分子生物学：核酸分子杂交技术

1核酸分子杂交技术

nucleicacidhybridization

医学分子生物学.第八章2主要内容第一节核酸杂交概述及基本原理第二节核酸探针技术第三节核酸分子杂交技术第四节基因芯片3核酸定性或定量检测基因克隆、突变及其表达研究疾病的临床诊断主要用途4第一节核酸杂交概述及基本原理

一、核酸杂交概述二、核酸变性三、核酸复性四、核酸分子杂交51961年Hall等建立核酸杂交技术，探针与靶序列溶液中杂交，通过平衡密度梯度离心分离杂交体；60年代中期Nygaard等的研究为应用标记DNA或RNA探针检测固定在硝酸纤维素（NC）膜上的DNA序列奠定了基础；70年代末期到80年代早期，分子克隆技术的出现，各种质粒和噬菌体DAN载体系统的构建，使特异性DNA探针的来源变得十分丰富。第一节核酸杂交概述及基本原理

一、核酸杂交概述

680年代中期，PCR技术的发明与核酸分子杂交有机的结合，又使得核酸分子杂交技术的灵敏度大大提高；90年代，基因芯片技术的出现使得一次性对大量样品序列进行检测和分析成为可能，从而解决了传统核酸印迹杂交技术操作繁杂、自动化程度低、操作序列数量少、检测效率低等不足。第一节核酸杂交概述及基本原理

一、核酸杂交概述

7第一节核酸杂交概述及基本原理

一、核酸杂交概述-核酸的结构

一级结构：核苷酸的排列顺序稳定键：磷酸二酯键二级结构：双螺旋结构稳定键：氢键、碱基堆积力、疏水键高级结构：染色体8CGA一级结构二级结构高级结构9第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性

变性（denaturation）:在某些理化因素的作用下，维系DNA分子二级结构的氢键和碱基堆积力受到破坏，DNA由双螺旋变成单链过程。化学键变化：维持双螺旋稳定的氢键和疏水键发生断裂，断裂可以是部分的或全部的，可以是可逆的或是非可逆的化学结构变化：DNA变性改变了其空间结构，不涉及到其一级结构的改变1011加热极端的pH有机试剂（甲醇、乙醇、尿素、甲酰胺等）DNA的变性因素：凡能破坏双螺旋稳定性的因素都可以成为变性的条件第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-DNA的变性因素12变性能导致DNA的一些理化性质及生物学性质发生改变第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-变性DNA的性质

溶液黏度降低DNA双螺旋是紧密的“刚性”结构，变性后代之以“柔软”无规则单股线性结构，DNA黏度明显下降溶液旋光性发生改变变性后DNA分子的对称性及局部构型改变紫外吸收增加DNA变性后，DNA溶液的紫外吸收增强双链DNA＜单链DNA＜单核苷酸13DNA的紫外吸收光谱增色效应（hyperchromiceffect）：DNA变性时其溶液OD260增高的现象第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-变性DNA的增色效应14DNA分子在250－280nm波长具有吸收紫外光的特性，其吸收峰值在260nm紫外吸收的结构基础是：DNA分子中碱基间电子的相互作用，变性后，双链解开，碱基间电子的相互作用更有利于紫外吸收，产生增色效应增色效应可以作为DNA变性的指标不同来源DNA的变化不一，如大肠杆菌DNA经热变性，其260nm的吸光度值可增加40%以上，其它不同来源的DNA溶液的增值范围大多在20－30%之间第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-变性DNA的增色效应15第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-解链曲线通常利用DNA变性后在波长260nm处吸光度（A260）的增加来监测DNA变性的过程。如果以温度对A260的关系作图，所得的曲线称为解链曲线。典型DNA变性曲线呈S型16第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-融解温度增色效应与温度有十分密切的关系，这主要是变性温度取决于DNA自身的性质。融解温度（meltingtemperature，Tm）：在热变性过程中，紫外吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度或融解温度17特点：爆发式：热变性是在变性温度范围内突发的跃变过程，很像结晶达到熔点时的融化现象，故名融解温度狭窄性：变性温度范围很小第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-融解温度18Tm的影响因素：

1．DNA分子大小和碱基的组成

2．溶液的离子强度

3．pH值

4．变性剂

DNA复杂度对Tm的影响第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-融解温度19（一）DNA分子大小和碱基的组成不同来源DNA间的Tm存在差别，在溶剂相同的前提下，这种差别主要是由DNA本身下列两方面的性质所造成的DNA的均一性DNA的（G+C）含量第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-融解温度20DNA的均一性有二种含义DNA分子中碱基组成的均一性：如人工合成的只含有一种碱基对的多核苷酸片段，与天然DNA比较，其Tm值范围就较窄。因前者变性时氢键断裂几乎可“齐同”进行待测DNA样品组成的均一性：如样品中只含有一种病毒DNA，其Tm值范围较窄，若混有其它来源的DNA，则Tm值范围较宽第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-融解温度21DNA的（G+C）含量在溶剂固定的前提下，Tm值的高低取决于DNA分子中的（G+C）的含量（G+C）含量越高，G-C碱基对越多，Tm值越高。因G-C碱基对具有3对氢键，而A-T碱基对只有2对氢键，DNA中（G+C）含量高显然更能增强结构的稳定性，破坏G-C间氢键需比A-T氢键付出更多的能量。

第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-融解温度22Tm与（G+C）含量的关系Tm与DNA中（G+C）含量存在着密切相关性Tm与（G+C）含量（X）百分数的这种关系可用以下经验公式表示（DNA溶于0.2mol/LNaCl中）:

Tm=69.3+0.41（G+C）%核苷酸≤20bpTm=4（G+C）+2（A+T）第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-融解温度23（二）溶液的离子强度溶液中离子与DNA分子中磷酸基团形成离子键，需要较高温度才能使DNA变性离子强度较低时，Tm值较低，而且解链的温度范围也较宽第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-融解温度24（三）pH值pH值影响氢键的形成pH值在5-9范围内，Tm值变化不明显。当溶液pH值小于4时或大于11时，均不利于氢键的形成，DNA容易变性

第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-融解温度25（四）变性剂干扰碱基堆积力和氢键的形成，因此可以降低Tm值。常用的变性剂有甲酰胺、尿素、甲醛等

第一节核酸杂交概述及基本原理

二、核酸变性-融解温度26双链DNA、RNA双链区、DNA:RNA杂交双链（hybridduplex）以及其它异源双链核酸分子（heteroduplex）都具有此性质第一节核酸杂交概述及基本原理

三、核酸复性复性（renaturation）：指变性DNA在适当条件下，二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象，它是变性的一种逆转过程退火（annealing）：热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性，此过程称之为“退火”。27DNA的复性不仅受温度影响，还受DNA自身特性等其它因素的影响：第一节核酸杂交概述及基本原理

三、核酸复性-影响因素温度和时间DNA浓度DNA分子大小和复杂度离子强度28温度和时间一般认为比Tm低25℃左右的温度是复性的最佳条件，越远离此温度，复性速度就越慢复性时温度下降必须是一缓慢过程，若在超过Tm的温度下迅速冷却至低温（如4℃以下），复性几乎是不可能的第一节核酸杂交概述及基本原理

三、核酸复性-影响因素29DNA浓度

DNA复性的第一步是两个单链分子间的相互作用“成核”“成核”速度与DNA浓度的平方成正比溶液中DNA分子越多，相互碰撞结合“成核”的机会越大第一节核酸杂交概述及基本原理

三、核酸复性-影响因素30DNA分子大小和复杂度用非重复碱基对（bp）数表示核酸分子的复杂性。多聚（A）的复杂性为1，重复的（ATGC）n组成的多聚体的复杂性为4，分子长度是105核苷酸的非重复DNA序列的复杂性为105原核生物基因组均为非重复顺序，故以非重复核苷酸对表示的复杂性直接与基因组大小成正比真核生物基因组中的非重复片段也是如此第一节核酸杂交概述及基本原理

三、核酸复性-影响因素31DNA顺序的复杂性对复性的影响简单顺序的DNA分子，如多聚（A）和多聚（T）这二种单链序列复性时，互补碱基的配对较易实现顺序复杂的DNA，如小牛DNA的非重复部分（一般以单拷贝存在于基因组中），这种复杂的特定序列要实现互补，显然要比上述简单序列困难得多第一节核酸杂交概述及基本原理

三、核酸复性-影响因素32离子强度对复性的影响增加盐浓度可增加互补链合成双链的速度，盐中和DNA单链中磷酸基团的负电荷，减少互补链静电排斥第一节核酸杂交概述及基本原理

三、核酸复性-影响因素33第一节核酸杂交概述及基本原理

四、核酸分子杂交核酸杂交示意图

核酸分子杂交（molecularhybridization）:两条DNA链或两条RNA链或一条DNA链和一条RNA链按碱基互补的原则缔合成异质双链的过程称为分子杂交或核酸分子杂交34杂交的本质：就是在一定条件下使互补核酸链实现复性利用探针（probe）与靶DNA杂交，可识别靶DNA中的特异核苷酸序列第一节核酸杂交概述及基本原理

四、核酸分子杂交35第二节核酸探针技术一、核酸探针的类型二、核酸探针的标记三、标记探针的纯化和检测36第二节核酸探针

一、核酸探针的类型核酸探针（nucleicacidprobe)：是指能与特定核苷酸序列发生特异性互补杂交，杂交后可用特殊方法检测的已知被标记的核酸分子37选择探针的最基本的原则高度特异性探针的来源是否方便制备探针的难易程度第二节核酸探针

一、核酸探针的类型38第二节核酸探针

一、核酸探针的类型核酸探针的类型基因组DNA探针cDNA探针RNA探针寡核苷酸探针39来源：这类探针来源于某种生物的基因组，多为某一基因的全部或部分序列制备方法:基因克隆的方法聚合酶链反应(PCR)特点:多为克隆在载体中的DNA片段，可无限繁殖，取之不尽PCR制备探针简便和省时相对RNA而言，DNA探针不易降解，标记方法也较成熟第二节核酸探针

一、核酸探针的类型-基因组DNA探针40cDNA(complementaryDNA)：是指与mRNA互补的DNA分子特点:不存在内含子和高度重复序列，是一种较理想的核酸探针，尤其是用于基因表达的研究排除了RNA酶的影响，现已成为分子生物学实验室的常规实验探针第二节核酸探针

一、核酸探针的类型-cDNA探针41RNA探针与靶序列的杂交效率较高，稳定性也高RNA分子大多以单链形式存在，几乎不存在互补双链的竞争结合RNA分子中不存在高度重复序列，非特异性杂交少，杂交后未杂交的探针分子水解可用RNA酶去除，本底的干扰低。RNA探针有易降解和标记方法复杂等缺点，限制了其广泛应用。

第二节核酸探针

一、核酸探针的类型-RNA探针42

特点:根据需要来合成相应的核酸序列，避免天然探针的缺点探针长度一般为10～50bp尤其适合点突变的检测由于探针的长度较短，特异性较低，杂交信号较弱，但经过精心设计仍可设计出非常特异的寡核苷酸探针第二节核酸探针

一、核酸探针的类型-寡核苷酸探针43

探针长度：一般要求在10～50bp

G／C含量为40％～60％探针分子中应避免互补序列避免同一碱基连续出现，一般不能多于4个，如GGGG-或-CCCC-

借助计算机相应软件与已知的各种基因序列进行同源性比较

第二节核酸探针

一、核酸探针的类型-设计原则44理想的探针标记物应具有以下特点检测物要灵敏、特异、稳定、简便标记物与探针结合后，应不影响杂交反应，尤其是杂交特异性、稳定性和Tm值标记物对环境污染小，对人体无损伤，价格低廉标记物对检测方法无干扰。

第二节核酸探针

二、核酸探针的标记451.缺口平移法（双链）2．随机引物法（单链）第二节核酸探针

二、核酸探针的标记-放射性同位素标记

463．DNA探针的末端标记

T4DNA聚合酶标记3′-端DNA探针第二节核酸探针

二、核酸探针的标记-放射性同位素标记

474．单向体外转录制备RNA探针

第二节核酸探针

二、核酸探针的标记-放射性同位素标记

48

过碘酸钠法原理，由于HRP是一种带糖的酶（比较分散），过碘酸钠可将糖中的羟基氧化为醛基后与抗体连接，再加入硼氢化钠还原为稳定的酶结合物第二节核酸探针

二、核酸探针的标记-非放射性同位素标记

1．酶标记核酸探针49

2．生物素标记核酸探针

生物素-UTP的结构示意图

第二节核酸探针

二、核酸探针的标记-非放射性同位素标记

50第二节核酸探针

三、标记探针的纯化和检测探针制备和标记时加入的dNTP是过量，除去游离标记物及其dNTP凝胶过滤层析法利用凝胶的分子筛作用乙醇沉淀法沉淀探针DNA51第二节核酸探针

三、标记探针的纯化和检测-同位素检测

1.放射自显影接触法液体乳胶法接触法

液体乳胶法52

1．偶联反应

2．显色反应

(1)酶促显色法

(2)荧光法

(3)化学发光法

非放射性探针检测示意图

第二节核酸探针

三、标记探针的纯化和检测-非放射性探针的检测

53第二节核酸探针

三、标记探针的纯化和检测-非放射性探针的检测

常用核酸探针的标记和检测标记分子标记方法检测方法[α32P]dNTPNT、PCR、RP放射自显影或计数[γ32P]dNTPTL放射自显影或计数35SNT放射自显影或计数3HNT放射自显影或计数Bio-11-dUTPNT、PCR、RP酶标亲和素或酶标光敏生物素可见光照射抗生物素抗体显色生物素化补骨脂素紫外线照射抗生物素抗体显色HRP戊二醛交联法或过碘酸钠法酶促底物显色FITC和罗丹明合成法荧光显微镜观察地高辛RP、NT酶标抗体+底物显色54第三节核酸分子杂交技术一、固相核酸分子杂交二、原位核酸分子杂交三、液相核酸分子杂交四、核酸分子杂交实验条件的优化

55分子杂交（hybridization）：样品核酸变性处理，在低温条件下，加入标记的核酸探针，探针与样品互补序列形成杂交双链，通过显示标记物或其它方法来检测特定的核酸片段固相杂交

探针

被测DNA（RNA）在固体支持物上杂交液相杂交

探针

被测DNA（RNA）在液体中杂交按照杂交的反应条件分为固相和液相杂交两类：第三节核酸分子杂交技术

56固相分子杂交：是将待测的靶核苷酸链预先固定在固体支持物上，然后放入含有标记探针的杂交液中，进行杂交反应后，使杂交分子留在支持物上，故称固体杂交。固体杂交的优点：未杂交的游离探针通过漂洗可容易除去，膜上的杂交分子容易检测，还能防止靶DNA的自我复性，所以被广泛应用。第三节核酸分子杂交技术

57分子杂交技术一般过程☆探针制备及标记（同位素或非同位素）☆待测核酸样品制备（分离，纯化）☆杂交（液相，固相，原位杂交）☆杂交后处理（去掉非特异杂交分子）☆显示结果（显色，发光，放射自显影）☆结果分析第三节核酸分子杂交技术

58核酸分子杂交技术类型

第三节核酸分子杂交技术

杂交类型检测目的及范围Southern印迹杂交检测经凝胶电泳分离且转移至膜上的DNA分子Northern印迹杂交检测经凝胶电泳分离且转移至膜上的RNA分子菌落杂交检测固定在膜上，经裂解从细菌体释放的DNA分子正向斑点杂交检测固定在膜上的DNA或RNA分子反向斑点杂交检测样品中的DNA或RNA分子微板杂交检测固定微板孔上的DNA或RNA分子原位杂交检测细胞或组织上的DNA或RNA分子59DNA变性中和Southern印迹预杂交杂交洗膜检测

第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-Southern印迹杂交

60

毛细管转移示意图第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-Southern印迹杂交

61电转移示意图第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-Southern印迹杂交

62Northern印迹(Northernblot)杂交是应用DNA探针检测特异mRNA的另一种膜上印迹技术是由Alwine于1977年建立的。后经Thomas等人改进主要用于分析mRNA分子大小及mRNA的转录情况第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-Northern印迹杂交63Northern印迹杂交流程图

第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-Northern印迹杂交64与Southern印迹杂交比较：RNA提取过程中需特别注意RNA酶的污染所用的器材最好与Southern印迹实验的分开使用RNA变性的方法：不能用碱变性，因为碱会水解RNA的2‘-羟基基团，在变性剂的存在下进行电泳,防止RNA分子形成发夹式的二级结构，以保持其单链线形状态第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-Northern印迹杂交65印迹前将含变性剂的凝胶用水冲洗掉，再印迹、杂交如果测定RNA片段大小，可在同一块胶上加分子量标记物一同电泳，之后将标记物切下、上色、照像，样品胶则进行Northern转印第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-Northern印迹杂交66斑点杂交（Dot－blot）是将待检样品（DNA、RNA或细胞）直接点到膜上，烘烤固定第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-斑点杂交（Dot-blot）67斑点杂交不需电泳和转膜过程，整个操作过程简便、快速但结果无法判断核酸片段的大小，也无法判断样品溶液中是否存在着不同的靶序列多用作核酸定性或半定量分析，而且便于杂交条件的摸索第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-斑点杂交（Dot-blot）68菌落杂交示意图第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-菌落杂交69举例利用RT-PCR-ELISA方法检测IL-6mRNA第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-微板酶联杂交70抽取人外周静脉血，EDTA抗凝，用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，用Trizol试剂盒提取单个核细胞总RNA，将总RNA逆转录为cDNA，然后用引物进行PCR扩增扩增产物热变性后与检测探针一起加入已包被捕获探针的微孔板内进行夹心杂交

第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-微板酶联杂交71DNA结合微孔板上包被的捕获探针与PCR产物的一条链进行杂交，检测探针则与此链的另一区域进行杂交夹心杂交后，加入亲合素-辣根过氧化物酶结合物及其底物四甲基联苯氨，显色，测量吸光度根据吸光度值的大小对IL-6mRNA进行半定量分析第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-微板酶联杂交72微板酶联夹心杂交动画流程NOS基团捕获探针PCR产物检测探针亲和素-HRP四甲基联苯氨氨基生物素第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-微板酶联杂交73捕获探针共价结合在微孔板上，不仅结合牢固而且结合量大，因而捕获能力很强捕获探针竖直地而不是平躺地“包被”在微孔板表面，因而与目的片段的杂交效率很高检测探针5’端、3’端均标记生物素，等量检测探针结合亲合素-辣根过氧化物酶的量增加第三节核酸分子杂交技术

一、固相杂交-微板酶联杂交74原位杂交（Insituhybridization）是以特定标记的已知序列的核酸分子作为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交并对其检测的方法第三节核酸分子杂交技术

二、原位杂交它属于固相分子杂交的范畴，但有别于其它任何固相核酸分子杂交技术75原位杂交技术除了具有核酸分子杂交的特异性高的特点之外，并可精确定位，因此该技术已广泛地应用于医学分子生物学的研究之中其应用有以下几方面：正常或异常染色体的基因定位应用核酸探针与细胞内RNA进行杂交用于检测该组织细胞中特定基因表达水平应用特异的病原体核酸作为探针对组织、细胞进行杂交，以检测有无该病原体的感染等第三节核酸分子杂交技术

二、原位杂交76石蜡包埋组织切片冰冻切片细胞涂片培养细胞爬片第三节核酸分子杂交技术

二、原位杂交-原位杂交材料77细胞或组织切片的处理玻片清洗组织和细胞的固定增强组织的通透性和核酸探针的穿透性预杂交杂交杂交后漂洗结果检测第三节核酸分子杂交技术

二、原位杂交-基本方法78荧光原位杂交（fluorescencein-situhybridization,FISH）是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术第三节核酸分子杂交技术

二、原位杂交-荧光原位杂交多色荧光原位杂交79生物素标记探针与荧光素标记的抗生物素抗体地高辛标记的抗体与荧光素标记的抗地高辛抗体氨乙酰基荧光（aminoacetylfluroence,AAF）-改良探针与抗AAF抗血清等上述的检测系统有直接法和间接法两种，后者灵敏度更高第三节核酸分子杂交技术

二、原位杂交-荧光原位杂交80FISH基因定位第三节核酸分子杂交技术

二、原位杂交-荧光原位杂交81吸附杂交磁珠吸附杂交亲和吸附杂交羟基磷灰石吸附杂交发光液相杂交能量的传递法丫啶翁酯标记法第三节核酸分子杂交技术

三、液相杂交82检测靶单个碱基改变选用寡核苷酸探针；在检测单链靶序列选用与其互补的DNA单链探针或RNA探针。长的双链DNA探针特异性较强，适宜检测复杂的靶核苷酸序列和病原体；100bp左右的探针适合原位杂交。第三节核酸分子杂交技术

四、杂交条件优化-探针的选择

83在检测单拷贝基因序列时，应选用标记效率高、显示灵敏的探针标记方法；在对灵敏要求不高时，可采用保存时间长的生物素探针技术和价廉的HRP显示系统等。第三节核酸分子杂交技术

四、杂交条件优化-探针的标记方法84随探针浓度增加，杂交率也增加，在较窄的范围内，随探针浓度增加，敏感性增加；膜杂交中32P标记探针与非放射性标记探针的用量分别为5～10ng/ml和25～1000ng/ml；原位杂交中，一般各种标记探针，其用量均为0.5～5.0μg/ml。第三节核酸分子杂交技术

四、杂交条件优化-探针的浓度85杂交技术最重要的因素之一是选择最适的杂交反应温度。若反应温度低于Tm10～15℃，碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链，错配对减少；一般情况下，在不含变性剂甲酰胺时，大多数杂交反应在65℃进行，当含50%甲酰胺时，在42℃进行

Tm值与(G+C)含量、探针的长度、复杂性、杂交体系中离子强度及甲酰胺的含量有关。下面的经验公式可以帮助较准确的估计Tm值：Tm=81.5℃+16.6IgM+0.41(G+C)%-500/n-0.61(甲酰胺％)，其中M为Na+摩尔浓度，n为探针的复杂性（没有重复序列时，复杂性即为探针的长度，单位为bp）。第三节核酸分子杂交技术

四、杂交条件优化-杂交最适温度86例一个长度为500bp的探针，(G+C)含量为55%，在含有5×SSC（0.75mol/LNa+）和50%甲酰胺的杂交体系中，其Tm值为Tm=81.5+(-2.07)+22.5-1-30.5=70.4℃，T=70.4-15~70.4-25=55.4~45.4℃；而对于寡核苷酸探针Tm值的估计，使用下列公式则更为方便：Tm=4℃×(G+C)+2℃×(A+T)第三节核酸分子杂交技术

四、杂交条件优化-杂交最适温度87杂交时间短了，反应无法完成；长了引起非特异结合增多。一般杂交反应要进行20h左右；杂交后的最终洗膜温度一般应低于Tm值5~12℃进行。第三节核酸分子杂交技术

四、杂交条件优化-反应时间和洗膜温度88第四节基因芯片一、基因芯片的原理二、基因芯片的制备三、基因芯片技术在医学领域的应用

89基因芯片(genechip)又称DNA芯片（DNAchip）或DNA微阵列（DNAmicroarray），将大量的基因片段有序地、高密度地排列在玻璃片或纤维膜等载体上，称之为基因芯片。该技术是建立在基因探针和杂交测序技术上的一种高效、快速的核酸序列分析手段。第四节基因芯片

一、基因芯片原理90第四节基因芯片

二、基因芯片制备其分析步骤可分为：芯片的制备样品处理杂交反应检测及数据处理91样品的扩增：在标记和分析前对样品进行适当程度的扩增，以提高阅读灵敏度；待测样品的标记：多采用荧光标记方法，对于阵列密度较小的基因芯片可以用同位素检测法。第四节基因芯片

二、基因芯片制备-样品的处理92cDNA基因芯片与靶基因的杂交过程与常规的分子杂交过程基本相同；用于检测基因表达，较长的杂交时间，高的严谨性，高的样品浓度和