法染色）。诊断：组织切片观察到虫体。第四十八页，共七十二页，2022年，8月28日位于肾小管中滋养体第四十九页，共七十二页，2022年，8月28日粘孢子具两个极囊Giemsa

染色返回第五十页，共七十二页，2022年，8月28日非感染性和先天性疾病（Non-infectiousorIdiopathicDiseases）

肾钙质沉着症（Nephrocalcinosis）

心脏病：心包积液和扩张性心肌病

卵相关炎症（Egg-AssociatedInflammation）

肝红细胞症（HepaticMegalocytosis）

第五十一页，共七十二页，2022年，8月28日肾钙质沉着症

钙在肾小管和集合管中沉积而成。水中较高CO2浓度（〉12mg/L）；食物中钙镁较高等。临床症状和病变：一般无明显临床症状。显微观察：组织切片见肾小管和集合管中有嗜碱性、水晶状的沉积物。诊断：肾组织切片中钙的沉积。第五十二页，共七十二页，2022年，8月28日钙沉积第五十三页，共七十二页，2022年，8月28日心脏病

临床症状和病变：心脏区域非常肿胀，切开出现严重出血或大块的血栓显微观察：心包腔中充满血液或蛋白样渗出物；组织切片见心室扩张，充满液体。诊断：剖检心脏出血，组织学确定。第五十四页，共七十二页，2022年，8月28日

心脏区域凸出第五十五页，共七十二页，2022年，8月28日卵相关炎症临床症状和病变：腹部扩张，卵巢成实心、瘤状物，甚至从内到外体表出现白色的溃疡显微观察：严重慢性炎症，纤维素增生，纤维素瘤。诊断：组织学变化。第五十六页，共七十二页，2022年，8月28日体侧形成溃疡第五十七页，共七十二页，2022年，8月28日肝红细胞症

肝细胞的细胞质和细胞核极度扩大。临床症状和病变：无明显临床症状显微观察：组织切片见个别肝细胞的核过度肥大。诊断：发现扩张的肝细胞极度增大的细胞核。第五十八页，共七十二页，2022年，8月28日部分肝细胞肿大第五十九页，共七十二页，2022年，8月28日肿瘤疾病精原细胞瘤（Seminoma）

肠癌（IntestinalCarcinoma）

后腮瘤（UltimobranchialNeoplasia）

甲状腺瘤（ThyroidNeoplasia）

肝脏肿瘤（HepaticNeoplasia）

梭形细胞肉瘤（SpindleCellSarcomas）血管瘤（Hemangiomas）

第六十页，共七十二页，2022年，8月28日

精原细胞瘤

肉眼变化：常见的自发性肿瘤；腹部肿胀，柔软、白色多室性的肿块。显微改变：精母细胞的精原细胞瘤；生殖细胞可分化成不同的发育阶段，甚至有精子形成切片第六十一页，共七十二页，2022年，8月