循环肿瘤细胞检测在肺癌中的应用

循环肿瘤细胞检测在肺癌中的应用第一页，共三十六页，2022年，8月28日肿瘤疾病近期疗效的判断方法第二页，共三十六页，2022年，8月28日临床因子作为预后与预测因子预后：T,N,Mstaging,PSscore预测：吸烟状况：指导靶向治疗性别：指导靶向治疗种族：指导靶向治疗组织学：指导化疗和靶向治疗第三页，共三十六页，2022年，8月28日影像学方法非侵入地、直观地对患者的肿瘤大小变化情况进行评估。缺点：存在一定的健康危害或健康隐患肿瘤大小常与肿瘤的恶性程度或浸润能力不完全一致费用昂贵滞后性灵敏性低第四页，共三十六页，2022年，8月28日病理学方法手术或活检获得病灶组织/周围淋巴结组织，进行病理学染色和分析，是目前唯一明确肿瘤有否转移的金标准缺点：精确度不够高是侵入性检查手段易造成扩散人工误差大难以标准化第五页，共三十六页，2022年，8月28日血清肿瘤标记物测定血清肿瘤标志物的浓度往往可以在一定程度上提示肿瘤的发展程度缺点：特异性不高易受非特异蛋白的干扰其他的病理生理状态影响导致假阳/阴性结果

第六页，共三十六页，2022年，8月28日1869年AustMedJ，Ashworth最早在转移性癌症患者血液中观察到。2005年NEnglJMed，Cristofanilli证实治疗前CTC数目是转移性乳腺癌患者无进展生存期和总生存期的独立预测因子。循环肿瘤细胞指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环的肿瘤细胞。循环肿瘤细胞原发肿瘤血管生成侵润侵入血管内侵入血管外

(CTC)血管内增殖

(CTM)转移转移播散肿瘤细胞（DTC）微转移休眠灶循环肿瘤细胞（CTC）循环肿瘤

微栓（CTM）凋亡的CTC侵润肿瘤细胞

扩增血管生成上皮－间质转化（EMT）间质－上皮转化（MET）转移到骨髓和其他器官第七页，共三十六页，2022年，8月28日CTC检测预测PFS及OS指示预后效果复发转移预测与分期有助于肿瘤个体化治疗的药物筛选和治疗方案的确定是传统的影像学及其他生物标志物的补充检测手段有助于寻找新的肿瘤标识物以及开发新的抗肿瘤药物第八页，共三十六页，2022年，8月28日肿瘤细胞作为生物标志物外周血和肺静脉血中的循环肿瘤细胞（CTCs）临床意义:转移的辅助标志物？可以预测治疗？预后因子？最小损伤的突变检测?第九页，共三十六页，2022年，8月28日获取CTC需要解决的技术问题从红细胞和白细胞中富集恶性肿瘤细胞

将恶性肿瘤细胞与红细胞、白细胞、正常上皮细胞、造血干细胞等区分开来每10mL血液中可能仅含有几个到几十个循环肿瘤细胞，而10mL血液中含有的白细胞约有1亿个，红细胞有500亿个。第十页，共三十六页，2022年，8月28日三种技术过滤法ISET:

IsolationbySizeofEpithelialTumorcells8μm孔径过滤膜，漏检体积较小的肿瘤细胞敏感性低梯度密度法肿瘤细胞和单核细胞密度小于1.077g/mlCTC纯度低，混入较多白细胞肿瘤细胞会迁移至血浆层，而聚集后容易下沉聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)对细胞有毒性免疫磁珠法肿瘤细胞表面抗原CTC纯度低，混入较多白细胞不能有效排除细胞碎片假阳性和假阴性高CellSearch免疫磁珠+流式细胞分析+化学发光第十一页，共三十六页，2022年，8月28日CellSearch是全球第一也是唯一经FDA批准可用于临床的循环肿瘤细胞（CTC）产品1983磁流体第十二页，共三十六页，2022年，8月28日JClinOncol.2011Apr20;29(12):1556-63.Epub2011Mar21.

Evaluationandprognosticsignificanceofcirculatingtumorcellsinpatientswithnon-small-celllungcancer.1肺癌是最常见的原发性恶性肿瘤，85%的肺癌患者为非小细胞肺癌，大多数患者发现时已是晚期，其5年生存率只有2%。2目前，仍然缺乏有效的生物标记物预测治疗的有效性。CTC是一个潜在的疗效预测因子。3验证能否在NSCLC患者中检测出CTC及CTC能否预测治疗有效性。背景第十三页，共三十六页，2022年，8月28日实验流程病人入组基线CTC检测化疗一个疗程CTC检测统计分析第十四页，共三十六页，2022年，8月28日患者入组标准未做过化疗，且4周内未做过放疗病理学确诊为非小细胞肺癌IIIA,IIIB,IV期准备进行标准的细胞毒疗法5年内未患过恶性肿瘤实验方法CellSave专用收集管采集血液采集血后于室温储存并于96小时内进行检测Cellsearch系统进行检测第十五页，共三十六页，2022年，8月28日患者化疗前CTC数量（基线CTC）与临床特征的关系IV期患者CTC数量明显多于IIIB期患者，IIIB期患者的CTC数量又明显多于IIIA期患者。第十六页，共三十六页，2022年，8月28日肝转移及骨转移患者中CTC数量明显多于其它转移患者。患者化疗前CTC数量与肿瘤转移地点的关系第十七页，共三十六页，2022年，8月28日所有非小细胞肺癌病人所有Ⅳ期非小细胞肺癌病人基线CTC数量与无进展生存期和总生存期的关系基线CTC数量少于5的患者无进展生存期和总生存期明显高于基线CTC数量大于等于5的患者。第十八页，共三十六页，2022年，8月28日化疗前后CTC数量与患者无进展生存期和总生存期的关系化疗后CTC数量少于5的患者无进展生存期和总生存期明显高于CTC数量大于5的患者。化疗前后CTC数量都少于5的患者无进展生存期和总生存期明显高于只有一次测出CTC数量少于5的患者。第十九页，共三十六页，2022年，8月28日化疗前后CTC的数量变化反映临床疗效化疗前化疗后化疗后CTC数量减少患者的临床疗效好于CTC数量增加的患者第二十页，共三十六页，2022年，8月28日结论CTC能在IV期非小细胞肺癌患者中检出CTC数量的变化反映了临床疗效CTC数量与OS和PFS相关，是非小细胞肺癌的一个新的预后判断因子第二十一页，共三十六页，2022年，8月28日CTC在判断是否存在转移中有重要参考价值对于原发性肺癌患者，CTC计数在有远处转移的肺癌患者中有显著升高，相关性优于CEA。第二十二页，共三十六页，2022年，8月28日CTC升高对于判断远处转移的敏感性达71%，特异性达83%CTC计数和血清CEA水平在不同切点的诊断价值第二十三页，共三十六页，2022年，8月28日治疗前和治疗后CTC的数量变化反映疗效大多数患者的CTC数量在第一个化疗疗程后（22天）下降，提示疗效好。第二十四页，共三十六页，2022年，8月28日TheAnnalsofThoracicSurgeryVolume87,Issue6,June2009,Pages1669-1675

CirculatingTumorCellsinPulmonaryVenousBloodofPrimaryLungCancerPatients鳞癌中periCTC和pvCTC的数量明显高于腺癌第二十五页，共三十六页，2022年，8月28日NEnglJMed2008;359:366-77.

DetectionofMutationsinEGFRinCirculatingLung-CancerCells1吉非替尼是较好地治疗非小细胞肺癌的靶向药物，但是EGFR的基因型决定了药物的治疗效果。2目前，检测EGFR的基因型需要选取患者的肿瘤组织，找到一种非侵入性的方法检测EGFR迫在眉睫。3验证能否在CTC中检测EGFR的基因型，且与药物疗效相关。背景第二十六页，共三十六页，2022年，8月28日CTC中EGFR突变与肿瘤组织中EGFR突变的一致性（SARMS方法）CTC中EGFR基因型有17个与肿瘤组织中的一样，准确率为94%，第二十七页，共三十六页，2022年，8月28日CTC数量与病情进展的关系吉非替尼治疗后CTC数量下降，伴随着疾病进展CTC数量也随之上升。肿瘤大的患者CTC数量比肿瘤小的患者多。CTC数量影像学肿瘤变化第二十八页，共三十六页，2022年，8月28日检测CTC中EGFR的基因型与组织中检测结果高度符合可以通过CTC来检测非小细胞肺癌患者肿瘤的基因型CTC数量与疾病进展密切相关结论第二十九页，共三十六页，2022年，8月28日小细胞肺癌患者活检组织及相对应的CTC中的CD56活检组织中的CD56和CTC中的CD56表达具有一致性肺癌组织肺癌肝转移组织第三十页，共三十六页，2022年，8月28日BaselinebloodCAC肿瘤细胞a,monosomy6p11-q12;b,amplificationEGFR,c-MYC;EGFR(red)5.p15.3(green),6p11-q12(aqua),c-MYC(yellow).c,trisomyCEP3andmonosomyCEP17;d,polysomyCEP3,CEP7,CEP17and9p21.3.CEP3(red),CEP7(green),CEP17(aqua),9p21.3(yellow).外周循环肿瘤细胞的异常情况与手术切除的肿瘤细胞具有高度一致性。BaselinebloodCTC肿瘤细胞第三十一页，共三十六页，2022年，8月28日CTC中的染色体异常分子标记物与疾病的复发和生存密切相关第三十二页，共三十六页，2022年，8月28日CTC计数CTC的分子特性指示预后辅助检测抗癌药物的反应——作为预测和/或药物动力学生物标志物联合已知的分期因素，获取更精确的预后判断病人是否需要辅助化疗检测癌症复发辅助诊断实时活检——肿瘤的生物学行为阐明预后和预计的分子学特征检测抗药情况——基于获得连续样本的便利性提高对生物过程机制的了解发现并鉴定新治疗靶点CTC的应用：从细胞计数到分子特性第三十三页，共三十六页，2022年，8月28日FISH分析C