GMP质量体系05、紫外分光光度法操作规程

____________________________________________________________________________________________________第3页共3页文件名称紫外分光光度法操作规程文件编号JB-TZ-005-A编制人编制日期年月日复制份数审核人审核日期年月日颁发部门质量管理部批准人批准日期年月日生效日期分发部门质检科、质保科、质量管理部编订依据《中华人民共和国药典》2000年版目的：建立一个紫外分光光度法试验操作规程。范围：物料检验。责任：检验员、质检科长、质保科长、质量总监。内容：分光光度法分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。常用波长范围为：（1）200~400nm的紫外光区，（2）400~760nm的可见光区，（3）2.5~25μm（按波数计为4000-1~400-1cm）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计，可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式：式中：A为吸收度；T为透光率；E为吸收系数，采用的表示方法是（），即吸收度换算成溶液浓度为1%（g/ml），液层厚度为1cm的吸收度数值；C为100mL中所含被测物质的重量，（按干燥品或无水物计算）g；L为液层厚度，cm。物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后，可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度，即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收，但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定，故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。紫外分光光度法文件名称紫外分光光度法操作规程文件编号JB-TZ-005-A1、仪器的校正和检定由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm与576.96nm，或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正，钬玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm、与637.5nm波长处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同会有微小的差别，使用时应注意。吸收度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在下表规定的波长处测定并计算其吸收系数。规定的吸收系数如下表，相对偏差可在±1%以内。波长，nm235257313350（最小）（最大）（最小）（最大）吸收系数124．5144．048．62106．6杂散光的检查可按下表的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在下表规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。试剂浓度%（g/ml）测定用波长nm透光率%碘化钠亚硝酸钠1.005.00220340<0.8<0.82、对溶剂的要求测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求；即用1cm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸收度，溶剂和吸收池的吸收度，在220—240nm范围内不得超过0.40；在241—250nm范围内不得超过0.20；在251—300nm范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过0.05。3、测定法测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±1nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸收度最大的波长作为测定波长。一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3—0.7之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度会偏低；狭缝宽度的选择应以减小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。文件名称紫外分光光度法操作规程文件编号JB-TZ-005-A用作鉴别和检查项目的方法，分别按各品种项下的方法进行。鉴别项下吸收度读数的范围可根据配制供试液时稀释倍数及制剂的实际含量确定。用于含量测定的方法一般有以下几种：（1）对照品比较法按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的100±10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度：Cx=(Ax/Ar)Cr式中Cx为供试品溶液的浓度；Ax为供试品溶液的吸收度；Cr为对照品溶液的浓度；Ar为对照品溶液的吸收度。（2）吸收系数法按各种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。（