GMP质量体系氯霉素滴耳液中间产品检验操作规程

目的：为检验氯霉素滴耳液中间产品规定一个标准的程序，以便获得准确的实验数据。范围：适用于氯霉素滴耳液中间产品的检验。职责：检验员，检验室主任对本规程实施负责。规程：1、性状：本品为微黄色的粘稠澄清液体，味极苦，能与水任意混合。2、鉴别：2.1试剂与仪器2.1.11%氯化钙溶液 2.1.2锌粉2.1.3苯甲酰氯2.1.4三氯化铁2.1.5氯仿2.1.6乙醇2.1.7氯霉素标准品2.1.8电子天平(万分之一克)2.1.9氯仿一甲醇(85:15)2.1.10氯霉素二醇物对照品2.1.11硅胶GF254薄层板2.1.12紫外光灯2.1.13层析缸2.1.14量筒2.1.15烧杯2.1.16容量瓶2.1.17单、双标移液管2.2项目与步骤2.2.1显色鉴别：取本品4ml，加1%氯化钙溶液3ml与锌粉50mg，置水浴上加热10分钟，倾取上清液，加苯甲酰氯约0.1ml，立即强烈振摇1分钟，加三氯化铁试液0.5ml与氯仿2ml，振摇，水层显紫红色。2.2.2薄层色谱法鉴别取本品20ml，用氯仿提取4次，每次25ml，合并提取液，置水浴上蒸干，取残渣与氯霉素标准品各20mg分别置10ml容量瓶中，分别加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，按薄层色谱法按(SOP-QC-304-00)，分别吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿一甲醇(85:15)为展开剂，展开约10cm后，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品溶液所显主斑点的位置与标准品溶液的主斑点应相同。3检查3.1试剂与仪器3.1.1乙醇3.1.2氯霉素二醇物对照品.3.1.3硅胶GF254薄层板3.1.4氯仿一甲醇(85:15)3.1.5层析缸3.1.6电子天平(万分之一克)3.1.7紫外光灯3.1.8微量注射器(50ul)3.1.9注射器(10ml已标化)3.2项目与步骤3.2.1二醇物：取本品，加乙醇制成每1ml中含1.25mg的溶液，作为供试品溶液；另精密称取氯霉素二醇物对照品20mg置10ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。照薄层色谱法(SOP-QC-304-00)检验，吸取上述两种溶液各20ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿一甲醇(85:15)为展开剂，展开约10cm后，晾干，置紫外灯(254nm)下检视，供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其荧光强度与对照品溶液的主斑点比较，不得更强(5%)为符合规定。4其他项目与实验步骤4.1试剂与仪器4.1.1注射器(标化)4.1.2量筒(50ml)4.2.1装量：取供试品5支，按最低装量检查法(SOP-QC-332-00)，检查每个容器内容物装量，并求出平均装量，应符合规定。如有1个容器装量不符合规定，则另取5支复试，应全部符合规定。5含量测定：精密量取本品约相当于氯霉素25mg，置25ml容量瓶中，用灭菌水稀释刻度，摇匀，照抗生素微生物检定法（SOP-QC-339-00）操作。5.1试剂与仪器5.1.1培养基II(6.5-6.6)5.1..2磷酸盐缓冲液(PH6.0)5.1.3藤黄微球菌悬液5.1.4刻度移液管5.1.5容量瓶(50ml,100ml)5.1.6灭菌刻度吸管.5.1.7双碟5.1.8陶瓦盖5.1.9钢管5.1.10电热隔水培养箱5.1.11称量瓶5.1.12灭菌滴管5.1.13电子天平(万分之一克)5.1.14CHB-1抗生素效价测量仪5.1.15超净工作台5.1.16钢管放置器5.1.17酒精灯5.1.18三角烧瓶(100ml，150ml)5.1.19量筒(50ml)5.1.20接种棒5.1.21镊子5.1.22氯霉素标准品6.2检验步骤6.2.1培养基的制备：称取抗生素检定培养基II(PH6.5-6.6)28.5g，加1L蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌30分钟。6.2.2磷酸盐缓冲液(PH6.0)制备：称取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g，加水使成1000ml，滤过，经121℃蒸气灭菌30分钟，备用。6.2.3滕黄微球菌悬液制备:取藤黄微球菌工作菌种的营养琼脂斜面培养物，用1ml培养基Ⅲ将菌苔洗下，用吸管移至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶中，将菌液布满培养基表面，将培养瓶反放于培养箱中在26～27℃培养24小时后，取出，用吸管吸取培养基Ⅲ5ml至培养瓶中，将菌苔洗下，合并菌液至灭菌大管中备用，菌液在冰箱中保存，可使用1～2日。6.2.4标准品溶液的制备：6..2.4.1将标准品从冰箱取出，使与室温平衡，准确称取氯霉素标准品约25mg，置25ml容量瓶中，加乙醇2.5ml溶解，用灭菌水稀释至刻度，备用。6.2.4.2高剂量标准品的制备：精密吸出6.2.4.1制备的标准溶液3ml置50ml容量瓶中，用磷酸盐缓冲液PH（6.0）稀释至刻度，备用。6.2.4.3低剂量标准品的制备：精密吸出6.2.4.1制备的标准溶液3ml，置100ml容量瓶中，用磷酸盐缓冲液(PH6.0)稀释至刻度，备用。6.2.5样品溶液的制备：6.2.5.1取样品10支混合，精密吸取样品10ml置25ml容量瓶中，加灭菌水稀释至刻度，备用。6.2.5.2高剂量样品溶液的制备：精密吸取6.2.5.1制备的样品溶液3ml，置50ml容量瓶中，用磷酸盐缓冲液(PH6.0)稀释至刻度，备用。6.2.5.3低剂量样品溶液的制备：精密吸取6.2.5.1制备的样品溶液3ml，置100ml容量瓶中，用磷酸盐缓冲液(PH6.0)稀释至刻度，备用。6.2.6双碟的制备：按抗生素微生物检定法(SOP-QC-339-00)操作。6.2.7小钢管的放置：按抗生素微生物检定法(SOP-QC-339-00)操作。6.2.8滴碟、培养与测量：按抗生素微生物检定法(SOP-QC-339-00)操作。7记录与计算：用电脑测试，计算、统计分析的打印纸附于记录后。本品含氯霉素(C11H12L2N2O5)不得少于标示量的85.0%为符合规定。PT=P×按下式计算氯霉素的最终效价:PT为样品