实验二血红蛋白测定白细胞计数实验详解演示文稿

实验二血红蛋白测定白细胞计数实验详解演示文稿新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第一页，共二十四页。（优选）实验二血红蛋白测定白细胞计数实验新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第二页，共二十四页。实验内容一血红蛋白测定【原理】在血红蛋白转化液中，除硫化血红蛋白外，其余血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与氰离子（CN-）结合，生成稳定的复合物氰化高铁血红蛋白（hemoglobincyanide，HiCN）。棕红色的氰化高铁血红蛋白在波长540nm处有吸收峰，可用校准的高精度分光光度计进行直接测定，或用HiCN参考液进行比色法测定，根据标本的吸光度即可求出血红蛋白浓度。新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第三页，共二十四页。【材料】1．器材：采血针、试管、刻度吸管、微量吸管、吸头、分光光度计。

2．试剂：氰化高铁血红蛋白(HiCN)转化液（文齐液）新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第四页，共二十四页。【实验方法】（1）取血20μl，加入5ml转化液中充分混匀，静置5min。（2）分光光度计，波长540nm处，光径（比色杯内径）1.0厘米，HiCN转化液或蒸馏水调零，测定吸光度（A）。（3）计算：Hb（g／L）＝测定管吸光度×64458／44000×251＝测定管吸光度×367.7。

注：式中：64458是国际公认的血红蛋白分子量，64458mg/L即为1mmol/L血红蛋白的物质浓度，除以1000换算为g/L。

44是1mmol/L血红蛋白在1.00cm光径，540nm条件下的吸光系数。251是稀释倍数。实验内容新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第五页，共二十四页。实验内容分光光度计使用：

1．打开722分光光度计的开关，将比色池的盖子打开，通电20分钟使仪器预热。以722型分光光度计为例，其基本的操作步骤为：2．将波长旋至测定的波长。新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第六页，共二十四页。新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第七页，共二十四页。新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第八页，共二十四页。3．将空白液、校准液或待测液放入比色池，将空白液置于光路中。

新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第九页，共二十四页。4．将开关置于T位，打开比色池盖子，用光量粗调和光量细调调节T为0.0，关上比色池盖子，调节T为100.0。

新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第十页，共二十四页。新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第十一页，共二十四页。新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第十二页，共二十四页。5．将开关置于A，用消光调零调节A为0.0。6．将校准液或待测液推入光路，测量溶液的吸光度（A）。新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第十三页，共二十四页。实验内容二白细胞测定【原理】用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液注入血细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量。新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第十四页，共二十四页。【材料】1．器材（1）采血针、微量吸管、吸头、试管、5ml吸管（2）普通光学显微镜（3）计数板、盖玻片（专用）改良Neubauer计数板，有两个计数池。每个计数池分为九个大方格。每个大方格的边长为1mm，高度为0.1mm，面积为1mm2,容积为0.1mm3。四角的每个大方格被分为16个中方格；中央大方格被分为25个中方格，而每个中方格又被分为16个小方格。新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第十五页，共二十四页。Whitecellcount(WBC)coverslip

Theareaofcountingis1mm2andthedepthofitis0.1mm,sothevolumeis0.1ul.(1mm3=1uL)CountingChamber’sstructure0.1mmdeep新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第十六页，共二十四页。新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第十七页，共二十四页。Whitecellcount(WBC)CountingareaCountingruler1mm1mm新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第十八页，共二十四页。2．试剂白细胞稀释液：冰乙酸2.0ml10g/L亚甲蓝数滴蒸馏水加至100ml新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第十九页，共二十四页。【实验方法】1、加白细胞稀释液0.38ml于一小试管中。2、用微量吸管吸取20ul血液。擦去微量吸管外余血，将其插入稀释液底部，轻轻将血放出，并吸取上清液洗涤微量吸管3次（注意每次不能冲浑稀释液），混匀。3、用微量吸管或玻璃棒取混匀的细胞悬液1滴，充入计数池与盖片的缝隙中，静置2-3min，使白细胞下沉。4、低倍镜计数四角4个大方格内白细胞总数，数细胞规则“数上不数下，数左不数右”。新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第二十页，共二十四页。5、计算白细胞/L=N/4×10×20×106/L=N×0.05×109/L式中：N为4个大方格内白细胞总数

÷4为1大方格（即0.1ul）内白细胞记数

×101个大方格的容积为0.1ul，换算成1ul×20血液的稀释倍数

×106

将ul换算成L新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第二十一页，共二十四页。注意事项：

1计数池内细胞分布每大方格数不能超过四大格均值的+10%，白细胞数小于3×109/L时要扩大计数区域或重新加倍取血计数；白细胞大于15×109/L时，要增加稀释倍数，重新计数。

2当外周血出现大量有核红细胞时应予以校正：白细胞校正值/L=（100/100+有核红细胞）×校正前白细胞数新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第二十二页，共二十四页。【结果】将你计算出的结果如实的填写在实验报告册上。新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室第二十三页，共二十