无菌检查操作规程

第第1014页无菌【2】检讨操作规程目标树立无菌检讨标准操作规程,确保检讨成果准确.靠得住.应用规模本公司无菌产品的无菌检讨职责QC依据20231101GB/T19973.2-2023〔ISO11737-2:1998〕2局部：确认灭菌进程的无菌试验》GB/T14233.2-2023 2局部：生物学试验方法》内容无菌检讨情形保障无菌检査的全部操作均需在严峻把握微生物污染的情形下进展,即无菌检10000100或隔离体系中进展.操作情形的无菌保障程度将直接影响无菌检讨成果,为了保证无菌检讨用干净室〔区〕〔区〕的情形按期监测并实行合理的措施保证干净情形相符恳求.无菌检讨全进程必需严峻遵照无菌操作,防止微生物污染.干净区的温度.湿度等参数必需相符响应干净级别的恳求.无菌检讨操作还必要对检讨情形进展监控,造就基.稀释液.缓冲液硫乙醇酸盐流体造就基,市售造就基干粉.除尚有划定,接种后应置30~35℃造就.胰酪大豆胨液体造就基,市售造就基干粉.接种后应置20~35℃造就.中和或灭活用造就基,按上述硫乙醇酸盐流体造就基或胰酪大豆胨液体造外表活性剂,其用量同方法有用性试验.胰酪大豆胨琼脂造就基,市售造就基干粉.沙氏葡萄糖液体造就基,市售造就基干粉.沙式葡萄糖琼脂造就基,市售造就基干粉.PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液,市售造就基干粉.0.9%无菌氯化钠溶液.5.2.9. 造就基应用性检讨无菌检査用的硫乙醇酸盐流体造就基和胰酪大豆胨液体造就基等应符造就基的无菌性检査及敏锐度检査的恳求.本检讨可在供试品的无菌检査或与供试品的无5.2.9.1.无菌性检讨：每批造就基随机取5.2.9. 造就基应用性检讨无菌检査用的硫乙醇酸盐流体造就基和胰酪大豆胨液体造就基等应符造就基的无菌性检査及敏锐度检査的恳求.本检讨可在供试品的无菌检査或与供试品的无5.2.9.1.无菌性检讨：每批造就基随机取5支〔瓶〕,按各造就基划定的温度下14天,应无菌进展.5.2.9.2.敏锐度检讨5.2.9.2.1.菌种：造就基敏锐度检讨所用的菌株传代数不得超过5代(从菌种存0〕,并承受适宜的菌种保藏技巧进展保存,以证明验菌株的生物学特征.金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]铜绿假单胞菌[CMCC(B)10证明验菌株的生物学特征.金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]生孢梭菌[CMCC(B)64941]白色念珠菌[CMCC(F)98001]黑曲霉[CMCC(F)98003]菌液制备：接种金色葡萄球菌.铜绿假胞菌.枯草芽孢杆菌的造就物至胰酪大豆胨液体造就基中或胰酪大豆胨琼脂造就基上,接种生孢梭菌30〜3518〜24小时;接种白色念珠菌的造就物至沙氏葡萄糖液体造就基中或沙氏葡萄糖琼脂造PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成〕的菌悬液.接种黑曲霉的造就物至沙氏葡萄糖琼脂3〜5ml0.05%(ml/ml)聚山梨80pH7.00.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱.然后,承受适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用0.05%0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数目小于100cfu的孢子悬液.菌悬液假设在室温2〜824h内应用.黑曲霉孢2〜8℃,在验证过的贮存期内用.12ml7支,分别.铜绿假单胞菌.2支,1支不接种作为空白比照,造就3天;取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体7支,100cfu的草芽孢杆菌.白色念珠菌.黑曲霉各2支,1支不接种作为空白比照,5天.每日不雅察结.,,解释该造就基敏锐度相符划定.方法试用性试验进展产品无菌检讨时,应进展方法有用性试验,以确认所承受的方法适宜于产品的无菌检讨.假设磨练程序或产品产生化可能影响磨练成果时,应从5.4供试品的无菌检讨”的划定及以下恳求进展操作.对每一试验菌应一一进展方法.菌种及菌液的制备：大肠埃希菌[CMCC(B)44102]外,金黄色葡萄球菌.枯草芽孢杆菌.生孢梭菌.白色念珠菌.5.2.9.2造就基敏锐度检讨”.大肠埃希菌的菌液制同金黄色葡萄球菌.薄膜过滤法：每种造就基划定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤,冲洗,在最终一次的冲洗液中参与小于100cfu试验菌,过滤.加硫乙醇酸盐流体造就基或胰酪大豆胨液体造就基至滤筒内.另取一装有同体积造就基的容器,参与等量试验菌,作为比照.置划定温度下造就,5天,各试验菌同法作.直接接种法：取符直接接种法造就基用量恳求的硫乙醇酸盐流体造就基2管,取符直接接种法造就基用量恳求的胰酪大豆胨液体造就基6管,分别21接入每支造就基划定的供试品接种量,另1管为难刁难比,置划定的温度5释供试品的磨练量在磨练前提下无抑菌感化或其抑菌感化可以疏忽不计,照此检査方法和检讨前提进展供试品的无菌检讨.如供试品的任一容器中的试验菌进展微弱.缓慢或不进展,则解释供试品的磨练量在磨练前提下有抑菌感化,应承受增长冲洗量.增长造就基的用量.用中和剂或灭活剂.改换滤膜品种等方法,去除供试品的抑菌感化,并从进展方法有用性试验.方法有用性试验与供试品的无菌检讨同时进展.供试品无菌检讨无菌检査法括薄膜过滤法和直接接种法.只要供试品性质许可,应承受薄膜过滤法.供试品无菌检讨所承受的检讨方法和磨练前提应与方法有用性试验确认的方法雷同.无菌试验进程中,假设需用面活性剂.灭活剂.中和剂等试剂,应证明其有用性,且对微生物无毒性.磨练数目：除尚有划定外,1划定.磨练量：即接种量,除尚有划定外,2划定.阳性比照：应依据供试品特征选择阳性比照菌：无抑菌感化及抗革兰氏阳性菌为主的供试品,以金色葡萄球菌为比照菌;抗革兰氏阴性菌为主的供试品,以大肠埃希菌为比照菌;抗厌氧菌的供试品,以生孢梭菌为比照菌;抗真菌的供试品,以白色珠菌为比照菌.阳性比照试验的菌液制同“5.2.9.2造就基敏锐度检讨”,加菌量小于100cfu,供试品用量同供试品无菌检讨时每份造就基接种的样品量.72小时内应进展优越.阴性比照：供试品无菌检讨时,应取响应溶剂和稀释液.冲洗液同法操作,作为阴性比照.阴性比照不得有菌进展.5.4.5. 5.4.5. 供试品的处理及接种造就基操作时,用适宜的消毒液对供试品容器面进展彻消毒,如供试品容器内有必定的真空度,可用适宜的无菌器材(如带有除菌过滤的针头向容器内导入无菌空气,再按无菌操作启开容器掏出内物.5.4.5.1.薄膜过滤法：薄膜过滤法一般应承受关闭式薄膜过滤操作时,用适宜的消毒液对供试品容器面进展彻消毒,如供试品容器内有必定的真空度,可用适宜的无菌器材(如带有除菌过滤的针头向容器内导入无菌空气,再按无菌操作启开容器掏出内物.5.4.5.1.薄膜过滤法：薄膜过滤法一般应承受关闭式薄膜过滤.无菌检査用的滤膜孔径应不大于0.45um,直径约50mm.依据供试品及其溶剂的特征选择滤膜材质.应用时,应保证滤膜在过滤前后的完全性.水溶性供试品：水溶性供试液过滤前应先将少量的冲洗液过滤,以润湿滤膜.取划定量,直接过滤,100ml适宜的稀释液的无菌容器中,混匀,马上过滤.如供试品有抑菌感化,须用冲洗液冲洗滤膜,冲洗数一般不少于3次〔每滤膜每次冲洗量一般为100ml,且冲洗量不得1000ml,以避开滤膜上的微生物受毁伤〕,所用的冲洗量.冲洗方法同方法有用性试验中确定的.除生物成品外,一般样品冲洗后,1份滤器中加人100ml硫乙醇酸盐流体造就基,1份滤器中参与100ml胰酪大豆胨液体造就基.非水溶性供试品：取划定量,直接过滤;或混杂溶于适量含聚山梨酯80或其他适宜乳化剂的稀释液中,充分混杂,马上过滤.用含0.1%〜1%聚山梨酯80的冲洗液冲洗滤膜至少3次.参与含或不含聚山梨酯80的造就基.接种造就基照水溶液供试品项下的方法作.具有导管的医疗器具〔.输液袋等〕,每个最小50〜100ml冲洗液分别冲洗内壁,收集冲洗液于无菌容器中,然后照水溶液供试品项下方法作.同时应承受直接接种法进展装中所配带的针头.针管的无菌检査.直接接种法：直接接种法有用于无法用薄膜过滤法进展无菌检査的供试品,即取划定量供试品分别等量接种至硫乙醇酸盐流体造就基和胰酪大豆胨液体造就基中.除生物成品外,一般样品无菌检讨时两种造就基接种的瓶或支数雷同.除尚有划定外,每个容器中造就基的用量不得大于接种到该容器中的供试品体积的10倍,同时,硫乙醇酸流体造就基每管装量不15ml,胰大豆胨液体造就基每管装量不少于10ml.供试品检査时,造就基的用量和髙度同方法有用性试验中确定的.灭菌医用器具供试品：取划定量,必要时应将其拆散或切成小碎段,等量接种于各管以浸没供试品的适量造就基中.造就及不雅察：将上述接种供试品后的造就基容器分别按各造就基划定试品后或在造就进程中,造就基消逝污浊,造就14天后,不能从外不雅上3色,镜检,断定是否有菌.成坚打算阳性比照管应进展优越,阴性比照管无菌进展,供试品管都无菌进展,则供试品相符划定.,阴性比照管无菌进展,供试品管中有随便率性一管有菌进展,则供试品不相符划定.,阴性比照管无菌进展,供试品管污浊,经确实无菌进展,则供试品相符划定;经确证有菌进展,则供试品不相符划定.有以下情形的,判试验无效.的恳求.回想无菌试验进程,制造有可能引起微生物污染的身分,并且已经确证.供试品管中进展的微生物经剖断后,确证是因无菌试验中所用的物品和〔或)无菌操作技巧不当引起的.试验假设经确认无效,则应重试.重试时,从取同量供试品,依法检讨,假设无菌进展,判供试品符划定;如有菌进展,判供试品不符划定.相干文件《干净区尘埃粒子监测操作规程》《干净区沉降菌监测操作规程》《试验室干净区干净.消毒操作规程》《干净区情形监测治理规程》《ZW型集菌仪应用.保护操作规程》《SPX-150型生化造就箱应用.保护操作规程》《MJK-150型霉菌造就箱应用.保护操作规程》《SW-CJ系列干净工作台应用.保护规程》《阳性菌种治理规程》记载《 无 菌 检 讨 原 始 记 载 》附表：表1：批出厂产品的起码磨练数目供试品批产量接种每种造就基的起码磨练数目≦1004件〔取较多者〕医疗器具100<N≦50010件＞5002%20件〔取较少者〕注：表中起码磨练数目不包括阳性比照用的供试品数目2：供试品的起码磨练量供试品 供试品装量外科用敷料棉花及纱布医疗器具 带导管的一次医疗器具其他医疗器具

基的起码量100mg全部材料〔注〕二分之一内外表积〔注〕〔切碎或拆散开〕注：假设医疗器械体积过大造就基用量可再2023ml以上将其全部完全浸没.无菌检讨原始记载〔薄膜过滤法〕起源

型号规格灭菌批号检品数目

产品数目磨练日期 年月日磨练成果

年月日磨练依据 《无菌检讨标准操作规程》造就基： 硫乙醇酸盐流体造就基配制批号：胰酪大豆胨液体造就基配制批号：稀释液冲洗液：□0.1%蛋白胨水溶液□PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液阳性比照菌菌液：取比照菌颖造就物,接种至适量的0.9%无菌氯化钠溶液中,取1ml进展10倍系列稀释,取稀释液作为比照菌液.cfu/ml仪器装备：□ZW-808A型集菌仪 仪器编号：□MJX-150霉菌造就箱〔20~25℃〕仪器编号：仪器编号：无菌集菌器：净化工作台情形监测温度：℃湿度：%沉降菌标准〔造就温度：30~35℃〕：<1cfu/皿碟号造就时间48h菌落数造就基

11 2 3 4 5

26 7 8

39 10 11

成坚打算12 13 14样品硫乙醇酸盐流体造就基 阳性〔30~35℃〕阴性胰酪大豆胨 样品液体造就基〔20~25℃〕 阴性,集菌器中有菌进展则填“+”,无菌进展则填“-”成果剖断：本品按《无菌检讨标准操作规程》依法检讨,成果磨练人/日期： 复核人/日期：第第114页无菌检讨原始记载〔直接接种法〕磨练编号：起源

产品数目磨练日期 年月日完成日期磨练成果〔第一页〕

年月日磨练依据 《无菌检讨标准操作规程》造就基： 硫乙醇酸盐流体造就基配制批号：胰酪大豆胨液体造就基配制批号：稀释液冲洗液：□0.1%蛋白胨水溶液□PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液阳性比照菌菌液：取比照菌颖造就物,0.9%无菌氯化钠溶液中,1ml进展10倍系列稀释,取稀释液作为比照菌液.cfu/ml仪器装备：□MJX-150〔20~25℃〕〔30~35℃〕仪器编号：净化工作台情形监测温度：℃湿度：%沉降菌标准〔造就温度：30~35℃〕：<1cfu/皿碟号造就时间48h菌落数造就天数造就基 管号123

11 2 3 4

25 6 7

38 9 10

成坚打算11 12 13 14硫乙醇酸盐流体造就基 4〔30~35℃ 5〕678