鸡传染性支气管炎

鸡传染性支气管炎第1页/共60页

一、目的：确保鸡传染性支气管炎活疫苗（H120株）生产岗位操作规程的质量。二、适用范围：适用于鸡传染性支气管炎活疫苗（H120株）生产岗位操作规程生产的全过程。三、责任者：生产运行部各岗位。第2页/共60页鸡传染性支气管炎的介绍第3页/共60页

传染性支气管炎是由冠状病毒引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病，因毒株不同，又分为呼吸型、肾型、腺胃型，是对养鸡业威胁最为严重的传染病之一。

第4页/共60页病原

鸡传染性支气管炎病毒属于冠状病毒科冠状病毒属的代表种。单股RNA。有囊膜，其上有纤突。病毒主要存在于病鸡呼吸道渗出物中。病毒能在10－11日龄鸡胚中生长。感染鸡胚出现的特征性变化是：发育受阻，胚体缩成小丸形，羊膜增厚，紧贴胚体，卵黄囊缩小。感染鸡胚尿囊液不能凝集鸡红细胞，但经1％的胰酶处理或磷酸酯酶C处理后，具有血凝性。第5页/共60页流行特征

自然感染仅见于鸡、雉，各种年龄鸡均可发病，以雏鸡发病最严重。主要经呼吸道传播，也可经消化道传播。四季均可发病，以冬季最为严重。气候突变、寒冷、拥挤、通风不良或应激等可诱发本病。第6页/共60页临床特征

呼吸型传支发病急，传播快，发病率高，几天内可迅速波及全群，若无继发感染，鲜见死亡。第7页/共60页病鸡精神沉郁，呼吸困难第8页/共60页呼吸困难，伸颈张口呼吸第9页/共60页咳嗽、流鼻第10页/共60页母鸡产蛋率急剧下降，恢复期出现畸形蛋

第11页/共60页蛋壳变白、变软、变砂

第12页/共60页蛋白稀薄如水

第13页/共60页粪便不成形，尿酸盐增多

第14页/共60页肾型传支病鸡呼吸道症状较轻微，5～7天减轻

第15页/共60页但饮水量明显增加，采食量下降，畏寒挤堆

第16页/共60页随后病鸡排出白色水样粪便第17页/共60页爪因脱水干燥无光

第18页/共60页病理变化1、呼吸型传支

第19页/共60页气管黏膜充血、出血

第20页/共60页

气管黏膜点状和条状出血

第21页/共60页慢性病例气管内有浆液性或黄白色

干酪样渗出物，下部多见

第22页/共60页产蛋母鸡卵巢变形，卵泡充血、出血、液化第23页/共60页卵巢、输卵管萎缩第24页/共60页2、肾型传支第25页/共60页肾脏有大量尿酸盐沉积、苍白、肿胀第26页/共60页肾脏呈花斑状（珍珠鸡）第27页/共60页

3、腺胃型传支也有资料认为是鸡传染性马立克氏病腺胃型第28页/共60页腺胃肿大第29页/共60页腺胃黏膜水肿，充血、出血第30页/共60页乳头界限不清第31页/共60页实验室鉴别诊断鸡胚接种实验鉴别诊断

取9～11日龄SPF鸡胚，尿囊腔接种处理病料悬液，接种后4～5天，可见胎儿发育迟缓、卷曲。第32页/共60页HA试验采取微量凝集试验。选用96孔血凝板，1％鸡红细胞，取接种鸡胚尿囊液检测，无血凝性。但在用1％胰蛋白酶或磷酸酯酶C处理尿囊液24小时后，发生血凝。鉴别诊断要点

该病易与新城疫、传染性喉气管炎相混淆。

鉴别诊断要点有：第33页/共60页传染性支气管炎是所有呼吸道传染病中传播最为迅速的一种疾病，潜伏期短，无前驱症状，突然出现呼吸症状，并很快波及全群。传染性支气管炎常见肾脏肿大，呈“花斑肾”，而新城疫和传染性喉气管炎则无，传染性喉气管炎常见鸡咯血，而前两者则无。三者接种鸡胚后所呈现的鸡胚病变不一样。传染病支气管炎可出现休儒胚、蜷缩胚，72小时内死亡数量少；新城疫则出现全身出血，鸡胚多数在72小时内死亡；传染性喉气管炎则是在鸡胚绒毛尿囊膜上出现清晰可见的痘斑。

第34页/共60页病料接种鸡胚中，发育迟缓，矮小，蜷缩鸡胚（下）与正常鸡胚（上）。第35页/共60页病毒的血凝性差异。新城疫病毒能够凝集鸡红细胞，传染性支气管炎病毒需经胰酶处理后才表现血凝性，而传染性喉气管炎则无血凝性。传染性支气管炎无神经症状，而新城疫常可见神经症状。第36页/共60页正文鸡胚孵化生产用毒种制备半成品的制备疫苗的配制疫苗的分装疫苗的冻干轧盖、贴签第37页/共60页鸡胚孵化（一）孵化前的准备1、孵化器

⑴、消毒若采用全进全出式的孵化器，在前后两批孵化间隔先用2—5%的84消毒液全面擦拭消毒，再用甲醛、高锰酸钾熏蒸消毒。若采用连续式孵化器，要随时检查，一经发现有破蛋污染及时挑出，并用2%~5%的84消毒液擦拭消毒。⑵、孵化器维护定期检修，发现故障及时修理，保证正常运行，使其温度、湿度分别稳定于38.0℃~38.5℃和55%~70%。⑶、检查水盘每天定期检查水盘中水的质量，定期刷洗，保证清洁。

⑷、检查进、排气孔，根据需要，调整到适当的位置。2、蛋盘

要准备足够的孵化用蛋盘，用水清洗干净，并用0.1%苯扎溴铵溶液消毒或用甲醛熏蒸消毒，备用。3、种蛋

⑴、制造活疫苗用SPF种蛋。

⑵、根据生产计划领取种蛋，挑选出合格种蛋，剔除畸形蛋、裂纹蛋、破壳蛋。4、批号

对每批孵化的种蛋都要确定孵化批号，并填写《种蛋孵化工序记录表》。第38页/共60页（二）：孵化1、入蛋将种蛋放在蛋盘并置于运蛋专用车上熏蒸消毒后，推入孵化器内。2、检查入蛋完毕，再次检查水盘内是否加满，进、排气孔是否调整好，关好孵化器门。再检查运转情况是否正常，温、湿度是否达到要求标准，确认无误后转入正常孵化。3、孵化中应作的工作⑴、需要翻蛋的，按规定时间和次数设定在翻蛋档上。⑵、每日检查、记录孵化器的温度、湿度并及时向水盘内补水。

⑶、5~7日龄照蛋一次，捡出的死胚应计数。（三）：清场与记录1、按下道工序生产计划提供孵化好的胚蛋，并办理交接手续。2、整理工作间清洁卫生，整理、消毒孵化器。3、全面填写《种蛋孵化工序记录表》第39页/共60页生产用毒种制备一、条件准备1根据要制备毒种所需物料及设备条件，进行全面准备。2按使用时间，将准备好的各种物品提前移入洁净工作间待用。3在工作开始前30～40min，打开洁净工作间的净化系统。第40页/共60页二、操作规则1毒种繁殖将毒种以灭菌生理盐水稀释100倍，尿囊腔内接种10～11日龄SPF鸡胚，每胚0.1ml。接种后30～36h活胚，收获鸡胚液（鸡胚液及羊水），装于灭菌容器内。并作无菌检验。将检验无菌、且对鸡胚毒力≥106.0EID50/0.1ml、对1%鸡红细胞凝集实验阴性的胚液作为毒种用。注明收获日期、毒种批号、代次等到。2毒种鉴定（1）病毒含量毒种对10日龄鸡胚尿囊腔内注射的感染剂量应≥106.0EID50/0.1ml。感染判定是按接种后鸡胚在24～144h全部或部分死亡，存活的鸡胚以胎儿出现失水、卷缩、发育小等特异性病痕为标准。

第41页/共60页

（2）安全性H120株毒种以105.0EID50滴鼻一滴（约0.03ml），对各种日龄SPF鸡均应安全。（3）纯净应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染。3毒种保存在—40℃以下保存，使用期应不超过1年。4毒种继代应不超过3代。三、清场和记录1工人结束后，应全面清场，对工作间、所用器具、玻璃器皿、物料及废弃物等应按规定分别进行处理。2全面填写《生产用种毒繁殖与鉴定记录表》。

第42页/共60页半成品的制备1制苗材料选择选择发育良好的10～11日龄SPF鸡胚。2鸡胚病毒液的繁殖（1）接种接种前，选出中止发育、破损等不宜接种鸡胚，将接种鸡胚置于蛋盘上，接种区用5％碘酊消毒并用打孔器钻一孔，生产用种毒用灭菌生理盐水稀释成10-2或10-3，摇匀后，用灭菌的1ml注射器吸取稀释好的毒种好的毒种液，由接种区小孔插入尿囊腔2.0～2.5cm注射0.1ml，如遇接种液倒倒流须补接。用石蜡封孔。气室向上放在塑料蛋盘上，置36～37℃继续孵育，不必翻蛋。

一、条件准备1根据半成品制备所需物料及设备条件，进行全面准备。2按使用时间，将准备好的各种物品提前移入洁净工作间待用。3在工作开始前30～40min，打开洁净工作间的净化系统。二、操作规则第43页/共60页（2）孵育与观察鸡胚接种后，30h前照蛋一次，死亡的鸡胚弃掉，30—36h后，不论鸡胚死亡与否，全部取出，气室向上直立，置于2～8℃冷却。（3）收获将冷却4～24h的鸡胚取出，用0.1%的新洁尔灭消毒后将鸡胚气室向上，直立于30孔卵盘上，在气室部位再用5.0%的碘酒消毒。以无菌手术剪去气室端蛋壳。用灭菌镊子扯破绒毛尿囊膜羊膜（勿碰破卵黄膜），以灭菌的10ml吸取鸡胚液于灭菌瓶中，加塞摇匀后，进行无菌检验。同时，按比例从各瓶中吸取样品供半成品检验用。3半成品检验（1）无菌检验将每组鸡胚液分别取样，一组接种于TG、GA、小管培养基各1支，每支接种0.2ml，置37℃，另一组接种TG、GA、GP小管培养基各1支，置25℃培养观察5～7天，；应无细菌生长第44页/共60页（2）病毒含量测定将各组等量混合的鸡胚液，用灭菌生理盐水作10倍列稀释，取10-5，10-6，10-7三个稀释度，每个稀释度尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚5枚，0.1ml/胚，同时设5枚未接种胚做为健康对照用，置36～37℃继续孵育，24h以前死亡鸡胚弃去不计，在24～144h死亡或144h仍存活的鸡胚，逐个取出观察胎儿是否具有失水卷缩、发育小，计算EID50

，应≥106.0EID50/0.1ml判为合格。方能配苗。三、清场和记录1工作结束后，应全面清场，对工作间、用器具、玻璃器皿、物料及废弃物等应按规定分别进行处理。2全面填写相关记录。第45页/共60页

疫苗的配制一、条件准备1根据配制疫苗所需物料及设备条件，进行全面准备。2按使用时间，将准备好的各种物品提前移入洁净工作间待用。3在工作开始前30～40min，打开洁净工作间的净化系统。4将检验合格的半成品于配苗前取出，融化待用。二、操作规则1取出半成品和冻干稳定剂将融化了的半成品及经无菌检验合格的冻干稳定剂取出，放到100级工作台上。2配苗将检验合格的半成品混合于同一灭菌容器中，按比例加入检验合格的冻干稳定剂，进行无菌检验，同时加适量抗生素充分摇匀后，供分装用。第46页/共60页三、清场和记录1工作结束后，应全面清场，对工作间、使用器具、玻璃器皿、物料及废弃物等应按规定分别进行处理。2全面填写相关记录。第47页/共60页疫苗的分装一、配苗分装流程

1.分装指令

2.领取生产用物料

3.设备调试与维护

4.卫生清洁消毒

5.器材处理

6.卸胶塞

7.分装

8.清场第48页/共60页第49页/共60页第50页/共60页第51页/共60页疫苗的冻干冷冻干燥的程序是这样的：在冻干之前，把需要冻干的产品分装在合适的容器内，一般是玻璃或安瓿装量要均匀，蒸发表面尽量大而厚度尽量薄些；然后放入与冻干箱尺寸相适应的金属盘内，装箱之前，先将冻干箱进行空箱降温，然后将产品放入冻干箱内进行预冻，抽真空之前要根据冷凝器冷冻机的降温速度提前使冷凝器工作，抽真空时冷凝器应达到-40℃左右的温度，待真空达到一定数值后（通常应达到100μmHg以上的真空度），即可对箱内产品进行加热。一般加热分两步进行，第一步加温不使产品的温度超过共熔点的温度；待产品内水份基本干燥完后进行第二步加温，这时可迅速地使产品上升的规定的最高温度。在最高温度保持数小时后，即可结束冻干。第52页/共60页第53页/共60页轧盖贴签轧盖包装流程

1.包装指令6.轧盖

2.领取铝盖7.贴签

3.设备调试8.入盒装箱

4.卫生清洁消毒9.清场

5.铝盖清洗烘干10.物料平衡计算/记录填写11.退料

第54页/共60页第55页/共60页第56页/共60页贴签机操作（1）操作前准备①根据生产要求在印字机上安装合适的字粒，并检查色带长度，如果太短更换新色带。②合上电源开关，打开压缩空气阀门，给印字机预热。③将瓶签领