细胞融合和单细胞克隆

细胞融合和单细胞克隆第一页，共二十七页，2022年，8月28日教学目标了解动物细胞融合的原理、过程和意义。理解单克隆抗体制备的过程和应用第二页，共二十七页，2022年，8月28日重点难点1.教学重点：单克隆抗体的制备和应用2.教学难点：单克隆抗体的制备过程第三页，共二十七页，2022年，8月28日问题探讨

“番茄—马铃薯”（理想图）

通过长期的实验，科学家们采用体细胞杂交技术获得了“番茄—马铃薯”植株。第四页，共二十七页，2022年，8月28日如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？动物细胞也能融合吗？第五页，共二十七页，2022年，8月28日教学过程一.动物细胞融合1.动物融合的过程请同学们阅读课本P52动物融合第六页，共二十七页，2022年，8月28日

动物细胞融合过程示意图不同DNA的两个细胞

灭活的病毒有丝分裂两个完整的杂交细胞第七页，共二十七页，2022年，8月28日灭活病毒诱导细胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。第八页，共二十七页，2022年，8月28日思考题1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？

酶解法，如纤维素酶或果胶酶2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、电激等物理方法；PEG等化学方法4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能还可以利用灭活的病毒进行诱导5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能第九页，共二十七页，2022年，8月28日7.你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？思考题

利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞8.在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？

生产单克隆抗体6.你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？第十页，共二十七页，2022年，8月28日主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株主要用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合

细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性细胞融合的原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较第十一页，共二十七页，2022年，8月28日2.动物细胞融合的概念

动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞。第十二页，共二十七页，2022年，8月28日二、动物细胞融合（细胞杂交）－2个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程细胞A细胞B杂种细胞灭活的病毒物理法化学法仙台病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒离心振动电激聚乙二醇第十三页，共二十七页，2022年，8月28日提问？1.抗体是由何种细胞产生的？效应B细胞（浆细胞）。2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3.一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？动物在免疫反应过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上。4.简述获得抗体的传统途径？抗原动物体抗体抗原不纯抗体不纯二、单克隆抗体刺激浆细胞第十四页，共二十七页，2022年，8月28日6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？

体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这个问题？5.这种方法获得的抗体有什么缺陷？产量低，纯度低，特异性差第十五页，共二十七页，2022年，8月28日1.设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能够无限增殖杂种细胞二、单克隆抗体2.制备过程：第十六页，共二十七页，2022年，8月28日免疫小鼠培养骨髓瘤细胞融合骨髓瘤细胞B淋巴细胞注射特定抗原蛋白选择培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性注射到小鼠体内体外培养单克隆抗体克隆杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞

单克隆抗体制备过程示意图多种杂交细胞第十七页，共二十七页，2022年，8月28日

单克隆抗体制备过程

注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体第十八页，共二十七页，2022年，8月28日3.单克隆抗体的应用：

①在基础理论研究中具有重要意义

②在疾病诊断、治疗和预防方面，具有

③生物导弹二、单克隆抗体特异性强、灵敏度高等优越性。第十九页，共二十七页，2022年，8月28日用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”，灵敏度很高，在妊娠第8天就可以做出诊断，比原来的诊断方法提前了10天左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90％以上。第二十页，共二十七页，2022年，8月28日第二十一页，共二十七页，2022年，8月28日知识结构两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法－－灭活的病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势第二十二页，共二十七页，2022年，8月28日教学反馈1.动物细胞融合技术最重要的用途是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞B2.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （）

A.B淋巴细胞B.T淋巴细胞C.骨髓瘤细胞D.杂交瘤细胞

D3.（多选）1975年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是 （）

A.效应B细胞B．T淋巴细胞

C.骨髓瘤细胞D．杂交瘤细胞

ABCD第二十三页，共二十七页，2022年，8月28日B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC

4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。(1).该实验方案的目的是：________________(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？(3).A是从小鼠的脾脏中取得__________该细胞能够产生______。(4).图中B为________________过程，常用_________________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。(5).C过程指细胞培养，该过程包括________培养和__________培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。B淋巴细胞抗体细胞融合灭活的病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代50第二十四页，共二十七页，2022年，8月28日课后习题1.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A.②④B.①③⑤

C.①②③④

D.②③

C2.动物细胞融合和植物原生质融合决定于()

A.细胞膜的流动性B．细胞膜的选择透过性

C.细胞质的流动性D．细胞质酶的活性A一.选择题第二十五页，共二十七页，2022年，8月28日3.“生物导弹”是指 （）A.单克隆抗体B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞D.在单克隆抗体上连接抗癌药物

D4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是 （）

A．PEG

B．灭活的病毒C．电刺激D．离心A二.简答题1.淋巴细胞是由动物体---------------------中的---------------------细胞分化发育而来的。2.杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是---------------------骨髓造血干主动运输第二十六页，共二十七页，2022年，8月28日三.思考与探究1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？提示：植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。

提示：哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动